Ensayo bactericida en suero para la actividad bactericida mediada por el complemento de los anticuerpos
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Inmunología
0 visualizaciones • 5:40 min. • July 8th, 2025
Tome una muestra de suero diluida en serie que contenga anticuerpos monoclonales contra lipopolisacáridos o LPS, un componente de la membrana externa de las bacterias gramnegativas.
Introducir bacterias gramnegativas. Los anticuerpos séricos se unen al LPS bacteriano.
Agregue proteínas complementarias. El complejo C1 se une a los anticuerpos unidos a LPS, formando un C1 enzimáticamente activo.
El C1 activado escinde C4 y C2 para formar la convertasa C3, que escinde el C3 para formar la convertasa C5. La convertasa escinde C5 para producir C5b, que recluta C6 y C7. El complejo resultante se inserta en la membrana externa y se asocia con C8 y C9 múltiple, formando un poro.
El daño de la membrana externa desestabiliza la membrana interna, causando lisis celular.
Coloque la mezcla en una placa de agar y extiéndala. Incubar para el crecimiento bacteriano. Cubra la placa con agar que contenga cloruro de trifenil tetrazolio, o TTC, que se reduce por las deshidrogenasas microbianas, impartiendo un color rojo a las colonias bacterianas.
El número de colonias aumenta con la dilución de la muestra, lo que indica una actividad bactericida reducida con una menor concentración de anticuerpos.
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