Una tecnología de microarrays de péptidos para el perfil de especificidad de los anticuerpos
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Inmunología
0 visualizaciones • 5:21 min. • July 8th, 2025
Tome un portaobjetos de microarrays que contenga péptidos histonas con modificaciones postraduccionales o PTM objetivo y no objetivo.
Los péptidos se inmovilizan a través de biotina conjugada en puntos específicos del portaobjetos de vidrio funcionalizado con estreptavidina.
Las manchas también contienen un fluoróforo verde conjugado con biotina inmovilizado, lo que facilita la identificación de las manchas.
Introducir un tampón de bloqueo, evitando la interacción de anticuerpos no específicos.
Retire el tampón y centrifugue para secar el portaobjetos.
Dentro de una impresora de cera, bordee la matriz con cera.
Equilibre la matriz con un búfer de hibridación.
Incubar con los anticuerpos primarios específicos para un PTM objetivo.
Introducir anticuerpos secundarios conjugados con fluoróforo rojo que se unan a los anticuerpos primarios.
Retire los anticuerpos no unidos y centrifugue para secar el portaobjetos.
Toma una imagen del portaobjetos con un escáner de microarrays. La fluorescencia verde ayuda a identificar las manchas, mientras que la fluorescencia roja indica la interacción PTM-anticuerpo, lo que demuestra la especificidad de los anticuerpos.
El reconocimiento del PTM objet
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