Name: De alto rendimiento de síntesis de carbohidratos y funcionalización de nanopartículas polianhidrido (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-07-06T12:00:00.000+00:00
Duration: 14 min 37 s
Description: Aprende la síntesis automatizada de oligosacáridos y la funcionalización de nanopartículas polianhídrido mediante el protocolo hydro put. Este método optimiza la morfología de nanopartículas y la densidad de carbohidratos para mejorar el direccionamiento a células presentadoras de antígenos.

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Los autores desean agradecer a Ejército de los EE.UU. de Investigación Médica y Material Command (Grant # W81XWH-10-1-0806) y los Institutos Nacionales de Salud (Grant # U19 AI091031-01 y Grant # 1R01GM090280) para el apoyo financiero. BN reconoce la Cátedra Balloun en Ingeniería Química y Biológica y NLBP reconoce la Cátedra Wilkinson de Ingeniería Interdisciplinaria. Damos las gracias a Julia Vela por su ayuda en la realización de los experimentos de funcionalización de nanopartículas.

1. Hidratos de carbono de alto rendimiento Síntesis <ol><li> Antes de la síntesis automatizada de dimannoside, un donante de azúcar adecuadamente protegido, tricloroacetimidato típicamente, y aceptor, principalmente un alcohol fluorosa alquenilo, se sintetizan en el banco superior. </li><li> Un programa está escrito para la síntesis automatizada de dimannoside. Una representación esquemática del procedimiento automatizado de base se presenta en la Figura 2. En el programa, se asegura que antes de la adición del promotor, la mezcla de donante y aceptor se agita durante al menos 30 minutos. </li><li> Soluciones del donante sintético aceptor, y trimethylsilyltrifluoromethanesulfonate se hacen en diclorometano. El tolueno y el diclorometano se utilizan con mayor frecuencia para las reacciones de glicosilación. </li><li> También, preparar soluciones de reactivos para la desprotección de los grupos protectores temporales en 80% de metanol y 100% de metanol. </li><li> Antes del comienzo del programa, asegurar que la relaive la humedad en la habitación es de 30% o inferior en la cámara de la automatización. La alta humedad es perjudicial para las reacciones de glicosilación. </li><li> Una vez que se inicia el programa, el brazo robótico transfiere las soluciones de donante y aceptor en el vial de reacción secuencial. Luego la mezcla se agitó durante 30 min. </li><li> A continuación, el brazo robótico transfiere 0,2 a 0,3 equivalentes de trimethylsilyltrifluoromethanesulfonate en la mezcla, típicamente a temperatura ambiente, aunque las temperaturas más bajas como -20 ° C puede ser alcanzado. La mezcla de reacción se agitó durante 30 min. </li><li> Después de 30 minutos, la reacción se detuvo y una pequeña alícuota eliminado para vigilar el progreso de la reacción. Si no está completa, la reacción puede ser seguido y, finalmente, el tiempo requerido puede ser modificado. </li><li> Una vez que se completa la reacción, la mezcla de reacción se transfiere a los fluorosa extracción en fase sólida (FSPE) cartuchos que contienen C 8 F 17-modificado gel de sílice para su purificación. </li><li> El carrocrestas se lava primero con un 80% de metanol-agua mezcla (8 ml) para deshacerse de la fracción no fluorosa. </li><li> A continuación, los cartuchos se lavó con 100% de metanol para obtener el producto deseado fluorosa-etiquetados. Si purificación adicional se desea, la máquina puede ser parado y el producto de reacción (s) que se retiró para la purificación por medios adicionales. </li><li> Después del ciclo de purificación, el brazo robótico dispensa metóxido sódico en el vial de reacción. La reacción se agitó durante 2 h. Si no está completa, la reacción puede ser de nuevo continuó durante un período más largo y, finalmente, el tiempo programado requiere puede ser modificada. </li><li> Después de la terminación de la reacción, el producto se purifica por FSPE y después se somete a la disolución en tolueno anhidro, seguido por evaporación para eliminar el agua residual. </li><li> A continuación, el ciclo (de la etapa 6 a 13) se repite hasta que la longitud de cadena deseada se obtiene para la molécula diana. </li><li> El producto protegido, obtenido a partir de la automatización es ºes purificado y caracterizado completamente mediante técnicas tales como resonancia magnética nuclear (RMN). Desprotección completa (eliminación de todos los grupos protectores restantes) de la molécula objetivo final se completa entonces fuera de la plataforma de automatización como una regla, ya que generalmente implica el gas de hidrógeno explosivo y el paladio. La etapa de desprotección final se llevó a cabo en banco superior fuera de la plataforma de automatización. El primer paso fue ozonolisis del doble enlace en la etiqueta fluorosa seguido por oxidación del aldehído producido a un ácido carboxílico. El producto se purificó por cromatografía en columna. El paso final fue la desprotección de grupos éter de bencilo por hidrogenación catalizada con paladio. El producto se pasa a través de celita almohadilla para deshacerse de paladio para obtener producto final puro. </li></ol> 2. De alto rendimiento funcionalización superficial de nanopartículas <ol><li> De alto rendimiento de síntesis de polímeros y la fabricación de nanopartículas se lleva a cabo siguiendo el mismo protocol y robótica configurar descrito por Petersen et al 19. Los sistemas de copolímero utilizado para la fabricación de partículas se basa en el ácido sebácico (SA) y 1,6-bis (para-carboxifenoxi) hexano (LPA), y 1,8-bis-( para-carboxifenoxi) -3,6-dioxaoctano (CPTEG) y CPH. Una representación esquemática del aparato de deposición robótica utilizada se presenta en la Figura 1b. </li><li> Después de la fabricación de nanopartículas, el soporte que contiene los tubos con la biblioteca de nanopartículas se vuelve a unir a la etapa de actuador lineal. </li><li> Para la fijación de hidratos de carbono a la superficie de las partículas de polianhídrido, una reacción ácido amino-carboxílico acoplamiento 20 que consta de dos reacciones consecutivas se lleva a cabo. </li><li> Para la primera reacción, la jeringa en la bomba de jeringa programable primero se llena con 10 equivalentes (Ec.) (equivalentes de media concentración molar de ácido carboxílico en la superficie de las partículas) de 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)-bisrbodiimide clorhidrato (EDC) y la ecuación 10. de etilendiamina en una solución acuosa, mientras que la jeringa en la bomba de jeringa programable segundo está cargado con 12 eq. de N-hidroxisuccinimida (NHS) en solución acuosa. </li><li> Con el programa LabVIEW, las suspensiones de reactivos son depositados en la biblioteca de * nanopartículas. </li><li> A continuación, cada muestra se sometió a sonicación (30 s en 40 Hz) y el soporte del tubo está separado de la plataforma robótica. </li><li> Suspensiones de nanopartículas se incuban durante 9 h ** con rotación constante a 4 ° C. </li><li> Después del tiempo de reacción se ha completado, los tubos se centrifugaron (12.000 xg durante 5 min) y devuelto a la estación de robótica para realizar dos etapas de lavado. </li><li> Para el lavado, una jeringa queda vacío y cargado en la bomba de jeringa programable primero, mientras que la jeringa en la bomba de jeringa segundo se llena con agua fría. El sobrenadante de cada tubo se retira la jeringa vacía y los depósitos de la bomba segundo de agua fría. </li><li> Homogeneización de los nanosuspensión de partículas se realizó como se describió en el paso 2,6. Los tubos se centrifugan (12000 xg durante 5 min) y una segunda etapa de lavado se realizó como se describió en el paso 2,9. </li><li> Para la segunda reacción, dos etapas de deposición se utilizan. En la primera fase de depósito, 12 eq. de EDC se cargan con una bomba y eq 12. NHS de se cargan con la segunda bomba. </li><li> La segunda fase