Electroforesis Capilar La separación del anticuerpo monoclonal isoformas El uso de un capilar Neutral

Hoy en día, la técnica de electroforesis de células capilares constituye uno de los estados más resolutivos y sensibles para el análisis de biomoléculas como los anticuerpos monocolonales. Sin embargo, la implementación exitosa de esta técnica depende del conocimiento y las habilidades del analista en los pasos críticos durante la preparación de la muestra y el sistema. Este tutorial está dirigido a cómo realizar un análisis exitoso, una explicación verdaderamente detallada de la preparación de la solución y las muestras, la preparación del sistema de electroforesis capilar, la configuración del método de los instrumentos y la decisión y el procesamiento de datos.

En general, este protocolo se puede utilizar para el desarrollo y la mejora de las habilidades del personal involucrado en la preparación de los laboratorios de química analítica. Pesar la cantidad de HPMC para obtener una concentración final del 0,05 por ciento en 100 mililitros. Como HPMC es un polímero elástico básico, como primer paso, vierta el bounder en un vaso de precipitados de vidrio y agregue 80 mililitros de agua lentamente para desegregar el polvo.

A continuación, enjuague la bandeja humectante con agua para eliminar los restos de polvo. Agregue los regentes restantes como de costumbre y revuelva la solución. Ajuste el valor de pH a 4.8 con 50 por ciento de ácido ácido.

Y deje que la solución se estabilice durante cinco minutos. Después de esto, ajuste el PH según sea necesario. Agrega agua para formar el volumen final de 100 mililitros.

Filtre la solución de BG preparada a través de una membrana neutrofílica y viértala en una botella de vidrio. Finalmente, etiquete la botella de vidrio adecuadamente y guárdela en refrigeración. Para preparar la muestra, como primer paso, agregue 162 microlitros de solución tampón traza en un tubo de 1,5 mililitros.

A continuación, añada 18 microlitros de una muestra de mapa previamente preparada a una concentración de 10 miligramos por mililitro. Como tercer paso, agregue 20 microlitros de una solución de histamina al 1 por ciento previamente preparada para obtener un volumen de muestra final de 200 microlitros. El siguiente paso, prepare una muestra durante cinco segundos.

Y centrifugar durante cinco segundos. Aspirar el volumen total de la muestra. Y dispense hacia arriba en un microvial para evitar que se introduzcan burbujas.

Finalmente, tape el vial y manténgalo en refrigeración. Apague el instrumento CE presionando el interruptor de encendido. Y abre la puerta principal.

Coloque una nueva toallita móvil debajo del bloque de interfaz. Enjuague los electrodos a través del bloque de interfaz con agua usando una botella de lavado. Deje que el agua gotee a través de los orificios y seque bien el bloque de interfaz.

Retire el exceso de agua de los electrodos con cuidado con la toallita. Tenga cuidado de no estar en los electrodos durante este procedimiento. Retire la toallita del sistema de retención de muestras.

Limpie la superficie de las bandejas de muestras con una toallita nueva humedecida con agua que no se mueva. Y la superficie de las bandejas tampón. Deslice las bandejas tampón hacia arriba, levante el sistema de retención de muestras y limpie su superficie con la toallita.

Vuelva a colocar las bandejas tampón en su posición. Después de esto, limpie a fondo el bloque de interfaz. Limpie la barra de sujeción y la carcasa de la lámpara UV.

Al final, asegúrese de probar el sistema antes de usarlo. Enjuague las palancas de apertura con agua con una botella de lavado. Limpie su superficie a fondo con una toallita nueva e inmóvil para eliminar el polvo y las sales acumuladas.

Finalmente, asegúrese de probarlos antes de instalarlos. Limpie los dos extremos del cable de fibra óptica con un paño de microfibra humedecido con agua y confirme la cápsula de luz entre los extremos. Retire un nuevo capilar neutro de su paquete.

Lleve ahora un extremo del tubo protector del capilar al banco de trabajo. Desenrolle y enderece el tubo de plástico, y saque el capilar del tubo con cuidado. Pegue una hoja de papel al banco de trabajo con las siguientes marcas de medición.

Alinee la ventana capilar con las marcas de medición del punto cero a centímetros de la siguiente manera:Después de esto, fije los extremos capilares al banco de trabajo con cinta adhesiva. Marque los extremos capilares dos milímetros fuera de las marcas de medición. Corte la tapa protectora en el extremo capilar más alejado de la ventana.

Y sumerja el extremo capilar en un vial CE lleno de agua para evitar daños permanentes en el recubrimiento interno del capilar. Retire el capilar del vial e inserte este extremo en el lado de salida del cartucho con cuidado. Una vez que el capilar haya aparecido en el otro lado, tire lo que sea necesario hasta que la ventana capilar esté centrada en la ventana del cartucho de la siguiente manera.

Después de esto, gire el cartucho e inserte el tapón de apertura en la ventana del cartucho, presionando para encajar en su posición. Tenga cuidado de no romper la ventana capilar durante este procedimiento. Confirme que la luz pasa a través de la ventana cuando se expone a la amplia fuente de luz.

