Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Técnicas biológicas
0 visualizaciones • 3:55 min. • July 8th, 2025
La interacción física entre dos proteínas asociadas modula los mecanismos biológicos posteriores.
Para detectar interacciones proteína-proteína utilizando el ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas, ELISA, tome una placa de inmunoensayo de pocillos múltiples. Agregue un tampón de recubrimiento que contenga una de las proteínas que interactúan, la proteína del cebo, e incube. Las proteínas del cebo se adsorben en la superficie del pozo a través de interacciones hidrofóbicas no específicas.
Deseche la solución gastada y lave la placa con un tampón para eliminar las proteínas no unidas. Agregue una solución de bloqueo e incube, permitiendo que las moléculas del agente de bloqueo de la solución bloqueen los sitios de unión no específicos en la superficie del pocillo.
Agregue la proteína asociada que interactúa, la proteína de presa, etiquetada con residuos de histidina para una fácil cuantificación. Incubar, permitiendo que la proteína de la presa se una específicamente a su compañero interactivo: el cebo. Agregue una solución de anticuerpos anti-histidina conjugados con enzimas peroxidasa de rábano picante que se unen a la presa, formando un complejo cebo-presa-anticuerpo.
Pipetear u
Vea la transcripción completa y acceda a miles de videos científicos