de depósito incluye 10 eq. de un sacárido específica sobre las bombas primera y segunda (es decir, galactosa, lactosa o di manosa-) *** y una tercera bomba con 10 eq. de ácido glicólico (utilizado como control ****). </li><li> Las suspensiones de nanopartículas se homogeneizó como se describe en el paso 2,6 y se incubaron durante 9 horas con rotación constante a 4 ° C. </li><li> Después del tiempo de reacción se ha completado, una etapa de lavado se realiza como se describe en los pasos 2.8, 2.9 y 2.10. </li><li> La biblioteca de nanopartículas funcionalizado se coloca entonces en una cámara de vacío para secar durante al menos 2 horas. </li><li> Las nanopartículas funcionalizadas son entonces de carácterzado por espectroscopía de rayos X de fotoelectrones y un alto rendimiento de fenol-sulfúrico ensayo del ácido para determinar la composición de la superficie y la concentración del sacárido respectivamente. Microscopía electrónica de barrido y dispersión dinámica de luz se utilizan para determinar el tamaño de partícula, distribución de tamaño, y la carga superficial. </li></ol> Notas: * Los volúmenes de deposición varía con la masa de nanopartículas contenidas en cada tubo. Veces ** de reacción para las reacciones primera y segunda se puede cambiar para ajustar la concentración de sacárido final. *** Cada sacárido se deposita en tubos de ensayo en función del grupo que desee. **** Para la reacción específica empleada en este estudio para la unión de los hidratos de carbono, ácido glicólico se utiliza como un control de enlazador desde sacáridos desprotegidos ya tienen esta molécula unida covalentemente, que permite una unión más a la superficie de las nanopartículas. 3. Los resultados representativos El útildimannoside ly protegido se muestra en la Figura 2 se sintetizó utilizando la plataforma de automatización. El compuesto sintetizado se caracterizó por 1 H RMN en un espectrómetro VXR 400 MHz usando CDCl $ 3 como disolvente. El espectro de RMN se muestra en la Figura 3. Utilizando la fabricación de nanopartículas de alto rendimiento y funcionalización de nanopartículas polianhídrido se describe aquí, la unión de lactosa dimannose, y galactosa se ​​ha llevado a cabo con éxito 10, 11. Utilizando esta configuración, las condiciones óptimas de reacción (es decir, temperatura de reacción y el tiempo) se identificaron para lograr funcionalización deseada nanopartículas y morfología. Cuando la reacción se llevó a cabo a 4 ° C en lugar de la temperatura ambiente, una reducción en la agregación de nanopartículas se observó por SEM (datos no presentados). La Tabla 1 muestra los resultados representativos de la caracterización de CPTEG 50:50 funcionalizado CPH: nanopartículas, ya sea con di-manosa olactosa, sintetizado a 4 ° C. Los datos indican un pequeño aumento en el diámetro promedio de nanopartículas, debido a la funcionalización. Mientras que las nanopartículas no funcionalizados tenía un potencial zeta negativo de aprox. -20 MV, las partículas funcionalizadas mostró un valor positivo del potencial zeta, lo que demuestra el éxito de la funcionalización de la superficie de las nanopartículas. La lactosa y di-manosa son azúcares neutros, sin embargo, los grupos amina libres de la etilendiamina enlazador utilizados para unir los sacáridos pueden ser responsables de la potencial zeta positivo. El tiempo de reacción es otra variable que podría afectar tanto a la morfología final de las nanopartículas y el grado de unión del azúcar alcanzado. Al ajustar el tiempo de reacción, la concentración final de azúcar unido a la superficie nanopartículas pueden controlarse como se muestra en la Figura 4A. Como se esperaba, la concentración de dimannose en la superficie de 50:50 CPTEG: CPH nanopartículas aumentó conel tiempo total de reacción y alcanzó un máximo después de 18 h. Las nanopartículas funcionalizadas con el tiempo de reacción total de 24 horas se utilizaron para evaluar la posibilidad de dirigir CLR en el mouse de la médula ósea derivados de las células dendríticas (DC). La citometría de flujo se utilizó para evaluar la expresión de dos receptores CL (es decir, CIRE (CD209, la DC-SIGN) y el receptor de manosa (CD206)) después de la estimulación con no funcionalizado, y la lactosa y di-manosa nanopartículas funcionalizadas (Figura 4B). Una mayor expresión de ambos receptores, que es un indicativo de focalización eficaz, se obtuvo cuando las células se estimularon con ambos lactosa y di-manosa nanopartículas funcionalizados. Sin embargo, di-manosa-funcionalizados partículas mostraron un mayor nivel de expresión que indica una especificidad de este ligando para los receptores que se estudiaron. <table border="1"><tbody><tr><td> Nanopartículas de tipo </td><td> Diámetro medio de partícula (nm) </td><td> Avenidala rabia de partículas ζ-potencial (mV) </td></tr><tr><td> No funcionalizado </td><td> 162 ± 43 </td><td> -20 ± 0,6 </td></tr><tr><td> Lactosa </td><td> 235 ± 34 </td><td> 26 ± 2,4 </td></tr><tr><td> Di-manosa </td><td> 243 ± 32 </td><td> 30 ± 4,2 </td></tr></tbody></table> Tabla 1. Caracterización de las nanopartículas. No funcionalizado y funcionalizado se caracteriza por la dispersión de luz cuasi-elástica y las mediciones de potencial zeta. Los datos del tamaño de partícula representan el valor medio ± desviación estándar (DE) de la dinámica de los datos de dispersión de luz obtenidos en tres experimentos independientes. Datos de potencial zeta representan el valor medio ± desviación estándar de tres mediciones independientes. Cambio en el signo del potencial zeta demuestra que el azúcar era eficiente conjugado con el CPTEG 50:50: superficie de las nanopartículas CPH. <img alt="Figura 1" src<html> = &quot;/ Files/ftp_upload/3967/3967fig1.jpg&quot; /&gt; Figura 1. (A) Representación gráfica de la aproximación a cabo con la funcionalización de las nanopartículas de hidratos de carbono polianhídrido y un ejemplo de las bibliotecas de nanopartículas funcionalizadas que podrían ser diseñadas con el descrito enfoque de alto rendimiento. (B) Representación esquemática del aparato de deposición automatizado utilizado para funcionalización de partículas, que consiste en (i) tres NE 1000 bombas, (ii) una etapa robótico integrado por dos actuadores (Zaber): uno para el movimiento en la dirección x, y el otro para el movimiento en la dirección y, (iii) una segunda etapa robótico con dos bastidores adyacentes (apropiado para tubos y cubetas) que consta de tres actuadores, uno para cada dirección (x, y, z). Las bombas y un total de cinco actuadores están conectados en serie. Los actuadores y bombas son accionadas por un ordenador utilizando el software LabVIEW. Este diagrama no está a escala.arge.jpg &quot;target =&quot; _blank &quot;&gt; Haga clic aquí para ver más grande figura. <img alt="Figura 2" src="/files/ftp_upload/3967/3967fig2.jpg" /> Figura 2. Representación gráfica de la automatizado iterativo síntesis de hidratos de carbono utilizando manosa como un ejemplo. <img alt="Figura 3" src="/files/ftp_upload/3967/3967fig3.jpg" /> Figura 3. 1 H RMN de la dimannoside protegido. <img alt="Figura 4" src="/files/ftp_upload/3967/3967fig4.jpg" /> Figura 4 (A). Efecto del tiempo de reacción sobre la concentración de nanopartículas superficie de sacárido. En los datos mostrados, 50:50 CPTEG: nanopartículas CPH se funcionalizado con dimannose a diferentes tiempos de reacción y la reacción se llevó a cabo a 4 ° C. El error medio y estándar de dos experimentos independientes de funcionalización se muestra. (B) a la lactosa y la di-manosa funcionalizados nanopartículasefectivamente objetivo de la DC-SIGN (CIRE, CD209) y manosa receptor (CD206) en la médula ósea procedentes de células dendríticas como lo demuestra el aumento de expresión de estos dos marcadores tras la estimulación con CPTEG 50:50 funcionalizado: nanopartículas de CPH, en comparación con la expresión obtenida no funcionalizados con partículas.

