Name: Diferenciación de células madre embrionarias de ratón en precursores corticales interneurona (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-12-03T14:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 24 s
Description: Aprende a generar progenitores de interneuronas corticales a partir de células madre embrionarias de ratón mediante el método modificado de cuerpos embrionarios a monocapa. Esta técnica permite estudiar la determinación del destino celular y aplicaciones terapéuticas en neurociencia.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Agradecemos a Xu Qing para el desarrollo de la Nkx2.1::mCherry:Lhx6:GFP reportero doble mESC línea como Jennifer Tyson, Asif Maroof y Tim Petros por su temprano trabajo en ayudar a desarrollar este protocolo. También agradecemos a la base de citometría de flujo CHOP para asistencia técnica. Este trabajo fue apoyado por un NIH R01 MH066912 (SA) y F30 MH105045-02 (DT).

Nota: La línea de mESC reportero dual descrita en el presente Protocolo está disponible a petición (sande@mail.med.upenn.edu).
1. preparación de medios de comunicación
Nota: Calentar todos los medios a 37 ° C antes de su uso en cultivo celular.
<ol><li>
Medios de fibroblastos embrionarios del ratón (MEF) (para la preparación de 500 mL)
	<ol>
<li>Añadir el suero bovino fetal (FBS) de 50 mL a mL 449 de Dulbecco modificado Eagle Medium (DMEM), y filtro a través de una unidad de filtro de poro 500 mL 0,22 μm.</li>
		<li>Añadir a agente antimicrobiano 1 mL (50 mg/mL) después de la filtración. Almacenar los medios de comunicación a 4 ° C hasta 1 mes o alícuota y tienda a ≤-20 ° C.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Medios de N2 (para la preparación de 500 mL)
	<ol>
<li>Añadir 5 mL de L-alanina-L-glutamina (100 x) y 500 μl 2-Mercaptoetanol (55 mM) a 489,5 mL DMEM: mezcla de nutrientes F-12 (DMEM/F-12) y el filtro a través de una unidad de filtro de poro 500 mL 0,22 μm.</li>
		<li>Añadir agente antimicrobiano 1 mL (50 mg/mL) y 5 mL N2 suplemento-B después de la filtración. Almacenar los medios de comunicación a 4 ° C en la oscuridad durante 1 mes.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Medio de cultivo libre de suero (KSR) (para la preparación de 500 mL)
	<ol>
<li>Añadir 75 mL suplemento medio libre de suero, L-glutamina de 5 mL (100 x), 5 mL MEM aminoácidos no esenciales (AANE-MEM) (100 x), y 500 μl 2-Mercaptoetanol (55 mM) a no-413,5 mL de glutamina que contienen DMEM y filtrar a través de una unidad de filtro de poro 500 mL 0,22 μm.</li>
		<li>Añadir a agente antimicrobiano 1 mL (50 mg/mL) después de la filtración. Almacenar los medios de comunicación a 4 ° C durante 1 mes.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Media de células madre embrionarias de ratón (para la preparación de 500 mL)
	<ol>
<li>Añadir 75 mL células madre grado FBS, 5 mL AANE MEM (100 x), 5 mL de L-glutamina (100 x), y 500 μl 2-Mercaptoetanol (55 mM) a no-413,5 mL de glutamina que contienen DMEM y filtrar a través de una unidad de filtro de poro 500 mL 0,22 μm.</li>
		<li>Añadir a agente antimicrobiano 1 mL (50 mg/mL) después de la filtración. Almacenar los medios de comunicación a 4 ° C en la oscuridad hasta 1 mes o alícuota y tienda a ≤-20 ° C.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. cultivo de troncales
<ol><li>Placa de mitotically inactivas células de alimentador MEF en medios MEF sobre placas de cultivo de tejidos tratado en 3-4 x 104 células/cm2. Permiten por lo menos 12 h que instalarse en una incubadora de cultivo celular a 37 ° C con ≥ 95% humedad relativa y 5% CO2 antes de las troncales de la galjanoplastia. Si no se utiliza inmediatamente, vuelva a colocar la media de la MEF cada 3 días. Disponer de MEFs si no se utiliza dentro de los 7 días de la galjanoplastia.</li>
	<li>Añadir troncales (densidad entre 1-4 x 104 células/cm2) a las placas MEF en mESC medios que contienen Factor inhibidor de leucemia de ratón (mLIF) (1.000 U/mL). Incube las células a 37 ° C con ≥ 95% humedad relativa y 5% CO2.</li>
	<li>Troncales con tripsina-EDTA (0.05% tripsina) de paso (1:5-1:10) una vez que el plato se convierte en ~ 70-80% confluente o si las colonias empiezan a tocar. Esto normalmente ocurre cada 2 días, pero puede tomar hasta 4 o 5 días dependiendo de la densidad de placas iniciales.</li>
	<li>Mantener las troncales en una capa de alimentador MEF en medio de la mESC mantener la pluripotencialidad.</li>
	<li>
Antes de comenzar la diferenciación, paso de las células al menos una vez en las placas de gelatina recubierto sin MEFs para diluir a las MEFs.
