Name: Vejiga ratón pared de inyección (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-07-12T12:00:00.000+00:00
Duration: 3 min 48 s
Description: Aprende la técnica microquirúrgica para inyectar células en la pared de la vejiga de ratón. Este método permite una localización precisa del implante celular, superando las limitaciones de las técnicas tradicionales para estudiar células madre y cáncer de vejiga.

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1. Vejiga ratón pared de inyección Elección de la cepa del ratón, la edad y el sexo está determinado por las necesidades experimentales. Nosotros usamos ratones de entre 8 y 12 semanas de edad, ya que esta es una ventana de madurez inmunológica antes de la senescencia. Como pauta general, los ratones deben llegar por lo menos una semana antes de la manipulación experimental con el fin de evitar la tensión inducida por factores de confusión. <ol><li> Limpie la superficie de la mesa quirúrgica con agua y jabón. </li><li> Limpie la superficie de la mesa quirúrgica con Golpes Cide o toallitas antisépticas. </li><li> Autoclave de limpiar el instrumental quirúrgico antes de su uso en la cirugía. </li><li> Además, esterilizar los instrumentos quirúrgicos con esterilizador de cuentas caliente inmediatamente antes de su uso, así como entre los animales durante la cirugía. </li><li> Limpie 100 L jeringas Hamilton y 29 o calibre 30 (1 / 2 pulgada de largo) por agujas de inyección y aspiración repetida con alcohol absoluto antes del primer uso y al final de la intervención quirúrgica definitiva. </li><li> Lavar y enjuagar las jeringas esterilizadas Hamilton con tampón fosfato salino entre cada animal. </li><li> Anestesiar a los ratones, colocándolos en una cámara de inducción con isoflurano, con el conjunto de isoflurano entre 2-5%. </li><li> Una vez que la anestesia general se consigue quitar el ratón de la cámara y colocar en posición supina, con una compresa caliente debajo para ayudar a mantener la temperatura corporal normal. </li><li> Conseguir una anestesia de mantenimiento mediante la colocación de hocico del animal en una boquilla que contiene vaporizar isoflurano (titulado de 1-3% según sea necesario para mantener la anestesia adecuada). </li><li> Afeitarse la piel del abdomen con una maquinilla. </li><li> Use un paño desechable quirúrgica estéril para cubrir el ano para evitar la contaminación fecal durante la cirugía. </li><li> Use un segundo paño desechable quirúrgica estéril para cubrir el campo quirúrgico (parte inferior del abdomen). </li><li> Preparación del abdomen con tres piezas de gasa empapada en Betadine. Repita este paso tres veces. </li><li> Utilizando un microscopio de disección para la ampliación, hacer una incisión en línea media abdominal inferior con unas tijeras. </li><li> Exponer la vejiga. </li><li> Si la vejiga está llena, parcialmente descomprimirlo por una suave presión hacia abajo en la cúpula. </li><li> Inyectar la solución de la muestra (hasta 50 l), utilizando una aguja de calibre 29 o 30 y una jeringa, en la pared de la cúpula de la vejiga (inyección intramural) con el bisel de la aguja hacia arriba. </li><li> Empuje el émbolo de la jeringa para inyectar la solución de la muestra en la pared de la vejiga. Una ampolla bien localizada es un indicador del éxito de la inyección de las células en la pared de la vejiga. </li><li> Retire la jeringa, cerca de la incisión con grapas de la herida y permitir que el ratón para recuperar en un cojín de calentamiento. </li></ol> 2. Los resultados representativos: Una ampolla bien localizadas que no pierden líquido y se mantiene estable en el tamaño es un indicador de éxito de la inyección de las células en la pared vesical (Figura 1). El análisis histológico se puede realizar para confirmar la presencia de las células inyectadas en la pared de la vejiga. <img src="/files/ftp_upload/2523/2523fig1.jpg" alt="Figura 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 1"> Figura 1. Ejemplo de inyección de éxito pared de la vejiga usando tinta china para la ilustración. <img src="/files/ftp_upload/2523/2523fig2.jpg" alt="Figura 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 2"> Figura 2. Esquema de los procedimientos experimentales.