<ol><li>Zepp, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Principles+of+vacine+design-lessons+from+nature%5BTitle%5D)+AND+%22Vaccine%22%5BJournal%5D)">Principles of vacine design-lessons from nature.</a> Vaccine. 28, C14-C24 (2010).</li>
<li>Ulery, B. D., Phanse, Y., Sinha, A., Wannemuehler, M. J., Narasimhan, B., Bellaire, B. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polymer+chemistry+influences+monocytic+uptake+of+polyanhydride+nanospheres%5BTitle%5D)+AND+%22Pharm.+Res%22%5BJournal%5D)">Polymer chemistry influences monocytic uptake of polyanhydride nanospheres.</a> Pharm. Res. 26, 683-690 (2009).</li>
<li>Torres, M. P., Wilson-Welder, J. H., Lopac, S. K., Phanse, Y., Carrillo-Conde, B., Ramer-Tait, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polyanhydride+microparticles+enhance+dendritic+cell+antigen+presentation+and+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomater%22%5BJournal%5D)">Polyanhydride microparticles enhance dendritic cell antigen presentation and activation.</a> Acta Biomater. 7, 2857-2864 (2011).</li>
<li>Torres, M. P., Determan, A. S., Anderson, G. L., Mallapragada, S. K., Narasimhan, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amphiphilic+polyanhydrides+for+protein+stabilization+and+release%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Amphiphilic polyanhydrides for protein stabilization and release.</a> Biomaterials. 28, 108-116 (2007).</li>
<li>Petersen, L. K., Ramer-Tait, A. E., Broderick, S. R., Kong, C. S., Ulery, B. D., Rajan, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+innate+immune+responses+in+a+pathogen-mimicking+manner+by+amphiphilic+polyanhydride+nanoparticle+adjuvants%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Activation of innate immune responses in a pathogen-mimicking manner by amphiphilic polyanhydride nanoparticle adjuvants.</a> Biomaterials. 32, 6815-6822 (2011).</li>
<li>Petersen, L. K., Xue, L., Wannemuehler, M. J., Rajan, K., Narasimhan, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+simultaneous+effect+of+polymer+chemistry+and+device+geometry+on+the+in+vitro+activation+of+murine+dendritic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">The simultaneous effect of polymer chemistry and device geometry on the in vitro activation of murine dendritic cells.</a> Biomaterials. 30, 5131-5142 (2009).</li>
<li>Lopac, S. K., Torres, M. P., Wilson-Welder, J. H., Wannemuehler, M. J., Narasimhan, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+polymer+chemistry+and+fabrication+method+on+protein+release+and+stability+from+polyanhydride+microspheres%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biomed.+Mater.+Res.+B%22%5BJournal%5D)">Effect of polymer chemistry and fabrication method on protein release and stability from polyanhydride microspheres.</a> J. Biomed. Mater. Res. B. 91, 938-947 (2009).</li>
<li>Determan, A. S., Wilson, J. H., Kipper, M. J., Wannemuehler, M. J., Narasimhan, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protein+stability+in+the+presence+of+polymer+degradation+products%3A+Consequences+for+controlled+release+formulations%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Protein stability in the presence of polymer degradation products: Consequences for controlled release formulations.</a> Biomaterials. 27, 3312-3320 (2006).</li>
<li>Determan, A. S., Lin, V. S. Y., Nilsen-Hamilton, M., Narasimhan, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Encapsulation%2C+stabilization%2C+and+release+of+BSA-FITC+from+polyanhydride+microspheres%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Controlled+Release%22%5BJournal%5D)">Encapsulation, stabilization, and release of BSA-FITC from polyanhydride microspheres.</a> J. Controlled Release. 100, 97-109 (2004).</li>
<li>Chavez-Santoscoy, A., Roychoudhury, R., Ramer-Tait, A. E., Pohl, N. L. B., Wannemuehler, M. J., Narasimhan, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tailoring+the+immune+response+of+alveolar+macrophages+by+targeting+different+C-type+lectin+receptors+using+%22pathogen-like%22+amphiphilic+polyanhydride+nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Tailoring the immune response of alveolar macrophages by targeting different C-type lectin receptors using "pathogen-like" amphiphilic polyanhydride nanoparticles.</a> Biomaterials. , Forthcoming (2011).</li>
<li>Carrillo-Conde, B., Song, E. -H., Chavez-Santoscoy, A., Phanse, Y., Ramer-Tait, A., Pohl, N. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mannose-functionalized+%22pathogen-like%22+polyanhydride+nanoparticles+target+C-type+lectin+receptors+on+dendritic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Pharmaceutics%22%5BJournal%5D)">Mannose-functionalized "pathogen-like" polyanhydride nanoparticles target C-type lectin receptors on dendritic cells.</a> Mol. Pharmaceutics. 8, 1877-1886 (2011).</li>
<li>Carrillo-Conde, B., Schiltz, E., Torres, M. P., Yu, J., Phillips, G., Minion, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amphipilic+polyanhydrides+for+stabilization+of+Yersinia+pestis+antigens%5BTitle%5D)+AND+%22Acta.+Biomater%22%5BJournal%5D)">Amphipilic polyanhydrides for stabilization of Yersinia pestis antigens.</a> Acta. Biomater. 6, 3110-3119 (2010).</li>