Introduzca el capilar en el tubo de refrigerante preformado con tubo preinstalado no feral y junta tórica. Empuje el capilar a través del tubo hasta que el capilar aparezca en el otro lado. Luego, inserte el extremo del tubo en el lado de salida del cartucho y apriete las tuercas del tubo.

Inserte el extremo de entrada capilar en el lado de entrada del cartucho. Una vez que el capilar haya aparecido en el otro lado, tire según sea necesario. Después de esto, inserte el extremo del tubo en el lado de entrada del cartucho y apriete las tuercas del tubo.

Corte la tapa protectora en el extremo capilar más cercano a la ventana. E instale los clips de retención de celdas sobre los extremos capilares, presionando para encajar en su posición de la siguiente manera. Corte los extremos capilares por debajo de las líneas de referencia en las placas alargadas por capilar.

Asegúrese de inspeccionar los extremos capilares con una lupa. Si los extremos capilares no son lisos, pulirlos con la piedra clave. Coloque la junta tórica de apertura en el orificio azul de apertura.

E insértelo con cuidado con la herramienta de inserción de juntas tóricas. Finalmente, instale los viales CE llenos de agua en la caja del cartucho y coloque el cartucho en la caja inmediatamente con los extremos capilares insertados en los viales y guárdelos en refrigeración. Ajuste el volumen de la pipeta.

Agregue el volumen correcto de agua en la entrada del tampón con las coordenadas A1, B1 y F6 de la bandeja. Y a la bandeja de salida del búfer las coordenadas A1, B1, C1, E6 y F6. Agregue HCl 0.1 normal a las coordenadas C1 y E6 de la bandeja de entrada del búfer. Y agregue BGE a las coordenadas D1 y E6 de la bandeja de entrada del búfer. Y a la bandeja de salida del búfer coordenada D1. Por último, tape todos los viales CE en las bandejas de entrada y salida del tampón. Durante el procedimiento, evite mojar las tapas de los viales para evitar fugas de carbón. Abra la puerta frontal del instrumento CE.

Primero, instale el detector UV y asegúrelo girando el tornillo en el sentido de las agujas del reloj. Levante la puerta interior e instale las palancas de apertura presionándolas hacia arriba en el bloque de interfaz. Inserte el cable de fibra óptica en la abrazadera y gírelo en el sentido de las agujas del reloj.

Y conecte el otro extremo al detector. Manipule el cable de fibra óptica con cuidado, ya que doblarlo podría causar su fractura. Coloque la bandeja de muestras en el sistema de retención de muestras y colóquela en su posición.

Siguiendo el mismo procedimiento, coloque las bandejas tampón en el sistema de retención de muestras. Levante la barra de sujeción y coloque el cartucho capilar en el bloque de interfaz. Presione la barra de sujeción en ambos extremos y apriete las perillas girándolas en el sentido de las agujas del reloj.

Cierre la puerta interior y cierre la puerta principal. Finalmente, encienda el instrumento CE presionando el interruptor de encendido. Cree el método del instrumento de condicionamiento.

Configure los parámetros en el personal de condición inicial, incluidos los ajustes de voltaje, cartucho y temperatura de almacenamiento de muestras y disparador. Seleccione dos mil catorce como longitud de onda de adquisición. Declare las acciones a realizar por el instrumento configurando los parámetros en celdas programadas en el tiempo.

Incluyendo los ajustes específicos para cada paso de enjuague, inyección y separación. Lleve a cabo este procedimiento para crear los métodos de acondicionamiento, ejecución y apagado del instrumento. El siguiente paso es crear una nueva secuencia.

Programe el capilar para el acondicionamiento utilizando el método de acondicionamiento. Si es la primera vez que se usa el capilar, programe cuatro repeticiones. De lo contrario, programe dos repeticiones.

A continuación, programe las muestras que se van a analizar utilizando el método de ejecución. Finalmente, programe el capilar para el almacenamiento utilizando el método de apagado. El análisis de electroforesis de celda capilar se completa en 30 minutos.

El primer resultado correspondió al estándar internalista de histamina como medida del rendimiento del sistema adeque. A esto le siguen las formas distintivas de hielo básico, principal y ácido del anthiberi monoclonal ebaluadith. La separación completa funciona bajo una corriente constante de alrededor de 30 micoamperios.

Después de ejecutar el experimento, exporte los datos sin procesar del software de agarre e impórtelos a través del software de potencia para su procesamiento. El contenido porcentual de cada forma de hielo se obtiene después de la integración vertical de la línea de caída del perfil de electrofarograma. Aquí hemos representado una guía detallada paso a paso para realizar el análisis de las actividades monoclonales que se generaron por electroforesis de células capilares.

Junto con varias recomendaciones para mitigar posibles problemas, el protocolo presente ofrece la ventaja de ser fácilmente personalizable para el análisis de otras proteínas considerando breves modificaciones en los parámetros de conductividad y pH.