	<ol>
<li>Preparar las placas de gelatina cubierto mediante la adición de 0.1% gelatina en tampón fosfato salino (PBS) con Ca2 +/Mg2 + a un plato de cultivo de tejidos tratado y dejar a 37 ° C durante por lo menos 1 h. placa de 1.5-2 x 106 células/10 cm la placa (2.7-3.6 x 104 células/cm2) y permitir que las células para expandirse durante 2 días antes de comenzar la diferenciación.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. diferenciando troncales a progenitores telencéfalo MGE-como
<ol><li>
Día de diferenciación (DD) 0 = "células a flotar"
	<ol>
<li>Después de las troncales han crecido placas de gelatina recubierto por 2 días, aspirar los medios de comunicación y lavar las células una vez con PBS sin Ca2 +/Mg2 +. Añadir suficiente tripsina-EDTA (0.05% tripsina) para cubrir la superficie de la placa (normalmente 4 mL tripsina-EDTA para un plato de cultivo de tejidos de 10 cm) y coloque las celdas en la incubadora a 37 ° C con ≥ 95% humedad relativa y 5% CO2 4 min.</li>
		<li>Después de 4 minutos, apagar el tripsina-EDTA con 2 veces el volumen de medios mESC. Transferir las células a un tubo de tamaño adecuado de la centrífuga y centrifugar las células a 200 x g durante 5 minutos. Después de 5 minutos, retire el tubo y aspirar los medios de comunicación sin perturbar el pellet. Resuspender el precipitado en 1 mL KSR:N2 media (1:1) que contiene el inhibidor BMP 193189 LDN (250 nM) y los inhibidores de Wnt XAV-939 (10 μm).</li>
		<li>Medir la concentración de células usando un hemocitómetro o un contador de células automatizado. Inicio crecimiento las células como organismos embryoid (EBs) agregando 75.000 células/mL en medios de comunicación KSR:N2 (1:1) que contiene LDN-193189 (250 nM) y XAV-939 (10 μm) en platos de cultivo de tejidos no adherente. Incube las células a 37 ° C con ≥ 95% humedad relativa y 5% CO2.</li>
	</ol>
</li>
	<li>En DD1, preparar para celular "aterrizaje" por capa platos de cultivo de tejidos tratado con poli-l-lisina (10 μg/mL en PBS con Ca2 +/Mg2 +) durante la noche (O/N) a 37 ° C con una humedad relativa ≥ 95% o menos de 1 h.</li>
	<li>En DD2, aspirar la poli-l-lisina y cubrir las placas con laminina (10 μg/mL en PBS con Ca2 +/Mg2 +) O/N a 37 ° C con una humedad relativa ≥ 95%. Nota: O/N es óptima, tan poco como 2 horas puede ser suficiente. Si no se utilizan las placas al día siguiente, Aspire laminina, reemplazar con PBS sin Ca2 +/Mg2 +y almacenar a 4 ° C hasta por 2 semanas.</li>
	<li>
DD3 ("células de la tierra")
	<ol>
