Name: La inducción de ictus isquémico y la isquemia-reperfusión en ratones con la técnica de oclusión de la arteria Medio y Visualización de un infarto Área (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-02-02T12:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 8 s
Description: Aprende a inducir ictus isquémico en ratones mediante oclusión de la arteria cerebral media, manteniendo la arteria cerebral externa intacta para infusiones terapéuticas directas. Este modelo fiable permite estudiar mecanismos y tratamientos del accidente cerebrovascular.

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Nos gustaría agradecer al Dr. Lei Chen (Escuela de Medicina Icahn en Mount Sinai, NY) quien estableció por primera vez este modelo en nuestro laboratorio. Apoyado en parte por HL126559, DA039576, MH098891, MH63022, MH072567, DA027569 y NSC 2015/17/B/NZ7/02985. El Dr. Luc Bertrand cuenta con el apoyo parcial de una beca postdoctoral de la American Heart Association (16POST31170002).

Todos los procedimientos fueron aprobados por la Universidad de Miami Institucional Cuidado de Animales y el empleo Comisión (IACUC) de acuerdo con los Institutos Nacionales de Salud (NIH). Se requiere el uso de equipo estéril y técnicas asépticas. 1. Preparación de la oclusión de la sutura <ol><li> Utilice una sutura de mm de diámetro 0,21 para los ratones entre 20 a 25 g y 0,23 mm para los ratones entre 25 - 35 g de peso corporal. La elección del tipo de suturas para el procedimiento de MCAO depende del peso animal. </li><li> El uso de una pluma de plata, marcar la sutura a los 9 mm a partir de la punta recubierta de silicona. Esto servirá como una guía para la longitud de inserción. </li></ol> 2. Preparación para la Cirugía <ol><li> Anestesiar al ratón con isoflurano mezclado con oxígeno, utilizando un sistema de anestesia de laboratorio. Utilice isoflurano en la posición 5 y el flujo de oxígeno a 2 en la máquina comercial (Ver Tabla de Materiales). Transferir el animal a la surgery la superficie y mantener la anestesia utilizando un cono de la nariz (1,5 utilización establecer isoflurano - 2,5 y flujo de oxígeno a las 2). <ol><li> Asegúrese de que la frecuencia respiratoria del ratón es de alrededor de 1 - 2 respiración por segundo sin jadear. Además, asegúrese de que el animal no presenta reacción estimulación barbas y el reflejo del pedal (puntera pellizco). Controlar la frecuencia y el esfuerzo de respiración durante la cirugía, por lo menos cada 5 minutos. </li></ol></li><li> Ponga una gota de lubricante oftálmica en cada ojo utilizando un hisopo estéril para evitar que se sequen durante el procedimiento. Alternativamente, aplicar pomada oftálmica al ojo de un tubo farmacéutica estéril. </li><li> Da la vuelta al animal a su espalda y afeitar el área de la incisión. Después, desinfectar a fondo el área de la cirugía usando 70% de etanol, seguido de clorhexidina, y el hisopo final con 70% de etanol. Colocar el animal sobre una superficie quirúrgica caliente bajo un microscopio estereoscópico. </li></ol> 3. La disección de la arteria carótida común e Interno / Externo de ramificación <ol><li> Usando tijeras quirúrgicas y fórceps, realizar una incisión en la línea media superficial en el cuello, desde arriba del esternón por debajo de la mandíbula (aproximadamente 3 - 4 cm). paño quirúrgico debe ser colocado alrededor del área de la cirugía para prevenir instrumentos entren en contacto con superficies no estériles. El paño quirúrgico se omitió en el vídeo actual para facilitar el rodaje. </li><li> Con unas pinzas, graso cuidadosamente separada y el tejido conectivo para exponer la tráquea. Tejido debe separar fácil y natural para ambas partes. </li><li> Coloque una almohada (objeto redondo, alrededor de 0,5 cm de diámetro) en la parte posterior del cuello de los ratones para extender el cuello, exponiendo aún más el área de cirugía. </li><li> Abra la incisión usando un retractor de tejidos o ganchos. </li><li> En el lado izquierdo del animal de la tráquea, pinzas cuidadosamente con el tejido conectivo para exponer la arteria carótida común izquierda (CCA). Tenga cuidado de no dañar los nervios y las venas principales que vienen con el CCA. </li><li> Continuar