Name: Un método simple para la fase sólida automatizada Extracción de muestras de agua para análisis inmunológico de los pequeños contaminantes (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-01-01T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 26 s
Description: Aprende un método automatizado de extracción en fase sólida para preconcentrar contaminantes orgánicos en muestras de agua. Esta técnica mejora el análisis inmunológico con menor coste y huella instrumental.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Este trabajo fue financiado por el Séptimo Programa Marco de la Unión Europea FP7/2007-2013 bajo el acuerdo de subvención nº 265721. Los autores agradecen al RIKILT Institute for Food Safety (NL) por su apoyo en este proyecto.

Nota: El siguiente protocolo describe la SPE realiza en muestra de 100 ml de agua con sorbente C18 y elución con 50% v / v de metanol. La muestra enriquecida se diluye hasta alcanzar el 10% v / v de metanol antes del análisis con un ensayo de inmunoabsorción enzimática (ELISA) kit. 1. Preparación de los Reactivos <ol><li> Preparar las muestras de agua <ol><li> Antes de cualquier otra medida, filtrar cada muestra de 100 ml de agua con filtros de tamaño de 0,2 micras de poro. </li><li> Pico de la muestra con concentración deseada mediante la dilución de volumen apropiado de solución de referencia en un volumen de agua. Por ejemplo, preparar 100 ml de muestra de agua con 100 ng / L de E2 mediante la dilución de 3,3 l de solución de referencia E2 a una concentración de 300 g / L. Diluir esta solución diez veces para obtener una muestra enriquecida con 10 ng / L de E2. Diluir este último otros diez veces para obtener una muestra de 100 ml con 1 ng / L E2. </li><li> Coloque la muestra filtrada (no modificada o pinchos) en una botella de vidrio con GHilo L45. Utilice la muestra en el mismo día. Tomar una pequeña fracción a ser analizada con el ELISA para estimar la concentración inicial. </li></ol></li><li> Preparar 300 l de eluyente mediante la dilución de metanol en (di-) agua desionizada a 50% v / v en un tubo apretado. </li></ol> 2. Preparación de la columna SPE <ol><li> Preparar una 20 mg / ml de suspensión de partículas de sorbente octadecil-sílice mediante la adición de primeros 1.600 l de metanol y luego 400 l de agua-di a 40 mg de sorbente de fase inversa. Cierre bien la tapa y agitar con un vórtice. </li><li> Instalación de la membrana inferior en la columna <ol><li> Seleccione una membrana de nylon con tamaño de poro de 11 micras y colocarlo en una doble capa de tejido anti-polvo. Con un punzón de diámetro de 3 mm, cortar dos piezas pequeñas en la membrana. </li><li> Coge una de las pequeñas membranas con un filtro de gama plana pinzas y colocarlo en un lado de la columna. </li><li> Atornille el conector de fondo plano con el tubo y apriete. La membrana es now en su lugar y el sorbente se puede añadir de forma segura. Dibuja una flecha en el cuerpo de la que señala la columna hacia el final, donde se colocó la membrana. </li></ol></li><li> Preparación de la columna empaquetada sorbente <ol><li> Asegure la columna sobre el soporte con la flecha apuntando hacia la parte inferior. La columna se debe establecer lo más verticalmente posible. </li><li> Adjuntar un vacío de 10 ml jeringa desechable hasta el final del tubo de la columna, mediante el uso de los conectores Luer-Lock. </li><li> Preparar un micro-pipeta con una punta de 20 a 200 l, ajuste el volumen a 100 l. Este formato punta de pipeta está adaptado al tamaño de la columna de sorbente que estar preparado. El procedimiento sería más difícil con puntas de pipeta más grandes tales como las que se usan con 1 ml pipetas. </li><li> Agite la suspensión absorbente con un vórtice, y pipetear rápidamente 100 l en el centro de la columna. Mientras que la inyección, aspirado suavemente toda la solución de pipeteado artesa la membrana mediante el uso de la jeringa con la otra mano. En este ptla edad, la solución de llenado de la jeringa debe estar libre de partículas y un lecho de partículas con el tiempo puede ser observado en la columna. </li><li> Repita este proceso 2 veces más agitando la suspensión de acciones entre todos los pasos de pipeteo para asegurar suspensión homogénea de las partículas en la solución. La columna resultante contiene 6 mg de sorbente. </li><li> Cuando los 300 l de suspensión se han cargado y se secó por aspiración con la jeringa, mantener la jeringa en posición y colocar la segunda membrana de nylon en la parte superior mediante el uso de las pinzas con la otra mano. </li><li> Atornille el segundo conector con el