<li>Antes de comenzar la disociación de EB, aspirar la laminina y permita que las placas completamente seco en una campana de cultivo de tejidos. No usar placas que aparecen brillantes o visiblemente húmedo. Transferencia de la EBs con medios de comunicación en un tubo de 15 mL y centrifugar durante 3-4 min a 15 x g o hasta que el EBs han peleteado.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Aspire los medios de comunicación y añadir 3 mL de solución de la separación de células que contienen DNasa (2 U/mL) e incube a 37 ° C con una humedad relativa ≥ 95% y 5% CO2 para 15 minutos película suavemente el tubo cada 3 minutos para facilitar la disociación de EB.</li>
	<li>Una vez que el EBs no son accesibles o han transcurrido 15 min, añadir 6 mL KSR:N2 (1:1) que contienen DNasa (1 U/mL) y centrifugar durante 5 min a 200 x g.</li>
	<li>Placa las células de KSR:N2 (1:1) que contiene 193189 LDN (250 nM), XAV-939 (10 μm) y el inhibidor Y-27632 de la roca (10 μm) en 4.5-5 x 104 células/cm2.</li>
</ol>4. enriquecimiento de SST protocolo: "DD12 GFP alta Sonic Hedgehog (SHH)" (continuación de paso 3.7)
<ol><li>En DD5, cambiar los medios de comunicación con KSR:N2 (1:1) que contiene FGF-2 (10 ng/mL), IGF-1 (20 ng/mL) y SSH (50 ng/mL).</li>
	<li>Preparar las placas de cultivo de tejidos para volver a platear el día 8 (paso 4.4) siguiendo las instrucciones que se indica en pasos 3.2-3.3.</li>
	<li>El DD7, cambiar los medios de comunicación con KSR:N2 (1:1) que contiene FGF-2 (10 ng/mL), IGF-1 (20 ng/mL) y SHH (50 ng/mL).</li>
	<li>
En DD8, volver a la placa de las células. Nota: Aunque este paso no es esencial, volver a las células de la galjanoplastia puede reducir tipos celulares diferenciados tempranos, no deseados. Volver a también rompe pelotas de células que dificultan el análisis de immunohistochemical aguas abajo y aumenta la eficacia de FACS en más puntos del tiempo.<ol>
<li>Para volver a las células de la placa, separar las células de la placa con tripsina-EDTA (tripsina 0,05%) durante 5 minutos a 37 ° C con ≥ 95% humedad relativa y 5% CO2. Sacian el tripsina-EDTA con 2 veces el volumen de KSR:N2, y centrifugar a 200 x g durante 5 minutos filtrar las células a través de un tubo de filtro de 40 μm para remover cualquier matas. Volver a la placa las células a 250.000 células/cm2 en N2/KSR (1:1) que contiene FGF-2 (10 ng/mL), IGF-1 (20 ng/mL) y Y-27632 (10 μm) con SHH (50 ng/mL). Nota: Si por el contrario, tomó la decisión es no volver a la placa las células DD8, cambiar los medios de comunicación con KSR:N2 que contienen SHH (50 ng/mL) cada 2 días de DD7 a DD12 y continuar agregar IGF-1 (20 ng/mL) y FGF-2 (10 ng/mL) hasta DD9.</li>
	</ol>
</li>
	<li>En DD10, cambiar los medios de comunicación con KSR:N2 que contienen SHH (50 ng/mL).</li>
	<li>
En DD12, para obtener las células que están enriquecidas para los subtipos de SST, use FACS para aislar Lhx6::GFP-expresando solamente las células.