la exposición de la CCA, teniendo cuidado de separar de los tejidos subyacentes, y exponer la parte superior de &quot;Y&quot; de ramificación de la arteria cerebral interna (ACI) y la arteria cerebral externa (ACE). Para ayudar en la separación de la CCA, insertar las pinzas curvas en virtud de la CCA para perforar el tejido conjuntivo y luego permitir que se abran lentamente. </li></ol> 4. Preparación de la CCA para la MCAO Sutura de inserción <ol><li> Inserte 3 segmentos de sutura de nylon de aproximadamente 4 cm de longitud en virtud de la CCA. Asegúrese de que la CCA no es retorcido ya que esto complicaría drásticamente la inserción de la sutura. </li><li> En el punto más bajo posible, cerrar la parte inferior de la sutura con un nudo permanente. </li><li> Atar la sutura superior justo debajo de la ICA / ECA ramificación usando un nudo corredizo extraíble. </li><li> Atar la sutura media que usa un nudo corredizo extraíble, pero mantenerlo abierto. Es importante dejar suficiente espacio como para no obstaculizar la inserción de sutura. </li><li> El uso de microdisección de ciencia primaverassors, realizar una incisión en la CCA entre la parte inferior y las suturas medias. Realizar la incisión de 0,2 mm cerca de la parte inferior de sutura. </li></ol> 5. Medio oclusión de la arteria cerebral <ol><li> Con unas pinzas, inserte la sutura MCAO en la incisión CCA, guiándolo hasta la parte superior. Realice este paso rápidamente después del paso 4.5 para prevenir la coagulación y el cierre de la abertura de la CCA. En el caso de que la inserción de la sutura está bloqueado, usar las puntas de fórceps para volver a abrir la incisión. </li><li> atar suavemente hacia abajo la sutura media de silicona en la parte de sutura MCAO usando un nudo corredizo para restringir el flujo de sangre a su alrededor, pero lo suficientemente floja como para permitir que se mueva libremente. </li><li> Con cuidado, deshacer la sutura de la parte superior, asegurándose de que la sutura MCAO no se salga. </li><li> Insertar la sutura MCAO en el ICA por un par de milímetros y a continuación, volver a cerrar la sutura superior, de la misma manera como se describe en el paso 5.2. </li><li> Guiar la sutura MCAO a la zona de la oclusión. Indicación de inserción exitosa esevidente por la baja cantidad de expulsión de la sangre de la incisión CCA y que el marco de plata de 9 mm se encuentra entre la incisión CCA y la bifurcación ICA / ECA. La confirmación adicional de la oclusión exitosa puede obtenerse utilizando métodos de control tales como un sistema de monitoreo del flujo sanguíneo láser Doppler 15, 16. NOTA: Una gota en 90% del flujo de sangre al área del cerebro medio en el lado área ocluida indica oclusión éxito. </li><li> Después de la oclusión exitosa, atar la sutura media y alta fuerza. Si se realiza la inserción simulada, no se volverá a cerrar suturas pero en lugar de inmediato vaya al paso 7.3. </li></ol> 6. Cierre la incisión y el cuidado post-operatorio <ol><li> Cirugía estética en los puntos de sutura en el área de la incisión. </li><li> Retire retractor de tejido o ganchos y almohada. </li><li> área de sutura limpia utilizando solución salina estéril y un hisopo de algodón. </li><li> Cerrar la incisión utilizando nylon sutura / aguja y pinzas. </li> &lt;(kg sc, por ejemplo, buprenorfina 0,1 mg / dos veces al día) drogas li&gt; Administrar antiinflamatorio (por ejemplo, carprofeno 10 mg / kg, sc) y analgésicos para aliviar el malestar post-operatorio. Coloque los ratones en una jaula colocada sobre una almohadilla caliente para prevenir la hipotermia y dar acceso ad labium a agua y comida blanda. </li><li> Controlar la recuperación de los animales (de 5 - 10 min) y los signos de un derrame cerebral. Pueden variar de leve parálisis lateral y dando vueltas a la contracción severa del flanco contralateral y el laminado. Varios puntos de evaluación se muestran en la discusión. Animales que presenten signos de dificultad respiratoria o convulsiones severas deben ser sacrificados. </li><li> En función de protocolo de isquemia-reperfusión, dejar la sutura MCAO en lugar de 30 minutos a 120 minutos o más. Reduciendo el tiempo de oclusión previene la