Desarrollo de una polimerasa de amplificación ensayo cuantitativo recombinasa con un control positivo interno

El objetivo general del siguiente experimento es utilizar la simplificación cuantitativa de la polimerasa recombinasa para cuantificar la concentración de ADN de muestras desconocidas. Esto se logra agregando primero el control positivo interno del ADN objetivo, cebadores de ADN y sondas marcadas con fluorescencia a la reacción. Como segundo paso, las reacciones se colocan en la máquina de PCR en tiempo real, que calienta las reacciones para activar las enzimas y monitorea la fluorescencia de las sondas para detectar la generación de dianas y controlar los amplicones.

A continuación, los datos fluorescentes se analizan mediante un script para generar la curva estándar y validar el ensayo. Los resultados muestran que las muestras de ADN se pueden cuantificar con precisión dentro de un orden de magnitud de la concentración correcta sobre la base de los experimentos de validación utilizados para cuantificar un ADN objetivo del VIH. La principal ventaja de esta técnica sobre los métodos existentes, como la PCR cuantitativa en tiempo real, es que el RPA es isotérmico, por lo que no se necesita un costoso termociclador.