Un método simple para la fase sólida automatizada Extracción de muestras de agua para análisis inmunológico de los pequeños contaminantes

El objetivo general de este método de preparación de muestras es preconcentrar pequeños contaminantes orgánicos a partir de muestras de agua, de una manera fácil de usar, rentable y automatizada. Este método puede reemplazar los procesos estándar de SPE cuando se estudia la contaminación de muestras de agua utilizando métodos de inmunodetección, como inmunoensayos de placas de pocillos o biosensores. Las principales ventajas de esta técnica es que el procedimiento SPE está automatizado, mientras que la huella y el costo de los instrumentos son bajos en comparación con los enfoques tradicionales.

Además, el rendimiento del proceso de enriquecimiento coincide con los requisitos de análisis de los inmunoensayos, tanto en términos de bajo contenido de disolvente como de eficiencia de preconcentración. Primero, filtre la muestra de agua de 100 milímetros con un filtro de tamaño de vertido de dos micrómetros y punto cero. Coloque la muestra filtrada en un frasco de vidrio con rosca GL 45.

Prepare 300 microlitros de eluyente diluyendo metanol en agua desionizada, hasta un volumen del 50 por ciento en un tubo apretado. A continuación, prepare una suspensión de 20 miligramos por mililitro de partículas de sorbente de sílice octadecil agregando 1.600 microlitros de metanol seguido de 400 microlitros de agua desionizada a 40 miligramos de sorbente de fase reversa en un vaso de vidrio. Cierre herméticamente la tapa y agite con un mezclador de vórtice.

Coloque una membrana de nailon con un tamaño de poro de 11 micrómetros sobre una doble capa de tejido antipolvo. Corta dos partes pequeñas en la membrana con un punzón de tres milímetros de diámetro. Luego, agarre las membranas pequeñas con pinzas de filtro de extremo plano y colóquelas en un lado de la columna.

A continuación, atornille el conector de fondo plano con el tubo y apriételo. Luego, dibuja una flecha en el cuerpo de la columna, apuntando hacia el extremo donde se colocó la membrana. En este punto, asegure la columna en el soporte con la flecha apuntando hacia la parte inferior.

Conecte una jeringa desechable vacía de 10 mililitros al extremo del tubo de la columna utilizando los conectores de bloqueo inferiores. Agite la suspensión absorbente con el mezclador de vórtice y pipetee rápidamente 100 microlitros en el centro de la columna. Durante la inyección, aspire suavemente la solución pipeteada a través de la membrana utilizando la jeringa con la otra mano.

La preparación de la columna SPE es muy importante. Debe asegurarse de aspirar correctamente la solución a través de la membrana con la jeringa mientras inyecta la suspensión de partículas en la columna. De lo contrario, las partículas no se empaquetarán densamente.

Repita el proceso anterior dos veces más, agitando la suspensión madre entre todos los pasos de pipeteo, para asegurar una suspensión homogénea de las partículas en la solución. Después de haber cargado y secado toda la suspensión aspirando con una jeringa, mantenga la jeringa en posición y coloque la segunda membrana de nailon en la parte superior usando las pinzas con la otra mano. Luego, atornille el segundo conector con un tubo y deseche la jeringa.

En este punto, apriete la columna en el dispositivo SPE utilizando los conectores de bloqueo inferiores. Conecte el frasco que contiene la muestra al dispositivo enroscando el tapón de seguridad GL 45 suministrado. Cargue 200 microlitros de eluyente en el depósito de eluyente.

Luego, cargue 800 microlitros de agua desionizada en el depósito de dilución. Verifique que el regulador de presión esté en la posición cerrada girándolo hacia atrás en el sentido de las agujas del reloj hasta que no sea posible realizar más movimientos. Después de encender el prototipo, introduzca los valores 580 para pset y 30 para delta pset.

Para ajustar el regulador de presión, encienda la bomba. A continuación, gire manualmente el regulador de presión hasta que el valor leído para preg sea inferior pero cercano a 320 milibares. Después de detener la bomba, inicie el procedimiento SPE presionando inicio en la esquina del modo automatizado.

Una vez finalizado el procedimiento de SPE, cierre el pequeño trozo de muestra y guárdelo a cuatro o cinco grados centígrados en la oscuridad, hasta el análisis ELISA. Para limpiar el sistema, prepare una solución de 10 mililitros de metanol al 70 por ciento por volumen en una botella de vidrio con rosca GL 45. Desconecte la columna SPE y conecte el tubo con conectores.

En el modo automatizado, seleccione el archivo de limpieza e inícielo con los mismos ajustes de presión utilizados anteriormente para pset, delta pset y preg. La reproducibilidad del empaquetamiento del sorbente se evaluó mediante el secado y el pesaje del sorbente pipeteado en vilas de vidrio. Se probó la reproducibilidad del tiempo de inyección para las muestras de 100 mililitros.

Las concentraciones de las muestras iniciales y preconcentradas se determinaron utilizando un kit ELISA comercial de 17 betaestradiol. De las curvas de calibración se desprende claramente que la proporción de metanol de la muestra enriquecida no afecta a la sensibilidad del inmunoensayo. Se calcularon recuperaciones de 128, más o menos 22 por ciento, y 107 más o menos seis por ciento, para agua desionizada y agua de mar artificial, respectivamente.

Una vez dominada, la preparación de una columna SPE se puede realizar en menos de cinco minutos, si se realiza correctamente. Todo el procedimiento SPE se puede completar en menos de una hora. Después de su desarrollo, esta técnica allanó el camino para que los investigadores en el campo de las ciencias ambientales exploraran el desarrollo de métodos de inmunodetección para el monitoreo de pequeños contaminantes orgánicos.

Después de ver este video, debería tener una buena comprensión de cómo preparar muestras de agua utilizando nuestro instrumento automatizado y rentable para el análisis de contaminantes mediante inmunoensayos. No olvide que trabajar con contaminantes orgánicos y solventes puede ser peligroso, y siempre se deben tomar precauciones como el uso de guantes adecuados y gafas de protección al realizar este proceso.