mortalidad. </li><li> Para oclusión permanente, dejar la sutura MCAO en su lugar durante 24 horas, sin embargo la tasa de mortalidad significativa es de esperar. Después de este lapso de tiempo, proceder a step 7. <ol><li> Si se utiliza el modelo de oclusión permanente, mantener a los ratones en la jaula hasta el punto final. En ese momento, retirar la sutura (pasos 7.1 a 7.8). Este procedimiento también se puede realizar después de la eutanasia. </li></ol></li></ol> 7. La reperfusión <ol><li> Anestesiar al animal de nuevo (siga las instrucciones en 2.1) y retirar las suturas de cierre de la herida. </li><li> El uso de pinzas y separadores de tejidos, vuelva a abrir la incisión y exponer la CCA. </li><li> Retirar con cuidado la sutura superior y tire suavemente de la sutura MCAO hasta que la parte recubierta de silicona está situado en el nudo medio. </li><li> Rehacer el nudo superior de la sutura para evitar que la sangre que fluye a pasar la sutura (que no tiene que ser un nudo corredizo). </li><li> Con cuidado deshacer el nudo medio y tirar de la sutura más allá del nudo superior, pero mantenerlo dentro de la CCA. </li><li> Cierre bien el nudo superior para bloquear el flujo sanguíneo de la arteria. </li><li> Extraiga completamente la sutura MCAO y cerrar herméticamente el nudo medio. </li><li> La sutura puede ser MCAOreutilizado varias veces. Después de cada uso, limpie la sutura cuidadosamente en 70% de etanol para eliminar los contaminantes (por ejemplo, sangre o tejido) usando una gasa estéril. Después, colocar la sutura en una bolsa de esterilización y esterilizarlo. </li><li> Repita los pasos 6.1 a 6.4 y monitorear la recuperación de los animales. </li></ol> 8. Análisis de Tejidos <ol><li> Para controlar el volumen sistólico, diseccionar el cerebro. <ol><li> La eutanasia del ratón utilizando un proceso de dos pasos. En primer lugar, exponer a los animales a una sobredosis de isoflurano hasta que deje de respirar. Para la tinción de TTC, decapitar al ratón inmediatamente y proceder a la extracción del cerebro. Para seccionar cerebro (por ejemplo, para los análisis de inmunotinción), lleve a cabo la perfusión a través de una punción cardiaca antes de la decapitación. </li><li> De corte de la cabeza en la base del cráneo y cortar el cuero cabelludo de la abertura del cuello a la parte superior del cráneo hasta entre los ojos. Con el cráneo expuesto, cortar el hueso a lo largo de ambos lados a partir de la abertura de la base del cráneohasta la cuenca del ojo. Hacer este corte a lo largo de la parte ancha del cráneo. Tenga cuidado de no llegar demasiado profundo con unas tijeras para prevenir daños en el cerebro. </li><li> Después, cortar el hueso entre las dos cuencas de los ojos. </li></ol></li><li> Con unas pinzas, levante la parte superior del cráneo para exponer el cerebro. No debe haber sólo una pequeña resistencia. Si no lo hará fácilmente, incisiones cráneo pueden estar incompletos. Palanca para extraer el cerebro suavemente con pinzas curvas contundentes. El cerebro todavía podría estar unido por varios nervios. Proceder lentamente, la eliminación de los archivos adjuntos a lo largo del camino. </li><li> Coloque el cerebro fresco en una matriz de cerebro 1 mm, añadir un par de gotas de PBS, y cortar a lo largo de la matriz usando una hoja de afeitar o una cuchilla criostato. </li><li> Transferir el cerebro a un plato de 100 mm y añadir solución de tinción (2% de cloruro de 2,3,5-trifeniltetrazolio [TTC] disuelto en PBS) para cubrir el fondo del plato. El uso de dos pinzas, separar todas las secciones de cerebro (parte frontal hacia abajo) y colocarlos en el orden en el fondo del plato. NOTA: La tinción se convertirá tejido viable rojo, con tejido no viable restante blanco. Calentamiento de la solución a 37 ° C se acelerará la tinción. Los signos de la zona de recorrido (blanco) se pueden ver tan pronto como 90 minutos después de la apoplejía y permanecen visibles durante más de 7 días. Imaging se debe hacer junto con una regla para permitir el cálculo del volumen sistólico. </li><li> Cerebros disecados de proceso para el seccionamiento, inmuno-tinción, aislamiento de proteínas, o una variedad de otros procedimientos 17, 18, 19. </li></ol>

