Electroforesis Capilar La separación del anticuerpo monoclonal isoformas El uso de un capilar Neutral

En la actualidad, la técnica de electroforesis capilar de células constituye uno de los métodos más resolutivos y sensibles para el análisis de biomoléculas como los anticuerpos monoclonales. Sin embargo, la implementación exitosa de esta técnica depende del conocimiento y de las habilidades del analista en las etapas críticas durante la preparación de las muestras y del sistema. Este tutorial tiene como objetivo explicar cómo realizar un análisis exitoso, con una descripción verdaderamente detallada de la preparación de soluciones y muestras, la preparación del sistema de electroforesis capilar, la configuración del método en los instrumentos, y la toma de decisiones y el procesamiento de datos.

En general, este protocolo puede utilizarse para el desarrollo y mejora de las habilidades del personal implicado en la preparación de laboratorios de química analítica. Pese la cantidad de HPMC para obtener una concentración final de 0,05 por ciento en 100 mililitros. Dado que el HPMC es un polímero elástico básico, como primer paso vierta el polvo en un vaso de precipitados de vidrio y agregue lentamente 80 mililitros de agua para desagregar el polvo.

Luego, enjuague la bandeja de humectación con agua para eliminar los restos de polvo. Añada los reactivos restantes de forma habitual y agite la solución. Ajuste el valor de pH a 4,8 con ácido acético al 50 por ciento.

Y deje que la solución se estabilice durante cinco minutos. Después de esto, ajuste el pH según sea necesario. Agregue agua para completar el volumen final de 100 mililitros.

Filtre la solución de BG preparada a través de una membrana neutrofílica y viértala en un frasco de vidrio. Finalmente, etiquete adecuadamente el frasco de vidrio y almacénelo bajo refrigeración. Para preparar la muestra, como primer paso agregue 162 microlitros de solución tampón traza en un tubo de 1,5 mililitros.

Luego, agregue 18 microlitros de una muestra de map previamente preparada a una concentración de 10 miligramos por mililitro. Como tercer paso, agregue 20 microlitros de una solución de histamina al uno por ciento previamente preparada para obtener un volumen final de muestra de 200 microlitros. Siguiente paso, prepare una muestra durante cinco segundos.

Y centrifugue durante cinco segundos. Aspire el volumen total de la muestra. Y distribuya hacia arriba en un microfrasco para evitar la introducción de burbujas.

Finalmente, tape el vial y guárdelo bajo refrigeración. Apague el instrumento de electroforesis capilar presionando el interruptor de encendido y abra la puerta frontal.

Coloque una toallita desechable nueva debajo del bloque de interfaz. Enjuague los electrodos a través del bloque de interfaz con agua utilizando un frasco lavador. Deje que el agua gotee a través de los orificios y seque completamente el bloque de interfaz.

Retire cuidadosamente el exceso de agua de los electrodos utilizando la toallita. Tenga cuidado de no tocar los electrodos durante este procedimiento. Retire la toallita del sistema de sujeción de la muestra.

Limpie la superficie de las bandejas de muestra con una toallita nueva ligeramente humedecida con agua. Y la superficie de las bandejas de tampón. Deslice las bandejas de tampón hacia arriba, eleve el sistema de sujeción de muestras y limpie su superficie utilizando la toallita.

Coloque nuevamente las bandejas de tampón en su posición. Después de esto, limpie minuciosamente el bloque de interfaz. Limpie la barra de sujeción y la carcasa de la lámpara UV.

Al final, asegúrese de probar el sistema antes de usarlo. Enjuague las palancas de apertura con agua utilizando un frasco lavador. Limpie su superficie cuidadosamente con una toallita nueva y no abrasiva para eliminar el polvo y las sales acumuladas.

Finalmente, asegúrese de probarlos antes de instalarlos. Limpie los dos extremos del cable de fibra óptica con un paño de microfibra ligeramente humedecido con agua y verifique la transmisión de luz entre los extremos. Retire una nueva capilar neutra de su envase.

Tome ahora un extremo del tubo protector del capilar hasta la mesa de trabajo. Desenrolle y enderece el tubo de plástico, y saque cuidadosamente el capilar del tubo. Pegue un trozo de papel en la mesa de trabajo con las siguientes marcas de medición.

Alinee la ventana del capilar con el punto cero de las marcas de medición en centímetros de la siguiente manera: A continuación, fije los extremos del capilar al banco de trabajo con cinta. Marque los extremos del capilar dos milímetros por fuera de las marcas de medición. Corte el casquillo protector en el extremo del capilar más alejado de la ventana.

Y sumerja el extremo del capilar en un vial de electroforesis capilar lleno de agua para evitar daños permanentes al recubrimiento interno del capilar. Retire el capilar del vial e inserte este extremo cuidadosamente en el lado de salida del cartucho. Una vez que el capilar aparezca en el otro lado, tire lo necesario hasta que la ventana del capilar quede centrada con respecto a la ventana del cartucho como se indica a continuación.