<ol><li>Dinney, C. P., Fishbeck, R., Singh, R. K., Eve, B., Pathak, S., Brown, N., Xie, B., Fan, D., Bucana, C., Fidler, I. J., Killion, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+Characterization+of+Metastatic+Variants+from+Human+Transitional+Cell+Carcinoma+Passaged+by+Orthotopic+Implantation+in+Athymic+Nude+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Urology%22%5BJournal%5D)">Isolation and Characterization of Metastatic Variants from Human Transitional Cell Carcinoma Passaged by Orthotopic Implantation in Athymic Nude Mice.</a> The Journal of Urology. 154, 1532-1538 (1995).</li>
<li>Singh, A. V., Franke, A. A., Blackburn, G. L., Zhou, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Soy+Phytochemicals+Prevent+Orthotopic+Growth+and+Metastasis+of+Bladder+Cancer+in+Mice+by+Alterations+of+Cancer+Cell+Proliferation+and+Apoptosis+and+Tumor+Angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Soy Phytochemicals Prevent Orthotopic Growth and Metastasis of Bladder Cancer in Mice by Alterations of Cancer Cell Proliferation and Apoptosis and Tumor Angiogenesis.</a> Cancer Res. 66, 1851-1858 (2006).</li>
<li>Yanagiuchi, A., Miyake, H., Nomi, M., Takenaka, A., Fujisawa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+the+Microenvironment+by+Growth+Factors+Regulates+the+In+Vivo+Growth+of+Skeletal+Myoblasts%5BTitle%5D)+AND+%22BJU+International%22%5BJournal%5D)">Modulation of the Microenvironment by Growth Factors Regulates the In Vivo Growth of Skeletal Myoblasts.</a> BJU International. 103, 1569-1573 (2009).</li>
<li>Miyake, H., Hara, I., Yamanaka, K., Gohji, K., Arakawa, S., Kamidono, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Overexpression+of+Bcl-2+Enhances+Metastatic+Potential+of+Human+Bladder+Cancer+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Cancer%22%5BJournal%5D)">Overexpression of Bcl-2 Enhances Metastatic Potential of Human Bladder Cancer Cells.</a> British Journal of Cancer. 79, 1651-1656 (1999).</li>
<li>Chancellor, M. B., Yokoyama, T., Tirney, S., Mattes, C. E., Ozawa, H., Yoshimura, N., Groat, W. C. de, Huard, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preliminary+Results+of+Myoblast+Injection+into+the+Urethra+and+Bladder+Wall%3A+a+Possible+method+for+the+Treatment+of+Stress+Urinary+Incontinence+and+Impaired+Detrusor+Contractility%5BTitle%5D)+AND+%22Neurourol+Urodyn%22%5BJournal%5D)">Preliminary Results of Myoblast Injection into the Urethra and Bladder Wall: a Possible method for the Treatment of Stress Urinary Incontinence and Impaired Detrusor Contractility.</a> Neurourol Urodyn. 19, 279-287 (2000).</li>
<li>Dinney, C. P., Tanguay, S., Bucana, C. D., Eve, B. Y., Fidler, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravesical+Liposomal+Muramyl+Tripeptide+Phosphatidylethanolamine+Treatment+of+Human+Bladder+Carcinoma+Growing+in+Nude+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Interferon+Cytokine+Res%22%5BJournal%5D)">Intravesical Liposomal Muramyl Tripeptide Phosphatidylethanolamine Treatment of Human Bladder Carcinoma Growing in Nude Mice.</a> J Interferon Cytokine Res. 15, 585-592 (1995).</li>
<li>Mohamedali, K. A., Kedary, D., Sweeney, P., Kamaty, A., Davisy, D. W., Evey, B. Y., Huangy, S., Thorpez, P. E., Dinney, C. P., Rosenblum, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Vascular-targeting+Fusion+toxin+VEGF121%2FrGel+Inhibits+the+Growth+of+Orthotopic+Human+Bladder+Carcinoma+Tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Neoplasia%22%5BJournal%5D)">The Vascular-targeting Fusion toxin VEGF121/rGel Inhibits the Growth of Orthotopic Human Bladder Carcinoma Tumors.</a> Neoplasia. 7, 912-920 (2005).</li>
<li>Slaton, J. W., Perrotte, P., Inoue, K., Dinney, C. P., Fidler, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interferon-%CE%B1-mediated+Down-Regulation+of+Angiogenesis-related+Genes+and+Therapy+of+Bladder+Cancer+Are+Dependent+on+Optimization+of+Biological+Dose+and+Schedule%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Interferon-α-mediated Down-Regulation of Angiogenesis-related Genes and Therapy of Bladder Cancer Are Dependent on Optimization of Biological Dose and Schedule.</a> Clinical Cancer Research. 5, 2726-2734 (1999).</li>
<li>Yokoyama, T., Huard, J., Pruchnic, R., Yoshimura, N., Qu, Z., Cao, B., De Groat, W. C., Kumon, H., Chancellor, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Muscle-Derived+Cell+Transplantation+and+Differentiation+into+Lower+Urinary+Tract+Smooth+Muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Urology%22%5BJournal%5D)">Muscle-Derived Cell Transplantation and Differentiation into Lower Urinary Tract Smooth Muscle.</a> Urology. 57, 826-831 (2001).</li>
<li>Chan, E., Patel, A., Heston, W., Larchian, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+Orthotopic+Models+for+Bladder+Cancer+Research%5BTitle%5D)+AND+%22BJU+International%22%5BJournal%5D)">Mouse Orthotopic Models for Bladder Cancer Research.</a> BJU International. 104, 1286-1291 (1988).</li>
<li>Russell, P. J., Jelbart, M., Wills, E., Singh, S., Wass, J., Witherspoon, J., Raghavan, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+and+characterization+of+a+new+human+bladder+cancer+cell+line+showing+features+of+squamous+and+glandular+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Cancer%22%5BJournal%5D)">Establishment and characterization of a new human bladder cancer cell line showing features of squamous and glandular differentiation.</a> Int. J. Cancer. 41, 74-74 (1988).</li>
<li>Ahlering, T. E., Dubeau, L., Jones, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+in+vivo+model+to+study+invasion+and+metastasis+of+human+bladder+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">A new in vivo model to study invasion and metastasis of human bladder carcinoma.</a> Cancer Res. 41, 6660-6660 (1987).</li>
<li>Heaney, J. A., Omellas, E. P., Daly, J. J., Lin, J. C., Rout, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+growth+of+human+bladder+cancer+cell+lines%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Urol%22%5BJournal%5D)">In vivo growth of human bladder cancer cell lines.</a> Invest. Urol. 15, 380-380 (1978).</li>
<li>Hadaschik, B., Black, P., Sea, J., Metwalli, A., Fazli, L., Dinney, C., Gleave, M., So, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+validated+mouse+model+for+orthotopic+bladder+cancer+using+transurethral+tumor+inoculation+and+bioluminescence+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22BJU+International%22%5BJournal%5D)">A validated mouse model for orthotopic bladder cancer using transurethral tumor inoculation and bioluminescence imaging.</a> BJU International. 100, 1377-1384 (2007).</li>
</ol>