tubo y desechar la jeringa. La columna SPE está listo para su uso. </li></ol></li></ol> 3. Preparación del sistema <ol><li> Apriete la columna de la SPE en el dispositivo mediante el uso de los conectores Luer-Lock. La flecha debe estar apuntando a la misma dirección que la que se muestra en el dispositivo. </li><li> Conectar la botella que contiene la muestra al dispositivo atornillando elproporcionado tapón de seguridad GL45 en él. </li><li> Cargue 200 l de eluyente en el depósito &#39;Eluent&#39;. </li><li> Carga 800 l de agua di en el embalse &#39;dilución&#39;. </li><li> Coloque una botella en la salida de desechos para recoger el agua procesada durante el paso de extracción. El formato no es importante, pero el volumen debe ser lo suficientemente grande con respecto al volumen de la muestra. </li><li> Coloque un pequeño frasco en la salida del sensor con la capacidad de volumen mínimo de 1,5 ml. Un volumen máximo de 1 ml será demasiado pequeño como se formarán burbujas en esta salida en la recogida de eluyente enriquecido y tampón de dilución. </li><li> Compruebe el regulador de presión está en posición cerrada girando manualmente, revertir las agujas del reloj hasta que el movimiento adicional no es posible. </li></ol> 4. SPE con el Prototipo <ol><li> Encienda el prototipo pulsando el botón en la espalda. </li><li> Preparación de la interfaz de usuario y la selección del programa <ol><li> Abra la interfaz de usuario. Seleccionarel puerto de comunicación del ordenador al que está conectado el dispositivo de la lista y haga clic en el botón &quot;Siguiente&quot;. </li><li> Introduzca los valores para el conjunto de procesadores 580 y 30 para dpset. La bomba se ajustará para mantener la presión en el sistema de presión y depósitos a 580 ± 30 mbar cuando se ejecuta. </li><li> Seleccione el modo automático. </li><li> En la esquina modo automatizado, cargue el archivo de programa en la &quot;ruta del archivo de configuración &#39;caja. </li></ol></li><li> Ajuste del regulador de presión <ol><li> Encienda la bomba. </li><li> Gire manualmente el regulador de presión hasta que el valor leído por preg es inferior, pero cerca de 320 mbar. </li><li> Parar la bomba. </li></ol></li><li> Inicio del procedimiento de SPE <ol><li> Pulse &#39;inicio&#39; en la esquina automatizado modo. La bomba se encenderá y las etapas de extracción, elución y dilución seguirá automáticamente entre sí. Todo el procedimiento para una muestra de 100 ml se lleva a cabo en 50 min. </li><li>Verifique el valor de preg. Debe estar en el rango de 320 hasta 350 mbar durante la etapa de extracción para asegurar un caudal óptimo. </li><li> Cierre el pequeño vial y almacenar a 4-5 ° C en la oscuridad hasta su análisis. Realizar análisis en la siguiente 30 hr para evitar la degradación del analito. </li><li> Deseche el agua procesada. </li></ol></li><li> Limpieza del sistema Nota: Después de cada procedimiento de extracción del sistema necesita ser limpiado para evitar la contaminación cruzada. <ol><li> Preparar una solución de 10 ml de metanol 70% v / v en una botella de vidrio GL 45. </li><li> Desenchufe la columna de la SPE y conecte el tubo con conectores. </li><li> En el modo automático, seleccione el archivo de &#39;limpieza&#39; y empezar con la misma configuración de presión. </li></ol></li></ol> 5. La detección de la concentración de estradiol con ELISA <ol><li> Preparar las muestras de calibración con concentraciones como se indica en el protocolo proporcionado con el kit de ELISA que se utiliza. Preparar un solo calibración de conjunto con la misma matriz que la muestra, y uno conjunto de calibración con metanol 10% v / v. </li><li> Dispense la cantidad necesaria de muestra en los pocillos de la placa, de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Utilice muestras de calibración, muestras no modificadas y pinchos de agua que se filtraron, pero no procesados ​​con SPE y enriquecieron muestras en metanol al 10% v / v. Utilice 3 pocillos por muestra para reducir el error asociado con el ensayo. </li><li> Siga las indicaciones del protocolo que se proporciona con el kit para la adición de reactivos, tiempo de incubación, el lavado y la posterior reacción con la enzima. </li><li> Leer la señal óptica en cada pocillo de acuerdo con las instrucciones del fabricante kit con un instrumento lector de placas y recoger los datos. </li><li> Utilice el software del instrumento lector de placas para adaptarse a las curvas de calibración y determinar la concentración de E2 en la muestra inicial con misma matriz, y en las muestras enriquecidas con metanol 10% v / v. </li></ol>

