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Un ensayo de unión de alto rendimiento MHC II para el análisis cuantitativo del péptido epítopos
Un ensayo de unión de alto rendimiento MHC II para el análisis cuantitativo del péptido epítopos
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JoVE Journal Biology
A High Throughput MHC II Binding Assay for Quantitative Analysis of Peptide Epitopes

Un ensayo de unión de alto rendimiento MHC II para el análisis cuantitativo del péptido epítopos

Full Text
15,627 Views
07:59 min
March 25, 2014

DOI: 10.3791/51308-v

Regina Salvat1, Leonard Moise2, Chris Bailey-Kellogg3, Karl E. Griswold1

1Thayer School of Engineering,Dartmouth College, 2Institute for Immunology and Informatics,University of Rhode Island, 3Department of Computer Science,Dartmouth College

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Ensayos bioquímicos con moléculas recombinantes humanas MHC II pueden proporcionar rápidas, ideas cuantitativos en la identificación epítopo inmunogénico, eliminación o diseño. Aquí, se describe un ensayo de unión péptido-MHC II a escala para placas de 384 pocillos. Este formato rentable puede ser muy útil en los campos de desinmunización proteínas y diseño y desarrollo de vacunas.

El objetivo general de este procedimiento es cuantificar la unión de péptidos cortos con MHC humano, dos proteínas inmunitarias, utilizando un ensayo de placa de 3 84 pocillos de alto rendimiento. Esto se logra realizando primero ensayos de unión de competencia en fase de solución con los péptidos de interés. En el segundo paso, se capturan los dos complejos del péptido MHC equilibrado con un anticuerpo anti MHC dos inmovilizado en placas ELIZA de alta unión.

A continuación, los complejos capturados se incuban con el opio marcado con estreptavidina y luego la estreptavidina no unida se lava y se activa el opio capturado. En última instancia, la fluorometría resuelta en el tiempo se puede utilizar para cuantificar los niveles de MHC dos péptidos de control capturados. Este método puede proporcionar información preliminar sobre el potencial inmunogénico de las proteínas diana.

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