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</ol>

Los autores no tienen conflictos de intereses ni competencias.

La utilización con éxito de la MCAO método descrito depende de una comprensión de la anatomía del flujo sanguíneo cerebral altamente. Desde la correcta colocación de la sutura es difícil de discernir debido a la falta de pistas visuales directos, la práctica repetida es importante dominar el procedimiento antes de usarla para estudios de investigación. El volumen de eyección debe ser analizado para asegurar resultados consistentes. La adición de un sistema de láser Doppler puede ayudar a determinar el éxito de oclusión ...

El estudio de la enfermedad cardiovascular, tal como apoplejía, se basa en el uso de modelos in vivo. Para entender la posible implicación de la isquemia, la toxicidad del fármaco, y / o tratamiento, hay una necesidad de usar un modelo adecuado, estandarizado, fiable y reproducible de la enfermedad, lo que permite estudios comparativos entre los grupos de tratamiento. En este manuscrito, estamos utilizando ratones, dada la disponibilidad de un gran número de ratones transgénicos y los modelos de evaluación estandarizados. Rastrillar puntajes para evaluar los déficits motores y de comportamiento después del accidente cerebrovascular isquémico experimental y el después de la recuperación han sido desarrollados 1, 2. Varios modelos de accidente cerebrovascular isquémico están disponibles, tales como isquemia global completa cerebral, isquemia global incompleta, isquemia cerebral multifocal y la isquemia cerebral focal. El último grupo es también la categoría de derrame cerebral más frecuente en los pacientes. La mayoría de las vísperasnts se inician por la formación de una oclusión embólica o trombótica en o cerca de la arteria cerebral media (MCA). Teniendo en cuenta estos parámetros, el modelo presentado estrechamente imita etiología de la enfermedad de apoplejía humana y hace que los resultados obtenidos altamente relevante 3. Sin embargo, la traducción de los descubrimientos de modelos animales para el tratamiento de enfermedades en los seres humanos ha demostrado ser un reto. Hasta ahora, sólo el uso de activador de plasminógeno tisular trombolítico se ha aprobado para el tratamiento del ictus isquémico agudo 4. Entre los modelos de isquemia cerebral focal en ratón, modelo accidente cerebrovascular circulación cerebral posterior y modelo de trombosis venosa cerebral son altamente invasivos, disminuyendo su aplicabilidad y la restricción de la gama de análisis que se pueden realizar. Sin embargo, otras técnicas, tales como el modelo embólico, modelo photothrombosis, modelo de carrera de la endotelina-1 inducida, y oclusión de la arteria cerebral media de sutura intraluminal (MCAO modelo), están disponibles para su uso sin tales limitaciones. El modelo MCAO es una técnica descrita en este protocolo. Ofrece un método fiable de inducir isquemia cerebral focal que puede ser fácilmente reperfundido y realiza de una manera de alto rendimiento. Hay dos enfoques para este modelo, a saber, los métodos de Zea-Longa y Koizumi. Se diferencian ligeramente en la forma en que se inserta la sutura oclusión de la vasculatura. En la técnica de Zea-Longa, la sutura se inserta a través de la arteria carótida externa 5. La técnica que aquí se presenta es una modificación del método de Koizumi en el que la sutura oclusiva se inserta a través de la arteria carótida común 6. El modelo MCAO se ha aplicado con éxito para evaluar los diferentes eventos que se producen durante el accidente cerebrovascular isquémico. Después de la reperfusión, edema cerebral puede ser observado junto con la ruptura de la barrera sangre-cerebro. la muerte neuronal pico se observa generalmente a las 24 horas; sin embargo, se reconvierte a los niveles basales después de 7 días 7. En los seres humanos, el sexo y la edad son variables importantes en la determinación pronóstico del accidente cerebrovascular, esto también se observa en ratones y ratas 8, 9, 10. Varias publicaciones han utilizado el modelo MCAO para demostrar la eficacia del tratamiento 11, 12, 13, 14.