Después de esto, gire el cartucho e inserte el tapón de apertura en la ventana del cartucho, presionando hasta que encaje en su posición. Tenga cuidado de no romper la ventana capilar durante este procedimiento. Confirme que la luz atraviese la ventana cuando se exponga a una fuente luminosa amplia.

Introduzca el capilar en el tubo de refrigerante preformado con el tubo previamente instalado no feral y la junta tórica. Empuje el capilar a través del tubo hasta que el capilar aparezca en el otro extremo. Luego, inserte el extremo del tubo en el lado de salida del cartucho y apriete las tuercas del tubo.

Introduzca el extremo de entrada del capilar en el lado de entrada del cartucho. Una vez que el capilar haya aparecido en el otro lado, tire según sea necesario. A continuación, introduzca el extremo del tubo en el lado de entrada del cartucho y apriete las tuercas del tubo.

Corte la tapa protectora en el extremo capilar más alejado de la ventana. Instale los sujetadores de celda sobre los extremos capilares, presionando para encajarlos en su posición como sigue. Corte los extremos capilares por debajo de las líneas de referencia en las placas capilares alargadas.

Asegúrese de inspeccionar los extremos del capilar con una lupa. Si los extremos del capilar no son lisos, alíselos utilizando la piedra de afilar. Coloque la junta tórica de la abertura en el orificio azul de la abertura.

E insértelo cuidadosamente utilizando la herramienta de inserción de anillos tóricos. Por último, instale los viales de CE llenos de agua en la carcasa del cartucho y coloque el cartucho en la carcasa inmediatamente, con los extremos de las capilares insertados en los viales, y guárdelo bajo refrigeración. Ajuste el volumen de la pipeta.

Agregue el volumen correcto de agua en la entrada de tampón en las coordenadas de la bandeja A1, B1 y F6. Y a la salida de tampón en las coordenadas de la bandeja A1, B1, C1, E6 y F6. Agregue HCl 0,1 normal en la entrada de tampón en las coordenadas de la bandeja C1 y E6. Y agregue BGE en la entrada de tampón en las coordenadas de la bandeja D1 y E6. Y a la salida de tampón en la coordenada de la bandeja D1. Finalmente, coloque las tapas en todos los viales de CE en las bandejas de entrada y salida de tampón. Durante el procedimiento, evite mojar las tapas de los viales para prevenir fugas de carbono. Abra la puerta frontal del instrumento de CE.

Primero, instale el detector UV y fíjelo girando el tornillo en sentido horario. Levante la puerta interna e instale las palancas de apertura presionándolas hacia arriba en el bloque de interfaz. Inserte el cable de fibra óptica en el sujetador y gire en sentido horario.

Y conecte el otro extremo al detector. Manipule el cable de fibra óptica con cuidado, ya que doblarlo podría causar su fractura. Coloque la bandeja de la muestra en el sistema de sujeción de muestras y encaje en su posición.

Después de seguir el mismo procedimiento, coloque las bandejas de tampón en el sistema de sujeción de muestras. Eleve la barra de sujeción y coloque el cartucho capilar en el bloque de interfaz. Presione la barra de sujeción en ambos extremos y apriete las perillas girando en sentido horario.

Cierre la puerta interior y luego la puerta frontal. Finalmente, encienda el instrumento CE presionando el interruptor de encendido. Cree el método de acondicionamiento del instrumento.

Configure los parámetros en la sección de condiciones iniciales, incluyendo el voltaje, el cartucho, la temperatura de almacenamiento de la muestra y los ajustes de disparo. Seleccione dos mil catorce como la longitud de onda de adquisición. Declare las acciones que debe realizar el instrumento configurando los parámetros en celdas programadas por tiempo.

Incluya los ajustes específicos para cada paso de lavado, inyección y separación. Realice este procedimiento para crear los métodos de acondicionamiento, funcionamiento y apagado del instrumento. El siguiente paso consiste en crear una nueva secuencia.

Programe el capilar para el acondicionamiento utilizando el método de acondicionamiento. Si el capilar se utiliza por primera vez, programe cuatro repeticiones. De lo contrario, programe dos repeticiones.

Luego programe las muestras para ser analizadas utilizando el método de ejecución. Finalmente, programe el capilar para almacenamiento utilizando el método de apagado. El análisis por electroforesis capilar se completa en menos de 30 minutos.

El primer resultado corresponde al estándar interno de histamina como medida del rendimiento del sistema adeque. A continuación, se observan las formas básicas, principales y ácidas distintivas del anticuerpo monoclonal ebaluadith. Toda la separación se realiza bajo una corriente constante de aproximadamente 30 microamperios.

Después de realizar el experimento, exporte los datos brutos del software grab e impórtelos mediante el software empower para su procesamiento. El porcentaje de contenido de cada forma de hielo se obtiene tras la integración vertical con líneas de caída del perfil del electroferograma. A continuación, se presenta una guía detallada paso a paso para realizar el análisis de actividades monoclonales generadas mediante electroforesis capilar de células.

Junto con varias recomendaciones para mitigar posibles problemas, el protocolo adicional presentado ofrece la ventaja de poder personalizarse fácilmente para el análisis de otras proteínas considerando breves modificaciones en los parámetros de conductividad y pH.