<li>Reddy, S. T., Swartz, M. A., Hubbell, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+dendritic+cells+with+biomaterials%3A+developing+the+next+generation+of+vaccines%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Immunol%22%5BJournal%5D)">Targeting dendritic cells with biomaterials: developing the next generation of vaccines.</a> Trends Immunol. 27, 573-580 (2006).</li>
<li>Higashi, N., Fujioka, K., Denda-Nagai, K., Hashimoto, S., Nagai, S., Sato, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+macrophage+C-type+lectin+specific+for+galactose%2FN-acetylgalactosamine+is+an+endocytic+receptor+expressed+on+monocyte-derived+immature+dendritic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">The macrophage C-type lectin specific for galactose/N-acetylgalactosamine is an endocytic receptor expressed on monocyte-derived immature dendritic cells.</a> J. Biol. Chem. 277, 20686(2002).</li>
<li>Geijtenbeek, T. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Signalling+through+C-type+lectin+receptors%3A+shaping+immune+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Signalling through C-type lectin receptors: shaping immune responses.</a> Nat. Rev. Immunol. 9, 465-479 (2009).</li>
<li>Seeberger, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+oligosaccharide+synthesis%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Soc.+Rev%22%5BJournal%5D)">Automated oligosaccharide synthesis.</a> Chem. Soc. Rev. 37, 19-28 (2008).</li>
<li>Seeberger, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+Carbohydrate+Synthesis+as+Platform+to+Address+Fundamental+Aspects+of+Glycobiology-Current+Status+and+Future+Challenges%5BTitle%5D)+AND+%22Carb.+Res%22%5BJournal%5D)">Automated Carbohydrate Synthesis as Platform to Address Fundamental Aspects of Glycobiology-Current Status and Future Challenges.</a> Carb. Res. 343, 1889-1896 (2008).</li>
<li>Jaipuri, F. A., Pohl, N. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toward+solution-phase+automated+iterative+synthesis%3A+fluorous-tag+assisted+solution-phase+synthesis+of+linear+and+branched+mannose+oligomers%5BTitle%5D)+AND+%22Org.+Biomol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Toward solution-phase automated iterative synthesis: fluorous-tag assisted solution-phase synthesis of linear and branched mannose oligomers.</a> Org. Biomol. Chem. 6, 2686-2691 (2008).</li>
<li>Petersen, L. K., Chavez-Santoscoy, A., Narasimhan, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combinatorial+synthesis+of+and+high-throughput+protein+release+from+polymer+film+and+nanoparticle+libraries%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Combinatorial synthesis of and high-throughput protein release from polymer film and nanoparticle libraries.</a> J. Vis. Exp. , Forthcoming (2011).</li>
<li>Song, E. -H., Osanya, A. O., Petersen, C. A., Pohl, N. L. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthesis+of+multivalent+tuberculosis+and+Leishmania-associated+capping+carbohydrates+reveals+structure-dependent+responses+allowing+immune+evasion%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Chem.+Soc%22%5BJournal%5D)">Synthesis of multivalent tuberculosis and Leishmania-associated capping carbohydrates reveals structure-dependent responses allowing immune evasion.</a> J. Am. Chem. Soc. 132, 11428-11430 (2010).</li>
<li>Hakamori, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aberrant+glycosylation+in+tumor+and+tumor+associated+carbohydrate+antigens%5BTitle%5D)+AND+%22Adv.+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Aberrant glycosylation in tumor and tumor associated carbohydrate antigens.</a> Adv. Cancer Res. 59, 257-331 (1989).</li>
<li>Atherton, T., Sheppard, R. C. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aAtherton%2C+T+%22Solid-phase+peptide+synthesis%3A+a+practical+approach%22">Solid-phase peptide synthesis: a practical approach</a>. , Oxford Univ Press. Oxford, UK. (1999).</li>
<li>Caruthers, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+synthesis+machines%3A+DNA+chemistry+and+the+uses%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Gene synthesis machines: DNA chemistry and the uses.</a> Science. 230, 281-285 (1985).</li>
<li>Plante, O. J., Palmacci, E. R., Seeberger, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+solid-+phase+synthesis+of+oligosaccharides%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Automated solid- phase synthesis of oligosaccharides.</a> Science. 291, 1523-1527 (2001).</li>
<li>Ko, K. -S., Park, G., Yu, Y., Pohl, N. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protecting+group-based+colorimetric+monitoring+of+fluorous-phase+and+solid-phase+synthesis+of+oligoglucosamines%5BTitle%5D)+AND+%22Org.+Lett%22%5BJournal%5D)">Protecting group-based colorimetric monitoring of fluorous-phase and solid-phase synthesis of oligoglucosamines.</a> Org. Lett. 10, 5381-5384 (2008).</li>
<li>Pohl, N. L. Automated solution-phase oligosaccharide synthesis and carbohydrate microarrays: development of fluorous-based tools for glycomics. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPohl%2C+NL+%22Chemical+Glycobiology%22">Chemical Glycobiology</a>. Chen, X. H. R., Wang, G. P. , American Chemical Society. Washington, DC. 272-287 (2008).</li>
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NLBP es co-fundador y tiene acciones en la compañía de hidratos de carbono LuCella Biosciences, Inc.