<table><tbody><tr><td>Sutura MCAO 0,23 mm</td><td>Doccol</td><td>702345PK5Re</td><td></td></tr><tr><td>Sutura MCAO 0,21 mm</td><td>Doccol</td><td>702145PK5Re</td><td></td></tr><tr><td>Grapas para</td><td>bolígrafo de plata</td><td>503205</td><td></td></tr><tr><td>Máquina de anestesia</td><td>Vetequip</td><td>901806</td><td></td></tr><tr><td>Tijeras quirúrgicas</td><td>Fine science tool</td><td>14558-09</td><td></td></tr><tr><td>Pinzas quirúrgicas de punta recta</td><td>Fine herramienta de ciencia</td><td>00108-11</td><td></td></tr><tr><td>Pinza quirúrgica con punta angulada</td><td>Herramienta de ciencia fina</td><td>00109-11</td><td></td></tr><tr><td>Tijeras de resorte</td><td>Herramienta de ciencia fina</td><td>15000-08</td><td></td></tr><tr><td>Sutura de nailon</td><td>Braintree scintific</td><td>SUT-S 104</td><td></td></tr><tr><td>Sutura de cierre</td><td>VWR</td><td>95057-036</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td>Piramal</td><td></td><td></td></tr><tr><td>2,3,5- Cloruro de trifeniltetrazolio</td><td>FisherSci</td><td>50-121-8005</td><td></td></tr><tr><td>Bloque cerebral</td><td>Braintree scintific</td><td>BS-A 5000C</td><td></td></tr><tr><td>Cuchilla de criostato</td><td>VWR</td><td>89202-606</td><td></td></tr><tr><td>Opcional:</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Periflujo Sistema láser doppler</td><td>Perimed Periflux</td><td>5000</td><td></td></tr><tr><td>Unidad de monitorización</td><td>Perimed</td><td>PF 5010 - LDPM</td><td></td></tr></tbody></table>

la inducción de ictus isquémico y la isquemia-reperfusión en ratones con la técnica de oclusión de la arteria medio y visualización de un infarto Área

Induction of Ischemic Stroke and Ischemia-reperfusion in Mice Using the Middle Artery Occlusion Technique and Visualization of Infarct Area

La enfermedad cerebrovascular es altamente prevalente en la población mundial y abarca varios tipos de afecciones, incluido el accidente cerebrovascular. Para estudiar el impacto del accidente cerebrovascular en la lesión tisular y evaluar la efectividad de las intervenciones terapéuticas, se desarrollaron varios modelos experimentales en una variedad de especies. Incluyen la isquemia cerebral global completa, la isquemia global incompleta, la isquemia cerebral focal y la isquemia cerebral multifocal. El modelo descrito en este protocolo se basa en la oclusión de la arteria cerebral media (OCM) y se relaciona con la categoría de isquemia focal. Esta técnica produce isquemia focal consistente en una región estrictamente definida del hemisferio y es menos invasiva que otros métodos. El procedimiento descrito se realiza en ratones, dada la disponibilidad de varias variantes genéticas y el alto número de pruebas estandarizadas para ratones para ayudar en la evaluación conductual y de neurodéficit.

La ruta de inserción para la sutura oclusión se demuestra en la Figura 1. La sutura MCAO se va a encaminar a la zona de la oclusión, bifurcándose en el ICA. oclusión de la MCA éxito dará lugar a la lesión tisular, visible por tinción con TTC. La Figura 2 presenta imágenes de tinción de tratados sham animales (Figura 2A) y de un 60 min MCAO animales isquemia reperfusión (tinción en 90 min o 24 horas después de la oclusión, la Figu...