<ol><li>Chang, H. S., Choo, K. H., Choi, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+methods+of+identification%2C+analysis+and+removal+of+endocrine+disrupting+compounds+%28EDCs%29+in+water%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Hazard.+Matter%22%5BJournal%5D)">The methods of identification, analysis and removal of endocrine disrupting compounds (EDCs) in water.</a> J. Hazard. Matter. 172, 1-12 (2009).</li>
<li>Azzouz, A., Souhail, B., Ballesteros, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Continuous+solid-phase+extraction+and+gas+chromatography-mass+spectrometry+determination+of+pharmaceuticals+and+hormones+in+water+samples%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chromatogr.+A%22%5BJournal%5D)">Continuous solid-phase extraction and gas chromatography-mass spectrometry determination of pharmaceuticals and hormones in water samples.</a> J. Chromatogr. A. 1217, 2956-2963 (2010).</li>
<li>Tomsikova, H., Aufartova, J., Solich, P., Novakova, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+sensitivity+analysis+of+female-steroid+hormones+in+environ-mental+samples%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Anal.+Chem%22%5BJournal%5D)">High sensitivity analysis of female-steroid hormones in environ-mental samples.</a> Trends Anal. Chem. 34, 35-58 (2012).</li>
<li>Ciofi, L., Fibbi, D., Chiuminatto, U., Coppini, E., Checchini, L., Del Bubba, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fully+automated+on-line+solid+phase+extraction+coupled+to+high-performance+liquid+chromatography-tandem+mass+spectrometric+analysis+at+sub-ng%2FL+levels+of+selected+estrogens+in+surface+water+and+wastewater%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chromatogr.+A%22%5BJournal%5D)">Fully automated on-line solid phase extraction coupled to high-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometric analysis at sub-ng/L levels of selected estrogens in surface water and wastewater.</a> J. Chromatogr. A. 1283, 53-61 (2013).</li>
<li>Robles-Molina, J., Lara-Ortega, F. J., Gilbert-Lopez, B., Garcia-Reyes, J. F., Molina-Diaz, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multi-residue+method+for+the+determination+of+over+400+priority+and+emerging+pollutants+in+water+and+wastewater+by+solid-phase+extraction+and+liquid+chromatography-time-of-flight+mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chromatogr.+A%22%5BJournal%5D)">Multi-residue method for the determination of over 400 priority and emerging pollutants in water and wastewater by solid-phase extraction and liquid chromatography-time-of-flight mass spectrometry.</a> J. Chromatogr. A. 1350, 30-43 (2014).</li>
<li>Huang, C. H., Sedlak, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+estrogenic+hormones+in+municipal+waste+water+effluent+and+surface+water+using+enzyme-linked+immunosorbent+assay+and+gas+chromatography%2Ftandem+mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Environ.+Toxicol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Analysis of estrogenic hormones in municipal waste water effluent and surface water using enzyme-linked immunosorbent assay and gas chromatography/tandem mass spectrometry.</a> Environ. Toxicol. Chem. 20, 133-139 (2001).</li>
<li>Hintemann, T., Schneider, C., Schöler, H. F., Schneider, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Field+study+using+two+immunoassays+for+the+determination+of+estradiol+and+ethinylestradiol+in+the+aquatic+environment%5BTitle%5D)+AND+%22Water+Res%22%5BJournal%5D)">Field study using two immunoassays for the determination of estradiol and ethinylestradiol in the aquatic environment.</a> Water Res. 40, 2287-2294 (2006).</li>