La eficacia de los hidratos de carbono como agentes dirigidos a las interacciones de nanopartículas directos a las células inmunes se ha demostrado anteriormente 10, 11. Investigaciones previas en nuestros laboratorios han mostrado que los azúcares específicos a los que las nanopartículas polianhídrido son capaces de dirigir CLR diferentes en las células presentadoras de antígeno (APC), mejorando así la activación de células inmunes, que puede ser importante para la posterior activación de las células T ...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nombre </td><td> Empresa </td><td> Número de catálogo </td></tr><tr><td> Motorizada XYZ Etapa: 3x T-LSM050A, 50 mm de recorrido por eje </td><td> Zaber Tecnologías </td><td> T-XYZ-LSM050A-KT04 </td></tr><tr><td> NE-1000 bomba de jeringa individual </td><td> Nuevos sistemas de la Era de la bomba </td><td> NE-1000 </td></tr><tr><td> Pyrex * Vista * Al Aire Tubos de vidrio reutilizables Cultura </td><td> Corning </td><td> 07-250-125 </td></tr><tr><td> ASW 1000 </td><td> Chemspeed Tecnologías </td><td></td></tr><tr><td> LabVIEW </td><td> National Instruments </td><td> 776671-35 </td></tr><tr><td> SGE Tight Gas Jeringas, Luer Loc </td><td> Sigma Aldrich </td><td> 509507 </td></tr><tr><td> XL-2000 Sonicator </td><td> Qsonica </td><td> Q55 </td></tr><tr><td> Mini-tubo rotador </td><td> Fisher Scientific </td><td> 05-450-127 </td></tr></tbody></table>