Vejiga ratón inyección de pared permite la implantación de células específicas en áreas definidas de la pared de la vejiga. Esta técnica tiene amplias aplicaciones para los modelos de ratón de cáncer de vejiga, el músculo liso, y la biología de células madre. Por definición, la vejiga ratón inyección de pared facilita la introducción de cáncer de vejiga o de células madre en un lugar ortotópico de modo que su crecimiento y la diferenciación puede ser estudiado en un contexto anatómico fisiológicamente relevantes. De hec...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nombre del reactivo </td><td> Empresa </td><td> Número de catálogo </td></tr><tr><td> Isoflurano (Aerrane) </td><td> Baxter </td><td> NDC 10019-773-60 </td></tr><tr><td> 29 ó 30 agujas de calibre </td><td> Hamilton </td><td> 7803-06 o 7803-07 </td></tr><tr><td> 100 microlitros jeringa </td><td> Hamilton </td><td> 7656-01 </td></tr></tbody></table>

vejiga ratón pared de inyección

Mouse Bladder Wall Injection

Vejiga ratón inyección de pared es una técnica útil para estudiar los fenómenos ortotópicamente vejiga, incluyendo células madre del músculo liso, y la biología del cáncer. Antes de comenzar las inyecciones, el área quirúrgica se debe limpiar con agua y jabón y solución antiséptica. Equipo quirúrgico debe ser esterilizado antes de su uso y entre cada animal. Cada ratón se coloca debajo de la anestesia con isoflurano inhalado (2-5% para la inducción, el 1-3% para el mantenimiento) y su vejiga expuesta al hacer una incisión abdominal con unas tijeras. Si la vejiga está llena, es parcialmente descomprimido suave apretar con dos dedos. La suspensión de células de interés es intramural se inyecta en la pared de la cúpula de la vejiga usando una aguja de calibre 29 o 30 cc y una jeringa o menor. La herida se cerró con clips de la herida y el ratón les permitió recuperarse en un cojín de calentamiento. Inyección de pared de la vejiga es una técnica de microcirugía delicada que se puede dominar con la práctica.