<li>Farré, M., Kuster, M., Brix, R., Rubio, F., Lopez de Alda, M. J., Barcelo, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+study+of+an+estradiol+enzyme-linked+immunosorbent+assay+kit%2C+liquid+chromatography-tandem+mass+spectrometry%2C+and+ultra-performance+liquid+chromatography-quadrupole+time+of+flight+mass+spectrometry+for+part-per-trillion+analysis+of+estrogens+in+water+samples%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chromatogr.+A%22%5BJournal%5D)">Comparative study of an estradiol enzyme-linked immunosorbent assay kit, liquid chromatography-tandem mass spectrometry, and ultra-performance liquid chromatography-quadrupole time of flight mass spectrometry for part-per-trillion analysis of estrogens in water samples.</a> J. Chromatogr. A. 1160, 166-175 (2007).</li>
<li>Pu, C., Wu, Y. F., Yang, H., Deng, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trace+analysis+of+contraceptive+drug+levonorgestrel+in+waste+water+samples+by+a+newly+developed+indirect+competitive+enzyme-linked+immunosorbent+assay+%28ELISA%29+coupled+with+solid+phase+extraction%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Chim.+Acta%22%5BJournal%5D)">Trace analysis of contraceptive drug levonorgestrel in waste water samples by a newly developed indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) coupled with solid phase extraction.</a> Anal. Chim. Acta. 628, 73-79 (2008).</li>
<li>Van Emon, J. M., Gerlach, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+status+report+on+field-portable+immunoassay%5BTitle%5D)+AND+%22Environ.+Sci.+Technol%22%5BJournal%5D)">A status report on field-portable immunoassay.</a> Environ. Sci. Technol. 29 (7), 312A-317A (1995).</li>
<li>Farré, M., Brix, R., Barcelò, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Screening+water+for+pollutants+using+biological+techniques+under+European+Union+funding+during+the+last+10+years%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Anal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Screening water for pollutants using biological techniques under European Union funding during the last 10 years.</a> Trends Anal. Chem. 24 (6), 532-545 (2005).</li>
<li>Schneider, C., Schöler, H. F., Schneider, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+enzyme-linked+immunosorbent+assay+for+ethinylestradiol+using+a+long-chain+biotinylated+EE2+derivative%5BTitle%5D)+AND+%22Steroids%22%5BJournal%5D)">A novel enzyme-linked immunosorbent assay for ethinylestradiol using a long-chain biotinylated EE2 derivative.</a> Steroids. 69, 245-253 (2004).</li>
<li>Heub, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+and+portable+solid+phase+extraction+platform+for+immuno-detection+of+17%CE%B2-estradiol+in+water%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chrom.+A%22%5BJournal%5D)">Automated and portable solid phase extraction platform for immuno-detection of 17β-estradiol in water.</a> J. Chrom. A. 1381, 22-28 (2015).</li>
<li>Petrovic, M., Eljarrat, E., Lopez de Alda, M. J., Barcelo, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endocrine+disrupting+compounds+and+other+merging+contaminants+in+the+environment%3A+a+new+survey+on+new+monitoring+strategies+and+occurrence+data%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Bioanal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Endocrine disrupting compounds and other merging contaminants in the environment: a new survey on new monitoring strategies and occurrence data.</a> Anal. Bioanal. Chem. 378, 549-562 (2004).</li>
<li>Richardson, S. D., Ternes, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Water+analysis%3A+Emerging+contaminants+and+current+issues%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Water analysis: Emerging contaminants and current issues.</a> Anal. Chem. 86, 2813-2848 (2014).</li>
</ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