de alto rendimiento de síntesis de carbohidratos y funcionalización de nanopartículas polianhidrido

High-throughput Synthesis of Carbohydrates and Functionalization of Polyanhydride Nanoparticles

Enfoques transdisciplinarios que involucran áreas como el diseño de materiales, la nanotecnología, la química y la inmunología que se utilizarán para diseñar racionalmente los transportistas vacunas eficaces. Basados ​​en nanopartículas plataformas puede prolongar la persistencia de los antígenos de la vacuna, lo que podría mejorar la vacuna contra la inmunogenicidad 1. Varios polímeros biodegradables se han estudiado como vehículos de entrega de vacunas 1; en particular, las partículas de polianhídrido han demostrado la capacidad para proporcionar una liberación sostenida de antígenos proteicos estables y para activar las células presentadoras de antígenos y modular la respuesta inmune 2-12. El diseño molecular de estos portadores de vacunas necesita para integrar la selección racional de las propiedades del polímero, así como la incorporación de agentes adecuados de focalización. De fabricación de alto rendimiento automatizado de los ligandos y partículas funcionalizadas es una potente herramienta que aumentará la capacidad para estudiar una amplia range de las propiedades y se traducirá en el diseño de dispositivos de administración de vacunas reproducibles. La adición de ligandos capaces de ser reconocida por receptores específicos en las células del sistema inmune se ha demostrado que modulan la respuesta inmune y adaptar 10,11,13 C-receptores de tipo lectina (CLR) son los receptores de reconocimiento de patrones (RRP), que reconocen los hidratos de carbono presentes en el superficie de patógenos. La estimulación de células inmunes a través de CLR permite la internalización mejorada de antígeno y posterior presentación para la activación de células T más 14,15. Por lo tanto, las moléculas de hidratos de carbono juegan un papel importante en el estudio de las respuestas inmunes, sin embargo, el uso de estas biomoléculas menudo sufre de la falta de disponibilidad de estructuralmente bien definidos y los hidratos de carbono puro. Una plataforma de automatización basada en un proceso iterativo fase de solución reacciones pueden permitir la síntesis rápida y controlada de estas moléculas sintéticamente desafiantes con b significativamente menoronstruyendo cantidades de bloques que los tradicionales métodos en fase sólida 16,17. Aquí nos presenta un protocolo para la solución automatizada de la síntesis en fase de oligosacáridos como la manosa-basados ​​en ligandos con fluorosa extracción en fase sólida para la purificación intermedia. Después del desarrollo de métodos automatizados para hacer que el agente de carbohidratos selección de base, se describen métodos para su fijación en la superficie de polianhídrido nanopartículas empleando un conjunto robótico automatizado hasta operado por LabVIEW como se ha descrito previamente 10. Funcionalización de superficies con los hidratos de carbono ha demostrado su eficacia en la orientación CLR 10,11 y aumentar el rendimiento del método de fabricación para descubrir las complejidades asociadas con un sistema multi-paramétrico será de gran valor (Figura 1a).

En este artículo, un método de alto rendimiento se presenta para la síntesis de oligosacáridos y su fijación a la superficie de las nanopartículas polianhídrido para su uso posterior en la orientación de receptores específicos en las células presentadoras de antígenos.

De alto rendimiento de síntesis de carbohidratos y funcionalización de nanopartículas polianhidrido

Se deben utilizar enfoques transdisciplinarios que involucren áreas como el diseño de materiales, la nanotecnología, la química y la inmunología para diseñar racionalmente...

