Aislamiento de microglía de lesiones desmielinizantes del cerebro de ratón mediante clasificación de células activadas magnéticamente

Diseccionar lesiones desmielinizantes teñidas del cuerpo calloso de un cerebro de ratón.

Estas lesiones contienen microglía residente en el cerebro que expresa la integrina CD11b de la superficie celular.

Recoja el tejido y agregue una solución que contenga una enzima proteolítica y ADNasa.

La enzima degrada la matriz extracelular, mientras que la ADNasa degrada el ADN libre.

Agregue un tampón frío y filtre la suspensión a través de un colador para eliminar los grumos celulares.

Centrifugar, desechar el sobrenadante y volver a suspender las células granuladas en un medio de gradiente de densidad.

Cubra con tampón y centrífuga para recoger los desechos restantes en las capas superiores; las células intactas se asientan en la parte inferior.

Retire los residuos y vuelva a suspender las celdas en un tampón.

Agregue perlas magnéticas anti-CD11b para etiquetar la microglía.

Cargue las celdas en una columna que contenga esferas ferromagnéticas colocadas en el campo magnético del separador magnético.

Bajo el campo magnético externo, la microglía unida a las perlas se retiene en la columna mientras que las células no unidas fluyen.

Retire la columna del campo magnético. Agregue un tampón p