Se propuso un nuevo método para la preparación de muestras de agua, seguido de análisis mediante inmunoensayo. El instrumento permite realizar extracción en fase sólida en una forma automatizada y fácil de usar. La filtración de la muestra de agua antes de su inyección en el sistema es crítico. Cualquier partículas aún presentes en la solución sería potencialmente causar la obstrucción de la red fluídica y obstruir la columna de la SPE. Otro paso importante es la preparación de la columna de...

Preparación de la muestra es un paso importante en cualquier proceso analítico. En particular, la eliminación de los efectos de matriz, disminución de interferencias, y el enriquecimiento de la sustancia analizada son necesarios para obtener resultados precisos y llegar a los límites de detección bajos. Compuestos disruptores endocrinos (EDC) son de particular interés debido a su acción sobre los organismos vivos, incluso cuando están presentes en niveles muy bajos en el medio ambiente. La hormona natural 17β-estradiol está presente en la contaminación de las aguas de la UE Lista de Vigilancia y propenso a ser añadido a la lista de sustancias prioritarias reguladas por la Directiva Marco del Agua. Extracción en fase sólida (SPE) se aplica comúnmente para el análisis de pequeños contaminantes en el agua, con tanto químicos 1-5 (cromatografía, espectrometría de masas) y 6-9 métodos de detección inmunológicos. Este último ganó interés en el campo de la vigilancia del medio ambiente, como los inmunoensayos están disponibles en gran variedad de formatos, son específicos de la target analito, y alcanzar límites de detección bajos. 6, 7, 10, 11 Varios ensayos de inmunoabsorción ligados a enzimas (ELISA) están disponibles comercialmente y permiten analizar múltiples muestras a la vez en una placa de múltiples pocillos. El procedimiento consiste en las etapas de reacción sucesivas que pueden tardar un par de horas. El producto final de la reacción se puede detectar ópticamente para determinar la concentración de la molécula diana sobre la base de una curva de calibración. Procedimientos clásicos SPE incluyen sorbente pre-acondicionado, extracción de la muestra, lavado, elución, y la concentración por evaporación del eluyente. El disolvente utilizado para la dilución de este extracto se elige en función del método de detección. Para los métodos inmunológicos, la cantidad de influencias disolventes orgánicos fuertemente la sensibilidad del método. 12 Además de la recuperación y las actuaciones pre-concentración, el método también debe ser sencilla y rentable. Automatización del procedure ayuda a reducir los errores relacionados con humanos. En nuestro trabajo anterior 13 introdujimos nuestro prototipo para SPE automatizado, y nuestro método se aplicó al análisis de la hormona natural 17β-estradiol en muestras de agua de mar. Con el presente vídeo nos gustaría resaltar las ventajas técnicas de aplicación de este método en comparación con los tradicionales off-line y on-line SPE, y su compatibilidad especial con detección por inmuno-reacciones. Se describe el protocolo aplicado a muestras de agua para la detección de 17β-estradiol. SPE se realiza con octadecil-sílice (C18) fase sorbente y la elución se realiza con metanol diluido.

<table><tbody><tr><td>Membrana filtrante 0,2 &mu; m tamaño de poro</td><td>Merck Millipore</td><td>GNWP04700</td><td>Para la filtración de muestras</td></tr><tr><td>Membrana de nailon 11 &mu; m tamaño de poro</td><td>Merck Millipore</td><td>NY1104700</td><td>Para columna SPE</td></tr><tr><td>Punzón de biopsia desechable 5 mm</td><td>Presupuesto médico</td><td>39302439</td><td></td></tr><tr><td>Nucleodur C18 ec&nbsp;</td><td>Macherey Nagel</td><td>713550.01</td><td>50 &mu; m diámetro de partícula</td></tr><tr><td>Agua de mar sintética</td><td>Sigma Aldrich</td><td>SSWS500-500ML</td><td></td></tr><tr><td>Metanol</td><td>VWR</td><td></td><td></td></tr><tr><td>17beta-estradiol estándar</td><td>Enzo Life Science</td><td></td><td>300 ng/ml</td></tr><tr><td>17beta-estradiol Kit ELISA</td><td>Enzo Life Science</td><td>ADI-900-008</td><td>96 pocillos, rango 30 - 3.000 ng/L</td></tr></tbody></table>

un método simple para la fase sólida automatizada extracción de muestras de agua para análisis inmunológico de los pequeños contaminantes

A Simple Method for Automated Solid Phase Extraction of Water Samples for Immunological Analysis of Small Pollutants

