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DOI: 10.3791/4350-v
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
Aquí, presentamos un método para el cambio fotoactivado de proteínas fluorescentes fotoconvertibles (PCFPs) en el embrión vivo de pez cebra y el seguimiento posterior de la proteína fotoconvertida en puntos de tiempo específicos durante el desarrollo. Esta metodología permite el seguimiento de los eventos biológicos celulares que subyacen a diferentes procesos de desarrollo en un organismo vertebrado vivo.
El objetivo general de este procedimiento es rastrear las células fotointercambiadas en un embrión vivo de pez cebra. Esto se logra mediante la inclusión primero de un embrión, expresando una fotoproteína fluorescente convertible específica del tejido en aros a baja temperatura de fusión. A continuación, la proteína dentro de la región de interés se convierte completamente en foto.
Luego, el embrión se extrae cuidadosamente de aros y se mantiene en agua de huevo a 28,5 grados centígrados hasta etapas posteriores. Finalmente, el embrión fotoconvertido se incrusta de nuevo en aros de baja temperatura de fusión. En última instancia, se pueden obtener resultados que muestran que las células fotoconvertidas se pueden detectar con precisión en etapas posteriores debido a la presencia estable de la proteína fotoconvertida a través de la microscopía confocal.
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