Describimos un modelo de ratón de accidente cerebrovascular inducido por la oclusión de la arteria cerebral media utilizando una sutura recubierta de silicona. El protocolo se puede aplicar para inducir una oclusión permanente o una isquemia temporal, seguida de reperfusión.

La inducción de ictus isquémico y la isquemia-reperfusión en ratones con la técnica de oclusión de la arteria Medio y Visualización de un infarto Área

Cerebrovascular disease is highly prevalent in the global population and encompasses several types of conditions, including stroke. To study the impact of ...

El objetivo general de este procedimiento quirúrgico es inducir de forma oficial y fiable un accidente cerebrovascular isquémico dejando intacta la arteria cerebral externa. Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo de la investigación del accidente cerebrovascular, como el impacto del tratamiento en la gravedad del accidente cerebrovascular. La principal ventaja de esta técnica es que, tras la inducción del ictus, la arteria cerebral externa permanece disponible para infundir el tratamiento directamente en el hemisferio afectado.Coloque un ratón anestesiado con isoflurano sobre la superficie quirúrgica preparada y coloque un cono nasal para administrar isoflurano mezclado con oxígeno. Asegúrese de que la frecuencia respiratoria esté alrededor de una o dos respiraciones por segundo sin jadear. Además, asegúrese de que el animal no muestre una reacción a la estimulación de los bigotes o al reflejo del pedal.Aplique una gota de lubricante oftálmico en cada ojo, utilizando un hisopo estéril para evitar que se sequen durante el procedimiento. Después de afeitar el área de la incisión, desinfecte completamente el área de la cirugía con etanol al 70% y una solución a base de clorhexidina. Mantenga al animal sobre una superficie quirúrgica tibia bajo un microscopio estereoscópico.A continuación, con tijeras quirúrgicas y fórceps, realice una incisión poco profunda en la línea media del cuello desde por encima del esternón hasta por debajo de la mandíbula. Con fórceps, separe cuidadosamente los tejidos grasos y conectivos para exponer la tráquea. Los tejidos deben separarse fácil y naturalmente a ambos lados.Luego, coloque una almohada u otro objeto redondo de aproximadamente 0.5 centímetros de diámetro debajo de la parte posterior del cuello para extender el cuello y exponer aún más el área para la cirugía. Abra la incisión con un retractor de tejido o ganchos. Luego, en el lado izquierdo de la tráquea, separe con cuidado el tejido conectivo para exponer la arteria carótida común izquierda sin dañar los nervios cercanos y las venas principales.A continuación, inserte las pinzas curvas debajo del CCA para perforar el tejido conectivo y luego deje que se abran lentamente para liberar el CCA. Separe el CCA del tejido subyacente y exponga la ramificación superior de la arteria cerebral interna y la arteria cerebral externa. Una vez que el CCA esté expuesto, inserte tres segmentos de sutura de nailon debajo del CCA.Asegúrese de que el CCA no esté retorcido, ya que esto complicaría drásticamente la inserción de la sutura. Luego, en el punto más bajo posible, cierre la sutura inferior con un nudo permanente. Ate la sutura superior justo debajo de la ramificación del ICA y el ECA con un nudo corredizo removible.A continuación, ate la sutura central con un nudo corredizo extraíble, pero manténgala bien abierta. Luego, usando tijeras de resorte de microdisección, cree un 0,2 milímetro en el CCA entre las suturas inferior y media más cerca de la sutura inferior. Con fórceps, inserte la sutura MCAO en la incisión del CCA, guiándola hacia la sutura superior.A continuación, apriete suavemente el nudo corredizo de la sutura central en el CCA para que restrinja el flujo sanguíneo alrededor de la sutura MCAO, pero esté lo suficientemente suelto como para permitir que la sutura MCAO se mueva libremente. Ahora deshaga con cuidado la sutura superior, asegurándose de que la sutura MCAO no se salga. Inserte la sutura MCAO un par de milímetros en el ICA y luego vuelva a cerrar la sutura superior con un nudo corredizo como