Se propone un nuevo método para la extracción en fase sólida (SPE) de muestras de agua del medio ambiente. El prototipo desarrollado es rentable y fácil de usar, y permite realizar SPE rápida, automatizada y sencilla. La solución de pre-concentrada es compatible con el análisis por inmunoensayo, con un contenido de disolvente orgánico de bajo. Se describe un método para la extracción y pre-concentración de hormona natural 17β-estradiol en muestras de 100 ml de agua. SPE en fase inversa se realiza con sorbente octadecil-sílice y la elución se realiza con 200 l de metanol 50% v / v. Eluyente se diluye mediante la adición de agua DI para reducir la cantidad de metanol. Después de preparar manualmente la columna de la SPE, el procedimiento general se realiza automáticamente dentro de 1 hora. Al final del proceso, la concentración de estradiol se mide mediante el uso de un ensayo de inmuno-sorbente ligado a enzima comercial (ELISA). 100 veces pre-concentración se consigue y el contenido de metanol en sólo el 10% v / v. Recuperaciones completas de la moléculase consiguen con 1 ng / L claveteado muestras desionizada y sintéticos de agua de mar.

Reproducibilidad de embalaje sorbente se evaluó mediante el secado y la ponderación de la sorbente pipeteado en viales de vidrio y el resultado se muestra en la Figura 1. Reproducibilidad del momento de la inyección fue probado para muestras de 100 ml, como se muestra en la Figura 2. Concentración en inicial y pre concentrada claveteado muestras se determinaron mediante el uso de un kit comercial de ELISA para 17β-estrad...

Se presenta un protocolo para la extracción y preconcentración de estradiol de muestras de agua mediante el uso de un sistema automatizado y miniaturizado.

Un método simple para la fase sólida automatizada Extracción de muestras de agua para análisis inmunológico de los pequeños contaminantes

A new method for solid phase extraction (SPE) of environmental water samples is proposed. The developed prototype is cost-efficient and user friendly, and ...