En este artículo en video, describimos un nuevo protocolo Hydro Put para la síntesis automatizada en fase solución de oligosacáridos y la funcionalización de nanopartículas de polianhídrido. Con estos agentes de direccionamiento basados en carbohidratos, primero se sintetizan moléculas de carbohidratos mediante un sistema automatizado que utiliza la síntesis en fase solución en lugar de sintetizadores en fase sólida. A continuación, los intermedios de oligosacáridos se purifican mediante extracción en fase sólida de florosil o FSPE.Las moléculas de carbohidratos producidas se caracterizan mediante RMN y luego se unen a las nanopartículas de polianhídrido mediante conjugación por carbo IDE. Finalmente, las nanopartículas funcionalizadas con carbohidratos se caracterizan mediante espectroscopía de fotoelectrones de rayos X y un ensayo de ácido fenil sulfúrico hidrofóbico. En última instancia, utilizando la metodología de hidrofobicidad descrita aquí, se han obtenido las condiciones de reacción para optimizar la morfología de las nanopartículas y la densidad de carbohidratos en la superficie de las partículas.La principal ventaja de este método frente a los métodos existentes, como la síntesis de oligosacáridos en fase sólida, es que en este enfoque utilizamos una cantidad considerablemente menor de bloques de construcción. En este método, normalmente empleamos de dos a tres equivalentes en lugar de 10 a 20 equivalentes. Concebimos por primera vez esta idea cuando demostramos la eficacia de los efectos superficiales, mediante la funcionalización de nanopartículas de polihidroxilado con carbohidratos para dirigirlos a receptores específicos en células presentadoras de antígenos. Posteriormente, deseamos diseñar un sistema de alto rendimiento que nos permitiera analizar múltiples parámetros involucrados en la fabricación y aplicación de estos nuevos vehículos. La demostración visual de este método es fundamental porque el desarrollo de plataformas automatizadas para la síntesis de alto rendimiento de oligosacáridos y su unión a partículas poliméricas es un área novedosa de investigación que carece de abundante documentación disponible antes de la síntesis automatizada del ácido diano. Un donador de azúcar adecuadamente protegido, típicamente tri cloro acetamida, y un aceptor principalmente en Alcon, alcohol fluoro, se sintetizan en la mesa de trabajo y se preparan en cloro metano; también prepare trimetil sililo, trifluoro metanosulfonato en cloro metano, metanol al 80 % y metanol al 100 %. Asegúrese de que la humedad relativa en la habitación sea del 30 % o inferior en la cámara de automatización.La alta humedad es perjudicial para las reacciones de glicosilación. Los siguientes pasos se realizan utilizando una plataforma de automatización. La primera glicosilación se lleva a cabo con el donador y el alcohol florista.Una vez finalizado, la molécula de azúcar etiquetada con florist tag resultante se purifica mediante FSPE. A continuación, el grupo protector temporal se elimina con sodio, metóxido y metanol, y nuevamente, el producto se purifica por FSPE. Después de esto, el azúcar con florist tag se utiliza como aceptor y se acopla al mismo donador para obtener el disacárido, el cual se purifica mediante FSPE para comenzar.Coloque los reactivos, incluyendo el donador, el aceptor y el promotor, agua con 80% de metanol, metanol al 100% y metóxido de sodio en la plataforma robótica, e inicie el programa. El brazo robótico extraerá primero el donador y luego el aceptor de los viales y los transferirá a un vial de reacción. A continuación, la mezcla de donador y aceptor se agitará durante 30 minutos.Después de que hayan transcurrido 30 minutos, el brazo robótico transfiere el catalizador trimetilsililo trifluorometanosulfonato a la mezcla. A continuación, la solución se agita durante 30 minutos adicionales. Una vez finalizada la agitación, el programa se detiene.Retire un alícuota de 10 microlitros para verificar si la reacción está completa mediante cromatografía en capa fina. Si la reacción está completa, no se observará la molécula aceptora. Si la reacción no está completa, el aceptor en la CCF aún será visible.Si este es el caso, detenga el programa, restablezca el tiempo de glicosilación en aproximadamente 30 minutos y agregue un exceso del promotor trimetil sililo, trifluorometanosulfonato. Cuando la reacción esté completa, continúe con el siguiente paso. Una vez finalizada la reacción, el robot transfiere la mezcla de reacción a cartuchos FSPE que contienen gel de sílice modificado con C nueve F 17 para su purificación.A continuación, los cartuchos se lavan con ocho mililitros de metanol al 80 %, seguidos de ocho mililitros de metanol al 100 %. Para eliminar la fracción no floris, se recoge el flujo que atraviesa en un vial para obtener el producto marcado como florist deseado. Si se requiere una purificación adicional, detenga el robot y retire los productos de reacción adecuados.Dependiendo de la estructura, los donadores pueden ser extremadamente poco reactivos y algunas moléculas aceptoras de florantreno podrían quedar incluso después de agregar un promotor suficiente. En tal caso, la EFPE no será lo suficientemente eficiente para la purificación y se podrá realizar una purificación adicional mediante cromatografía en columna de gel de sílice después de que el brazo robótico dispense metóxido de sodio en el vial de reacción. Luego, la reacción se agita durante dos horas en la plataforma robótica; si no está completa según lo determinado por TLC, se debe prolongar el período de incubación aproximadamente una hora más.Después de finalizar la reacción, el producto se purifica mediante FSPE como antes. A continuación, retire el producto de la reacción del robot y, en la bancada, sométalo a disolución en tolueno anhidro, seguida de evaporación para eliminar el agua residual. Una vez que la muestra esté seca, colóquela nuevamente en el robot y repita el mismo ciclo, incluyendo la purificación por glicosilación mediante FSPE.La protección profunda del grupo protector temporal seguida de glicosilación se repite hasta obtener la longitud de cadena deseada para la molécula objetivo. Para desproteger el producto protegido obtenido a partir de la automatización, retire el vial del robot. Los pasos finales del procedimiento utilizan gas hidrógeno explosivo y deben realizarse fuera de la plataforma de automatización. En la mesa de trabajo, oz, ocurre la lisis del doble enlace en la etiqueta florista y se sigue con la oxidación del aldehído producido a ácido carboxílico.Purifique el producto resultante mediante cromatografía en columna de gel de sílice en banco utilizando una mezcla de metanol al 30 % en diclorometano. Finalmente, para desproteger los grupos éter bencílico mediante hidrogenación catalizada por paladio, pase el producto a través de una almohadilla satélite para eliminar el paladio y obtener el producto final puro. Caracterice completamente el producto mediante resonancia magnética nuclear o espectroscopía de RMN.La síntesis de polímeros con alta capacidad de lanzamiento y la fabricación de nanopartículas se llevan a cabo siguiendo el protocolo descrito por Peterson et al. Como se menciona en el documento adjunto, el aparato automatizado de deposición utilizado para la funcionalización de partículas consta de tres bombas ne 1000, una plataforma robótica integrada por dos actuadores, uno para el movimiento en la dirección X y otro para el movimiento en la dirección Y, y una segunda plataforma robótica con dos bastidores adyacentes que constan de tres actuadores, uno para cada dirección de las bombas, y un total de cinco actuadores conectados. Los