antes.A continuación, guíe la sutura MCAO hasta el área de oclusión, primero dirigiéndola hacia el ICA más allá del ECA, luego asegurándose de que la sutura permanezca en el ICA, sin pasar por la arteria pterigopalatina. La inserción es exitosa si hay poco reflujo sanguíneo de la incisión CCA y si la marca de nueve milímetros de plata está situada entre la incisión CCA y la bifurcación de la ICA y la ECA. Después de una oclusión exitosa, ate firmemente la sutura media y superior y luego meta las suturas en el área de la incisión.Después de retirar el retractor o los ganchos de papel y la almohada, limpie el área de sutura con solución salina estéril en un hisopo de algodón. A continuación, cierre la piel con una sutura de nylon. Coloque el ratón en una jaula limpia situada sobre una almohadilla térmica para evitar la hipotermia y permitir el acceso ad libitum al agua y a los alimentos ablandados.Vigile al animal para detectar signos de accidente cerebrovascular durante al menos cinco a 10 minutos. Dependiendo del protocolo de reperfusión por isquemia, deje la sutura MCAO en su lugar de 30 minutos a 120 minutos o más. Después de anestesiar al animal como antes y retirar las suturas de cierre de la herida, use fórceps y separadores de tejido para reabrir la incisión y exponer el CCA.A continuación, retire con cuidado la sutura superior y tire suavemente de la sutura MCAO hasta que la parte recubierta de silicona quede situada en el nudo central. Vuelva a hacer la sutura del nudo superior para evitar que la sangre fluya a través de la sutura MCAO. A continuación, deshaga con cuidado el nudo central y tire de la sutura MCAO más allá del nudo superior, manteniéndolo dentro del CCA.Cierre herméticamente el nudo superior para bloquear el flujo sanguíneo de las arterias. A continuación, extraiga completamente la sutura MCAO y cierre firmemente el nudo central. Cierre la herida y administre los cuidados postoperatorios como antes.Este esquema muestra el área de oclusión que resulta del procedimiento demostrado en este video en azul. El área de la cirugía se encuentra en la parte inferior de la figura, indicada por la forma ovalada, y la colocación de la sutura se indica con líneas negras. Las siguientes imágenes muestran la posición TTC de las secciones del cerebro.Esta imagen representa la tinción típica después de una inserción simulada. La imagen es representativa del daño tisular causado por un MCAO de 60 minutos, seguido de 90 minutos de reperfusión. Se observa un mayor daño tisular después de 24 horas de reperfusión, después de un MCAO de 60 minutos.La tinción inmunofluorescente para el marcador neuronal MAP2 permite visualizar claramente en la imagen de la derecha la pérdida neuronal a partir de 60 minutos de oclusión, seguida de 23 horas de reperfusión. La astrogliosis es visible después de la tinción inmunofluorescente con GFAP. En la imagen de la derecha, la astroglía se concentra en el área adyacente al daño tisular en el cerebro con reperfusión por isquemia, mientras que en el control operado por vergüenza se observa un patrón difuso de tinción.Al intentar este procedimiento, es importante controlar el bienestar de los animales y el tiempo de oclusión. Después de este procedimiento, se pueden realizar otras técnicas, como el análisis de comportamiento extraño y la inmunofluorescencia, para responder preguntas adicionales sobre la lesión tisular y la recuperación.

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Investigación

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Medicine

Medicina

Inducción quirúrgica del daño cerebral isquémico en la rata es un modelo ampliamente utilizado para la investigación del accidente cerebrovascular. Aquí se demuestra la inducción de isquemia cerebral focal por oclusión de la arteria cerebral media. Visualización del infarto como resultado de la tinción histológica y la resonancia magnética también se indica.

Modelo de isquemia cerebral focal por oclusión endovascular de sutura de la arteria cerebral media en la rata

Oclusión filamentosa de la arteria cerebral media es un modelo común para el estudio de ACV isquémico en los ratones.