El objetivo general de este método de preparación de muestras es preconcentrar contaminantes orgánicos pequeños a partir de muestras de agua, de manera sencilla, rentable y automatizada. Este método puede reemplazar los procesos estándar de extracción en fase sólida (SPE) al estudiar la contaminación de muestras de agua mediante métodos de inmunodetección, como inmunoensayos en placas de pozo o biosensores. Las principales ventajas de esta técnica son que el procedimiento de SPE es automatizado, mientras que el tamaño físico y el costo de los instrumentos son bajos en comparación con los enfoques tradicionales.Además, los rendimientos del proceso de enriquecimiento cumplen con los requisitos del análisis de inmunoensayos tanto en cuanto al bajo contenido de disolvente como a la eficiencia de preconcentración. Primero, filtre una muestra de agua de 100 milímetros con un filtro de tamaño de poro de cero punto dos micrómetros. Coloque la muestra filtrada en un frasco de vidrio con rosca GL 45.Prepare 300 microlitros de eluyente diluyendo metanol en agua desionizada al 50 por ciento en volumen en un tubo hermético. A continuación, prepare una suspensión de 20 miligramos por mililitro de partículas de sorbente de sílice octadecil añadiendo 1.600 microlitros de metanol seguidos de 400 microlitros de agua desionizada a 40 miligramos de sorbente de fase reversa en un vial de vidrio. Cierre firmemente la tapa y agite con un mezclador de vórtice.Coloque una membrana de nailon con un tamaño de poro de 11 micrómetros sobre una doble capa de tejido anti-polvo. Corte dos pequeñas partes en la membrana con un punzón de tres milímetros de diámetro. Luego, tome una de las pequeñas membranas con pinzas planas para filtros y colóquela en un lado de la columna.A continuación, atornille el conector de fondo plano con el tubo y apriete. Luego, dibuje una flecha sobre el cuerpo de la columna, apuntando hacia el extremo donde se colocó la membrana. En este punto, sujete la columna al soporte con la flecha orientada hacia la parte inferior.Conecte una jeringa desechable vacía de 10 mililitros al extremo del tubo de la columna utilizando los conectores de bloqueo inferior. Agite la suspensión del sorbente con el mezclador de vórtice y pipetee rápidamente 100 microlitros en el centro de la columna. Mientras inyecta, aspire suavemente la solución pipeteada a través de la membrana utilizando la jeringa con la otra mano.La preparación de la columna de EPE es muy importante. Debe asegurarse de aspirar adecuadamente la solución a través de la membrana utilizando la jeringa mientras inyecta la suspensión de partículas en la columna. De lo contrario, las partículas no se empaquetarán densamente.Repita el proceso anterior dos veces más, agitando la suspensión stock entre todos los pasos de pipeteo, para asegurar una suspensión homogénea de las partículas en la solución. Después de que toda la suspensión haya sido cargada y secada mediante aspiración con una jeringa, mantenga la jeringa en posición y coloque la segunda membrana de nailon en la parte superior utilizando la pinza con la otra mano. A continuación, enrosque el segundo conector con un tubo y deseche la jeringa.En este momento, ajuste la columna del dispositivo de extracción en fase sólida utilizando los conectores de bloqueo inferiores. Conecte el frasco que contiene la muestra al dispositivo atornillando la tapa de seguridad GL 45 proporcionada. Añada 200 microlitros de eluyente al depósito de eluyente.Luego, cargue 800 microlitros de agua desionizada en el depósito de dilución. Verifique que el regulador de presión esté en posición cerrada girándolo en sentido contrario a las agujas del reloj hasta que no sea posible seguir moviéndolo. Después de encender el prototipo, ingrese los valores 580 para pset y 30 para delta pset.Para ajustar el regulador de presión, encienda la bomba. Luego, gire manualmente el regulador de presión hasta que el valor leído para preg sea inferior pero cercano a 320 milibares. Después de detener la bomba, inicie el procedimiento de SPE presionando inicio en la esquina del modo automatizado.Una vez completado el procedimiento de SPE, cierre el pequeño frasco de la muestra y almacénelo a cuatro o cinco grados Celsius en la oscuridad hasta el análisis por ELISA. Para limpiar el sistema, prepare una solución de 10 mililitros de metanol al 70 por ciento en volumen en un frasco de vidrio con rosca GL 45. Desconecte la columna de SPE y tape los tubos con conectores.En el modo automatizado, seleccione el archivo de limpieza e inícielo con los mismos ajustes de presión utilizados previamente para pset, delta pset y preg. La reproducibilidad del empaquetado del sorbente se evaluó secando y pesando el sorbente pipeteado en viales de vidrio. La reproducibilidad del tiempo de inyección se probó con muestras de 100 mililitros.Las concentraciones de las muestras enriquecidas y originales se determinaron utilizando un kit comercial de ELISA para el 17 beta-estradiol. A partir de las curvas de calibración es evidente que la proporción de metanol en la muestra enriquecida no afecta la sensibilidad del inmunoensayo. Se calcularon recuperaciones de 128 ± 22 por ciento y 107 ± 6 por ciento para agua desionizada y agua de mar artificial, respectivamente.Una vez dominada, la preparación de una columna de extracción en fase sólida puede realizarse en menos de cinco minutos, si se lleva a cabo correctamente. Todo el procedimiento de extracción en fase sólida puede completarse en menos de una hora. Tras su desarrollo, esta técnica allanó el camino para que los investigadores en el campo de la ciencia ambiental exploraran el desarrollo de métodos de inmunodetección para el monitoreo de contaminantes orgánicos pequeños.Después de ver este video, debería tener una buena comprensión de cómo preparar muestras de agua utilizando nuestro instrumento automatizado y rentable para el análisis de contaminantes mediante inmunoensayos. No olvide que trabajar con contaminantes orgánicos y disolventes puede ser peligroso, y siempre se deben tomar precauciones, como usar guantes adecuados y gafas de protección, al realizar este procedimiento.

a-simple-method-for-automated-solid-phase-extraction-water-samples

Research

Investigación

JoVE Journal

Environment

Entorno

Este protocolo se describe el uso de un flujo tangencial de fibra hueca sistema de ultrafiltración concentración de la muestra y una disociación calor como pasos alternativos para la detección de vías...