actuadores y las bombas en serie son operados por una computadora utilizando software lab view.Los sistemas de copolímeros utilizados para la fabricación de partículas se basan en ácido SEBA o SA y un seis bis, para-carboxi, oxil heano o CPH y un dieciocho bis para-carboxi fenoxi tres seis dioxano o CP Teeg. Tras la fabricación de las nanopartículas, coloque un estante que contenga los tubos de centrifugación de 1,7 mililitros con una biblioteca de nanopartículas en la etapa del actuador lineal para la unión de carbohidratos a la superficie de las partículas de polianhídrido, y se realiza una reacción de acoplamiento de ácido carboxílico medio que consta de dos reacciones consecutivas. Para la primera reacción, llene una jeringa en una bomba de jeringa programable con una solución acuosa de EDC y etilendiamina a una concentración de dos miligramos por miligramo de nanopartículas y 0,6 miligramos por miligramo de nanopartículas, respectivamente.Llene una segunda jeringa en una bomba de jeringa programable con 2,5 miligramos por miligramo de partículas de NHSA, un total de 12 equivalentes por muestra de nanopartículas, en solución acuosa. A continuación, utilizando el programa LabVIEW, indique al robot que deposite suspensiones de reactivo en la biblioteca de nanopartículas. Los actuadores del robot moverán entonces el porta-tubos a la posición correcta en la plataforma para la dispensación de las soluciones, EDC y NHS.Activee los grupos ácido carboxílico en la superficie de las nanopartículas de polianhídrido y permita un acoplamiento medio. A continuación, sumerja una sonda de sonicación en cada tubo y someta cada muestra a sonicación durante 30 segundos a 40 hercios. Antes de pasar a la siguiente muestra, limpie la sonda con acetona.Una vez que todas las muestras están saturadas, se separa el portamuestras del platillo robótico. Incube las suspensiones de nanopartículas durante nueve horas con rotación constante a cuatro grados Celsius. Los tiempos de reacción para la primera y segunda reacción pueden modificarse para ajustar la concentración final de sacáridos.Una vez finalizada la reacción, centrifugar los tubos a 12.000 × g durante cinco minutos. En un entorno frío, regresar a la estación robótica. Volver a colocar el portatubos en el brazo robótico y llenar la segunda jeringa en la plataforma robótica.Con agua fría, la primera jeringa debe permanecer vacía. Inicie el robot. El sobrenadante en cada tubo se aspira hacia la jeringa vacía y la segunda bomba deposita agua fría en los tubos.Este paso se realiza para eliminar cualquier reactivo no reactivo de las suspensiones de nanopartículas. A continuación, homogenice la suspensión de nanopartículas mediante sonicación, como se demostró anteriormente. Luego, centrifugue los tubos a 12.000 ×g durante cinco minutos.Realice un segundo lavado con agua fría utilizando el aparato robótico para la segunda carga de reacción: coloque 12 equivalentes por muestra de nanopartículas de EDC en la primera bomba y 12 equivalentes por muestra de nanopartículas de NHS en la segunda bomba. Inicie la plataforma robótica para dispensar volúmenes adecuados en los tubos que contienen las nanopartículas. La presencia de EDC y NHS permitirá la formación de un enlace amida entre los grupos amina del dietileno ya unido a la superficie de la nanopartícula y el grupo ácido carboxílico del azúcar con protección profunda.Una vez finalizada la deposición, cargue 10 equivalentes de un sacárido específico. En este caso, se utilizó lactosa y el control de ácido glicólico en las dos bombas disponibles. Cada sacárido se deposita en tubos de ensayo según la funcionalización deseada a obtener en cada tubo, lo cual se programó previamente en el programa de vista de laboratorio, utilizado para operar las funciones de los actuadores y las bombas para la reacción específica empleada. En este estudio, para la unión de carbohidratos, se utiliza el ácido glicólico como control de enlazador, ya que los sacáridos con protección profunda ya tienen esta molécula unida covalentemente, lo que permite su posterior fijación a la superficie de la nanopartícula.Las suspensiones de nanopartículas se homogenizan mediante sonicación como antes y luego se incuban durante nueve horas con rotación constante a cuatro grados Celsius. Después de la incubación, lave las suspensiones de nanopartículas mediante centrifugación, retire el sobrenadante, luego resuspenda el sedimento en agua fría y sonicación. Coloque los tubos, que ahora contienen la biblioteca de nanopartículas funcionalizadas, en una cámara de vacío para secar durante al menos dos horas. Las nanopartículas funcionalizadas se caracterizan mediante dispersión dinámica de luz y otros métodos para evaluar la composición superficial, concentración, tamaño de partícula, distribución del tamaño y carga superficial.El lado diano completamente protegido que se muestra aquí se sintetizó utilizando la plataforma de automatización. El compuesto sintetizado se caracterizó mediante resonancia magnética nuclear de protones en un espectrómetro VXR de 400 megahercios. Utilizando CDC 13 como disolvente, se puede confirmar la formación del producto a partir de la presencia de algunos picos característicos.En el diagrama de RMN de protones, los cuatro protones entre 1,79 y 2,21 y los dos protones a 3,38 provienen de la etiqueta florist. El pico singlete a 2,16 corresponde al pico de acetato; los picos a 4,94 y 5,11 son los protones anómericos para evaluar el efecto del tiempo de reacción sobre la morfología final de las nanopartículas y el grado de unión del azúcar logrado. Las nanopartículas fueron funcionalizadas con tiempos crecientes de reacción, como se muestra aquí; la concentración de diano sobre la superficie de las nanopartículas 50 50 CPT CPH aumentó con el tiempo total de reacción y alcanzó un máximo tras 18 horas.Las nanopartículas funcionalizadas con un tiempo total de reacción de 24 horas se utilizaron luego para evaluar su capacidad de dirigirse a los CLR en células dendríticas derivadas de médula ósea de ratón mediante citometría de flujo, como se muestra aquí. Se observó un aumento en la expresión del receptor DC sign y del receptor manosa hacia receptores de tipo lectina C después de la estimulación con nanopartículas no funcionalizadas, así como con nanopartículas funcionalizadas con lactosa y DANO. Esto indica un direccionamiento efectivo.Sin embargo, las partículas funcionalizadas con Diano mostraron un nivel más alto de expresión, lo que indica una especificidad de este ligando para los receptores que se estudiaron. Después de ver este video, debería tener una buena comprensión de cómo realizar la síntesis automatizada de alto rendimiento de oligosacáridos, así como de la funcionalización de nanopartículas poliméricas. Utilizando estos agentes de direccionamiento basados en carbohidratos, una vez dominada la síntesis del azúcar protegido donador y aceptor, así como el montaje del aparato, el proceso puede completarse en un período de 24 a 48 horas.Por supuesto, la duración depende del tamaño de la biblioteca así como del tiempo de funcionalización. Al seguir este método, es importante recordar que se pueden optimizar las condiciones de reacción para la funcionalización de partículas polihidroxialcanoato biodegradables según la química de la nanopartícula. Siguiendo este procedimiento, se pueden sintetizar diversas estructuras de carbohidratos con el fin de dirigirse a diferentes receptores celulares y así influir en la respuesta inmunológica.

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Research

Investigación

JoVE Journal

Bioengineering

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