Modelado de accidente cerebrovascular en ratones - Oclusión arteria cerebral media con el modelo de filamento

Se demuestra en el video de un método para producir una oclusión de arteria cerebral media en ratones adultos con un monofilamento intraluminal. También mostrará cómo evaluar la extensión del infarto cerebral por el cloruro de 2,3,5-trifenil tetrazolio (TTC) tinción.

Modelo de ratón de la oclusión arteria cerebral media

El intraluminal de arteria cerebral media oclusión (MCAO) es el modelo más empleado entre los modelos experimentales de ictus isquémico. Aquí vamos a demostrar todo el modelo en detalle con la guía de la flujometría láser Doppler, y sus resultados representativos.

Intraluminal la arteria cerebral media de oclusión (MCAO) Modelo para el ictus isquémico con Orientación flujometría láser Doppler en ratones

El medio de oclusión intraluminal modelo cerebral en ratones se presentan en la presente memoria. La extensión del infarto cerebral se evaluó mediante una puntuación neurológica y tinción con violeta de cresilo, una alternativa a la tinción con TTC, que ofrece la gran ventaja de prueba en paralelo marcadores de interés muchos.

Modelo de ratón de MCAO intraluminal: Evaluación del infarto cerebral mediante tinción con violeta de cresilo

Con el fin de entender la fisiopatología del accidente cerebrovascular, es importante utilizar modelos fiables. En este trabajo se va a describir uno de los modelos de accidente cerebrovascular de uso más frecuente en los ratones, llamado el medio modelo de oclusión de la arteria cerebral (MCAO) (también llamado el filamento de sutura intraluminal o modelo) con reperfusión.

Técnica quirúrgica para la oclusión de la arteria cerebral media y la reperfusión del movimiento inducidos en ratones

Obstrucción de filamento intraluminal de la arteria cerebral media es el modelo más frecuentemente utilizado en vivo del movimiento experimental en roedores. Una alternativa quirúrgica para permitir la reparación de la arteria carótida común se realiza aquí, lo que permite la reperfusión de la arteria carótida común y una reperfusión completa para el territorio de la arteria cerebral media.

Oclusión de la arteria Cerebral Media permitiendo la reperfusión mediante la reparación de la arteria carótida común en ratones

Un modelo murino de isquemia-reperfusión cerebral es establecido para investigar la patofisiología del accidente cerebrovascular. Distal, ligar la arteria cerebral media derecha y la arteria carótida común derecha y restablecer el flujo sanguíneo después de 10 o 40 min de isquemia.

Oclusión de los vasos dos ratón modelo de isquemia-reperfusión Cerebral

En este trabajo describimos un método sencillo y reproducible que puede inducir infarto de miocardio o lesión por isquemia-reperfusión miocárdica en ratones mediante ligadura de precisión de la arteria coronaria descendente anterior izquierda mediante micromanipulación.

Inducción de infarto de miocardio y lesión por isquemia-reperfusión miocárdica en ratones

Este protocolo describe el modelo de isquemia cerebral focal transitoria en ratones a través de la oclusión intraluminal de la arteria cerebral media. Además, se muestran ejemplos de evaluación de resultados mediante resonancia magnética y pruebas de comportamiento.

Modelo de oclusión transitoria de la arteria cerebral media de accidente cerebrovascular

En este trabajo, presentamos un protocolo para establecer un modelo de oclusión distal de la arteria cerebral media (dMCAO) mediante electrocoagulación transcraneal en ratones C57BL/6J y evaluamos el comportamiento neurológico y las características histopatológicas posteriores.

Inducción de ictus isquémico agudo en ratones mediante la técnica de oclusión de la arteria media distal

Aprende a inducir ictus isquémico en ratones mediante oclusión de la arteria cerebral media, manteniendo la arteria cerebral externa intacta para infusiones terapéuticas directas. Este modelo fiable permite estudiar mecanismos y tratamientos del accidente cerebrovascular.

La inducción de ictus isquémico y la isquemia-reperfusión en ratones con la técnica de oclusión de la arteria Medio y Visualización de un infarto Área (Video) | JoVE Journal

La inducción de ictus isquémico y la isquemia-reperfusión en ratones con la técnica de oclusión de la arteria Medio y Visualización de un infarto Área

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