Detección de la unión de la vitronectina a las superficies bacterianas mediante citometría de flujo

Tome tubos de citómetro de flujo que contengan cepas mutantes y de tipo salvaje de Haemophilus influenzae, tipo f.

Pipetea un tampón que contiene proteínas bloqueadoras y vitronectina. Incubar.

Las proteínas de bloqueo reducen las interacciones no específicas en la superficie bacteriana, mientras que las moléculas de vitronectina se unen a la proteína H, una proteína de unión a la vitronectina, en superficies bacterianas de tipo salvaje. En la cepa mutante, la vitronectina no se une debido a la ausencia de proteína H.

centrífuga. Eliminar la vitronectina no unida y las proteínas bloqueantes.

Agregue un tampón que contenga anticuerpos anti-vitronectina primarios, que se unen específicamente a la vitronectina adherida a las superficies bacterianas de tipo salvaje.

A continuación, introduzca anticuerpos secundarios conjugados con fluoróforos, que se unen a los anticuerpos primarios de la vitronectina y facilitan la detección de la vitronectina.

centrífuga. Eliminar los anticuerpos secundarios no unidos. Vuelva a suspender las bacterias en el tampón.

Realice citometría de flujo para determinar la unión de la vitronectina a la superficie bacteriana.

Compare las señales de fluorescencia