	<ol>
<li>Para separar las células, utilizar un reactivo de disociación celular que contiene tripsina no en lugar de tripsina-EDTA. Lavar las células una vez con PBS sin Ca2 +/Mg2 +. Añadir precalentada no tripsina con disociación celular reactivo con DNasa (2 U/mL) a las células. Colocarlos en la incubadora a 37 ° C con ≥ 95% humedad relativa y 5% CO2 para 10-30 min o hasta que las células se han separado. Golpee suavemente las placas cada 5 min para ayudar a la disociación. Nota: Para las culturas DD11-12, sólo 10-15 minutos puede ser necesario. Las culturas DD15-16, 30 min o más puede requerir para la completa disociación.</li>
		<li>Una vez que las células han levantado totalmente la placa, proceder al aislamiento de FACS usando protocolos estándar o utilizar las células de otros análisis posteriores.</li>
	</ol>
</li>
</ol>5. enriquecimiento de PV protocolo: "DD11/DD17 mCherry + aPKCi" (continuación de paso 3.7)
<ol><li>En DD5, cambiar los medios de comunicación KSR:N2 (1:1) que contiene FGF-2 (10 ng/mL) y el IGF-1 (20 ng/mL).</li>
	<li>Preparar las placas de cultivo de tejidos para volver a la galjanoplastia en DD8 (paso 4.4) siguiendo las indicaciones dadas en los pasos 3.2-3.3.</li>
	<li>El DD7, cambiar los medios de comunicación KSR:N2 (1:1) que contiene FGF-2 (10 ng/mL) y el IGF-1 (20 ng/mL).</li>
	<li>En DD8, placa vuelve a las células como se describe en el paso 4.4 con las siguientes excepciones: cuando vuelva a las células de la galjanoplastia, reemplace SHH agonista pulida (SAG; 30 nM) y agregar inhibidor PKC atípica (aPKCi; 2 μm). Tomados en conjunto, los medios de comunicación re-galjanoplastia es ahora N2/KSR (1:1) que contiene FGF-2 (10 ng/mL), IGF-1 (20 ng/mL), Y-27632 (10 μm), SAG (30 nM) y aPKCi (2 μm).</li>
	<li>En DD10, cambiar los medios de comunicación con KSR:N2 con aPKCi (2 μm).</li>
	<li>
DD11 Nota: en este punto, las células Nkx2.1::mCherry+ se enriquecen para convertirse en PV CIns.<ol>
<li>Separar las células de la placa para FACS, usando el mismo protocolo descrito en el paso 4.6. Si la decisión se toma para recoger las células Nkx2.1::mCherry+ en un día posterior de diferenciación, omita este paso.</li>
	</ol>
</li>
	<li>En DD12, cambiar los medios de comunicación con KSR:N2 con aPKCi (2 μm). En DD14, cambiar los medios de comunicación con KSR:N2 con aPKCi (2 μm). En DD16, cambiar los medios de comunicación con KSR:N2 con aPKCi (2 μm). En DD17, recoger las células de Nkx2.1::mCherry+ utilizando el mismo protocolo descrito en el paso 4.6.</li>
</ol>6. PV-enriquecimiento de protocolo: "DD17 mCherry baja SHH" (continuación de paso 3.7)
<ol><li>En DD5, cambiar los medios de comunicación KSR:N2 (1:1) que contiene FGF-2 (10 ng/mL) y el IGF-1 (20 ng/mL). El DD7, cambiar los medios de comunicación KSR:N2 (1:1) que contiene FGF-2 (10 ng/mL) y el IGF-1 (20 ng/mL).</li>
	<li>
En DD9, cambiar los medios de comunicación KSR:N2 (1:1). Partir de este momento, no hay factores de crecimiento adicionales son necesarios.
	<ol>
<li>Seguir cambiar el medio cada 2 días hasta la cosecha de las células en DD17.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Jones, E. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+origins+of+cortical+interneurons%3A+mouse+versus+monkey+and+human%5BTitle%5D)+AND+%22Cereb+Cortex%22%5BJournal%5D)">The origins of cortical interneurons: mouse versus monkey and human.</a> Cereb Cortex. 19, 1953-1956 (2009).</li>
<li>Wonders, C. P., Anderson, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+origin+and+specification+of+cortical+interneurons%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+reviews.+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">The origin and specification of cortical interneurons.</a> Nature reviews. Neuroscience. 7 (6), 687-696 (2006).</li>
<li>Ascoli, G. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Petilla+terminology%3A+nomenclature+of+features+of+GABAergic+interneurons+of+the+cerebral+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+reviews.+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Petilla terminology: nomenclature of features of GABAergic interneurons of the cerebral cortex.</a> Nature reviews. Neuroscience. 9, 557-568 (2008).</li>
<li>DeFelipe, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+insights+into+the+classification+and+nomenclature+of+cortical+GABAergic+interneurons%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+reviews.+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">New insights into the classification and nomenclature of cortical GABAergic interneurons.</a> Nature reviews. Neuroscience. 14, 202-216 (2013).</li>
<li>Xu, X., Roby, K. D., Callaway, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunochemical+characterization+of+inhibitory+mouse+cortical+neurons%3A+three+chemically+distinct+classes+of+inhibitory+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Immunochemical characterization of inhibitory mouse cortical neurons: three chemically distinct classes of inhibitory cells.</a> J Comp Neurol. 518, 389-404 (2010).</li>