Una modificación de la EPA Método 1623 que utiliza el flujo tangencial de fibra hueca de ultrafiltración y la Plaza de calor de disociación para detectar a base de agua<em&gt; Cryptosporidium</em&gt; Y<em&gt; Esp.</em

En este video, demostramos la extracción de metabolitos basada en sondas SPME de un riñón de un donante previamente extraído. Los metabolitos extraídos se pueden utilizar para realizar análisis metabolómicos y lipidómicos con el fin de evaluar la calidad del órgano para el trasplante.

Muestreo de microextracción en fase sólida: una técnica basada en sondas para la extracción de muestras de tejidos de injerto

Este manuscrito describe un enfoque automatizado de selección del tamaño del gel para purificar fragmentos de ADN para la secuenciación de próxima generación. La tecnología Ranger proporciona una automatización completa de todo el proceso de carga de gel de agarosa, análisis electroforético y recuperación de fragmentos de ADN específicos, lo que permite bibliotecas de secuenciación de próxima generación de alto rendimiento y alta calidad.

Automatizado Gel Tamaño Selección para mejorar la calidad de las bibliotecas de secuenciación de próxima generación Preparado a partir de muestras de agua del medio ambiente

Se presenta el protocolo de fabricación de un microchip de extracción en fase sólida asistido por dipolo para el análisis de metales traza.

La fabricación de un dipolo-asistida en fase sólida para extracción Microchip Análisis de trazas de metales en muestras de agua

Se presenta un protocolo sobre la caracterización y aplicación de cinco dispositivos de muestreo pasivo diferentes.

Caracterización y Aplicación de muestreadores pasivos para la vigilancia de plaguicidas en el agua

Se requiere un cuidado especial al usar "técnicas limpias" para recolectar y procesar adecuadamente muestras de agua para estudios de metales traza en ambientes acuáticos. Se presenta un protocolo para procedimientos de muestreo, procesamiento y análisis con el objetivo de obtener datos de monitoreo ambiental confiables y resultados con alta sensibilidad para estudios detallados de metales traza.

Limpia Muestreo y Análisis de río y estuarios, aguas de trazas metálicas Estudios

Presentamos el VacuSIP, un método simple, no intrusivo y confiable para el muestreo puntual limpio y preciso de agua. El sistema fue desarrollado y evaluado para la recolección simultánea del agua inhalada y exhalada por alimentadores de suspensión bentónica in situ, para medir limpiamente la remoción y excreción de partículas y compuestos disueltos.

VacuSIP, un método mejorado para InEx<em&gt; In Situ</em&gt; Medición de las partículas y compuestos disueltos procesada por Alimentadores Active Suspension

Se presenta un protocolo para la extracción completa de lípidos, metabolitos y proteínas de tejidos biológicos utilizando una muestra.

Un método de extracción fraccionada simple para el análisis comprensivo de metabolitos, lípidos y proteínas a partir de una sola muestra

Aquí, presentamos un protocolo para la cuantificación específica secuencial y análisis no dirigidos de compuestos fluorados en agua por espectrometría de masas. Esta metodología proporciona niveles cuantitativos de fluoroquímicos conocidos compuestos e identifica sustancias químicas desconocidas en muestras relacionadas con cálculos semicuantitativo de su abundancia.

Identificar por-polifluorado química especies y con un flujo de trabajo combinado dirigida y no dirigida-detección de alta resolución espectrometría de masas

Este protocolo presenta un flujo de trabajo totalmente automatizado para la extracción de geosmina y 2-metilisoborneol del agua y tejidos de peces ricos en lípidos. El método permite la detección temprana de estas moléculas antes de que alcancen los umbrales de olor. Se proporcionan datos representativos de un entorno acuícola.

Extracción y detección de geosmina y 2-metilisoborneol en agua y peces utilizando sondas de extracción por sorción de alta capacidad y GC-MS

Aprende un método automatizado de extracción en fase sólida para preconcentrar contaminantes orgánicos en muestras de agua. Esta técnica mejora el análisis inmunológico con menor coste y huella instrumental.

Un método simple para la fase sólida automatizada Extracción de muestras de agua para análisis inmunológico de los pequeños contaminantes (Video) | JoVE Journal

Un método simple para la fase sólida automatizada Extracción de muestras de agua para análisis inmunológico de los pequeños contaminantes

Explorar más videos