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DOI: 10.3791/51308-v
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Ensayos bioquímicos con moléculas recombinantes humanas MHC II pueden proporcionar rápidas, ideas cuantitativos en la identificación epítopo inmunogénico, eliminación o diseño. Aquí, se describe un ensayo de unión péptido-MHC II a escala para placas de 384 pocillos. Este formato rentable puede ser muy útil en los campos de desinmunización proteínas y diseño y desarrollo de vacunas.
El objetivo general de este procedimiento es cuantificar la unión de péptidos cortos con MHC humano, dos proteínas inmunitarias, utilizando un ensayo de placa de 3 84 pocillos de alto rendimiento. Esto se logra realizando primero ensayos de unión de competencia en fase de solución con los péptidos de interés. En el segundo paso, se capturan los dos complejos del péptido MHC equilibrado con un anticuerpo anti MHC dos inmovilizado en placas ELIZA de alta unión.
A continuación, los complejos capturados se incuban con el opio marcado con estreptavidina y luego la estreptavidina no unida se lava y se activa el opio capturado. En última instancia, la fluorometría resuelta en el tiempo se puede utilizar para cuantificar los niveles de MHC dos péptidos de control capturados. Este método puede proporcionar información preliminar sobre el potencial inmunogénico de las proteínas diana.
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