Vejiga ratón inyección de pared es un enfoque útil para el estudio de células de vejiga ortotópicamente madre y la biología del cáncer. Este método de microcirugía delicada se puede dominar con una técnica cuidadosa y práctica.

Vejiga ratón pared de inyección

La inyección en la pared vesical de ratón es una técnica útil para estudiar de forma ortotópica los fenómenos de la vejiga, incluyendo la biología de las células madre, del músculo liso y del cáncer. ...

El objetivo general de este procedimiento es introducir células en áreas definidas de la pared de la vejiga. Esto se logra primero realizando una incisión abdominal para exponer la vejiga. El siguiente paso del procedimiento consiste en insertar el bisel de la aguja intramuralmente.El paso final del procedimiento consiste en presionar el émbolo de la jeringa para inyectar las células de interés en la pared de la vejiga. El implante exitoso de células se caracteriza por la formación de una bleb bien localizada que no presenta fugas de líquido y mantiene estable su tamaño. La principal ventaja de esta técnica frente a métodos existentes, como la inoculación transuretral de células en ratones, es que permite dirigir el lugar donde las células se implantarán dentro de la vejiga.La demostración visual del músculo li es fundamental, ya que las inyecciones son difíciles de aprender. Conocer el ángulo correcto y la posición de entrada de la aguja en la vejiga es esencial para el éxito de la técnica. Seleccione la edad, el sexo y la cepa de los ratones según las necesidades del experimento aquí.Se utilizan ratones de ocho a doce semanas de edad para comenzar a limpiar la superficie de la mesa quirúrgica con agua y jabón. A continuación, se limpia la superficie de la mesa quirúrgica con toallitas laterales o toallitas antisépticas. Los instrumentos quirúrgicos deben esterilizarse en un autoclave antes de la cirugía.Limpie los instrumentos con etanol al 70 % justo antes de usarlos y vuelva a esterilizarlos con un esterilizador de perlas calientes entre cirugías individuales. Limpie una jeringa Hamilton de 100 microlitros conectada a una aguja de calibre 30 mediante aspiraciones repetidas de alcohol absoluto, seguidas de solución salina tamponada con fosfato esterilizada. Coloque un animal anestesiado en posición supina sobre una almohadilla tibia para ayudar a mantener la temperatura corporal normal.Mantenga un nivel suficiente de anestesia colocando el hocico del animal en una boquilla que contiene isoflurano vaporizado. A continuación, retire el vello de la piel abdominal con una máquina de afeitar. Utilice un campo quirúrgico estéril desechable para cubrir el ano y prevenir la contaminación fecal durante la cirugía.Coloque un segundo campo quirúrgico sobre el abdomen inferior y exponga una ventana quirúrgica. Esterilice el sitio quirúrgico mediante aplicaciones repetidas de Betadine y alcohol utilizando un microscopio estereoscópico para ampliación. Realice una incisión abdominal media inferior con tijeras.Use presión suave sobre el abdomen para exponer la vejiga. Dado que la vejiga suele estar parcial o completamente llena, la presión sobre el abdomen desplazará preferentemente otros órganos y permitirá que la vejiga emerja a través de la incisión. Si la vejiga está llena, aplique presión suave hacia abajo en el domo para descomprimirla parcialmente.Llene la jeringa estéril de Hamilton con 50 microlitros de la solución de muestra. Introduzca la punta de la aguja con el bisel hacia arriba en la pared de la vejiga e inyecte la solución de muestra. Una inyección exitosa se caracteriza por una bleb bien localizada que no presenta fugas de líquido y mantiene un tamaño estable.Después de la inyección, cierre la incisión con clips quirúrgicos. Permita que el animal se recupere sobre una almohadilla calefactora. Este procedimiento puede realizarse en 10 a 15 minutos si se lleva a cabo correctamente.El éxito puede confirmarse mediante análisis histológico de la vejiga en puntos de tiempo sucesivos tras la inyección.

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