Ensayo basado en fluorescencia que utiliza linfocitos modificados genéticamente para el cribado de compuestos inmunomoduladores
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Inmunología
0 visualizaciones • 2:57 min. • July 8th, 2025
Comience con una placa de múltiples pocillos compatible con fluorescencia que contenga una suspensión de linfocitos T transgénicos derivados de ratón.
Estos linfocitos contienen una proteína fluorescente verde o casete de expresión de GFP, controlada por el receptor de células T o la participación de TCR con compuestos inmunomoduladores.
Tratar cada pocillo con una solución que contenga compuestos inmunomoduladores con diferentes potenciales.
Durante la incubación, los compuestos inmunomoduladores interactúan con los TCR en los linfocitos T.
La interacción de TCR con un compuesto estimulante desencadena la activación del casete de genes, elevando la expresión de GFP.
Por el contrario, la interacción de TCR con un compuesto inhibidor inhibe el casete de genes y reduce la expresión de GFP.
A continuación, superponga las células con un tinte fluorescente de ácido nucleico para teñir los núcleos.
Centrifugue la placa para asentar las celdas para una medición precisa de la fluorescencia.
Bajo un microscopio de fluorescencia, los linfocitos T viables exhiben dos señales de fluorescencia correspondientes a núcleos celulares y proteínas fluorescentes verdes.
La fluorescencia verde intensif
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