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DOI: 10.3791/51078-v
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Se describe un protocolo para medir la producción de citoquinas antivirales en ratones infectados con un virus herpes modelo, murino herpesvirus gamma 68 (γ HV68) que está relacionado con estrechamente a sarcoma de herpesvirus asociado de Kaposi humano (VHSK) y virus de Epstein-Barr (EBV). La utilización de cepas de ratones genéticamente modificados y los fibroblastos de embriones de ratón (MEFs), se evaluó la producción de citocina antiviral tanto in vivo como ex vivo. "Reconstituir" la expresión de los componentes inmunes innatas en eliminatorias fibroblastos embrionarios de transducción lentiviral, Señalamos además moléculas inmunes innatas específicas y diseccionar los eventos de señalización clave que regulan diferencialmente la producción de citocina antiviral.
El objetivo general del siguiente experimento es diseccionar las moléculas inmunitarias innatas clave del huésped que regulan la producción de citocinas antivirales tras la inyección del virus del herpes gamma 68 o gamma HV 68. Esto se logra comparando citocinas antivirales, secretadas por Mavs inyectados con gamma HV 68 en ratones salvajes y ratones knockout. El segundo paso es cuantificar las citocinas producidas por las células Mavs Wild Type y Mavs knockout MEF después de la infección por gamma HV 68, lo que confirma que Mavs se utiliza para suprimir la secreción de citocinas antivirales.
El siguiente paso es restaurar las células MEF Mavs y Mavs knockout para evaluar si los niveles de expresión de citoquinas son rescatados por los Mavs exógenos. Se obtienen resultados que muestran que Gamma HV 68 secuestra a Mavs, un componente de señalización inmune innata clave para anular la producción de citocinas antivirales in vivo y ex vivo según el análisis de Western blot. Eliza y Q-R-T-P-C-R en ratones Mavs de tipo salvaje y knockout y las correspondientes células MEF.
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