Un método de inmunotinción múltiple que utiliza anticuerpos primarios de la misma especie huésped
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Inmunología
0 visualizaciones • 5:31 min. • July 8th, 2025
Tome una sección suprarrenal fija y permeabilizada que comprende una corteza y una médula. Trátelo con un tampón ácido hirviendo, rompiendo los enlaces cruzados inducidos por la fijación para el desenmascaramiento del antígeno.
Bloquea los sitios de unión no específicos e introduce anticuerpos primarios que se unen a marcadores específicos de la corteza.
Agregue anticuerpos secundarios biotinilados dirigidos a los anticuerpos primarios y peroxidasas conjugadas con estreptavidina que se unen a la biotina.
Introduzca una tiramida marcada con fluoróforo y peróxido de hidrógeno.
Las peroxidasas inmovilizadas utilizan peróxido de hidrógeno para activar la tiramida, que se une a las proteínas cercanas, marcando la corteza.
A continuación, trate la sección con el tampón hirviendo para eliminar los anticuerpos unidos.
Introducir los mismos anticuerpos primarios generados por la especie huésped dirigidos a marcadores específicos de la médula y anticuerpos secundarios biotinilados.
Introduzca peroxidasas conjugadas con estreptavidina y una tiramida conjugada con fluoróforos diferente para marcar la médula.
La eliminación de los anticuerpos primarios específicos de la corteza inhibe la unión
Vea la transcripción completa y acceda a miles de videos científicos