<li>Inan, M., Petros, T. J., Anderson, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Losing+your+inhibition%3A+Linking+cortical+GABAergic+interneurons+to+schizophrenia%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Dis%22%5BJournal%5D)">Losing your inhibition: Linking cortical GABAergic interneurons to schizophrenia.</a> Neurobiol Dis. 53, 36-48 (2013).</li>
<li>Benes, F. M., Berretta, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GABAergic+interneurons%3A+implications+for+understanding+schizophrenia+and+bipolar+disorder%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropsychopharmacology%22%5BJournal%5D)">GABAergic interneurons: implications for understanding schizophrenia and bipolar disorder.</a> Neuropsychopharmacology. 25, 1-27 (2001).</li>
<li>Tyson, J. A., Goldberg, E. M., Maroof, A. M., Petros, T. P., Anderson, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Duration+of+culture+and+Sonic+Hedgehog+signaling+differentially+specify+PV+versus+SST+cortical+interneuron+fates+from+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Duration of culture and Sonic Hedgehog signaling differentially specify PV versus SST cortical interneuron fates from embryonic stem cells.</a> Development. 142, 1267-1278 (2015).</li>
<li>Au, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+modular+gain-of-function+approach+to+generate+cortical+interneuron+subtypes+from+ES+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">A modular gain-of-function approach to generate cortical interneuron subtypes from ES cells.</a> Neuron. 80, 1145-1158 (2013).</li>
<li>Petros, T. J., Maurer, C. W., Anderson, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+derivation+of+mouse+ESC-derived+cortical+interneurons+by+expression+of+Nkx2.1%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Enhanced derivation of mouse ESC-derived cortical interneurons by expression of Nkx2.1.</a> Stem Cell Res. 11, 647-656 (2013).</li>
<li>Cambray, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activin+induces+cortical+interneuron+identity+and+differentiation+in+embryonic+stem+cell-derived+telencephalic+neural+precursors%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Activin induces cortical interneuron identity and differentiation in embryonic stem cell-derived telencephalic neural precursors.</a> Nat Commun. 3, 841(2012).</li>
<li>Chen, Y. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+%22MGE+Enhancers%22+for+Labeling+and+Selection+of+Embryonic+Stem+Cell-Derived+Medial+Ganglionic+Eminence+%28MGE%29+Progenitors+and+Neurons%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">Use of "MGE Enhancers" for Labeling and Selection of Embryonic Stem Cell-Derived Medial Ganglionic Eminence (MGE) Progenitors and Neurons.</a> PloS one. 8, e61956(2013).</li>
<li>Danjo, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subregional+specification+of+embryonic+stem+cell-derived+ventral+telencephalic+tissues+by+timed+and+combinatory+treatment+with+extrinsic+signals%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+neuroscience+%3A+the+official+journal+of+the+Society+for+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Subregional specification of embryonic stem cell-derived ventral telencephalic tissues by timed and combinatory treatment with extrinsic signals.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 31, 1919-1933 (2011).</li>
<li>Watanabe, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Directed+differentiation+of+telencephalic+precursors+from+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Directed differentiation of telencephalic precursors from embryonic stem cells.</a> Nat Neurosci. 8, 288-296 (2005).</li>
<li>Tyson, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Duration+of+culture+and+sonic+hedgehog+signaling+differentially+specify+PV+versus+SST+cortical+interneuron+fates+from+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Duration of culture and sonic hedgehog signaling differentially specify PV versus SST cortical interneuron fates from embryonic stem cells.</a> Development. 142, 1267-1278 (2015).</li>
<li>Maroof, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Directed+differentiation+and+functional+maturation+of+cortical+interneurons+from+human+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Directed differentiation and functional maturation of cortical interneurons from human embryonic stem cells.</a> Cell Stem Cell. 12, 559-572 (2013).</li>
<li>Tischfield, D. J., Kim, J., Anderson, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Atypical+PKC+and+Notch+Inhibition+Differentially+Modulate+Cortical+Interneuron+Subclass+Fate+from+Embryonic+Stem+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Atypical PKC and Notch Inhibition Differentially Modulate Cortical Interneuron Subclass Fate from Embryonic Stem Cells.</a> Stem Cell Reports. 8, 1135-1143 (2017).</li>
<li>Liodis, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lhx6+activity+is+required+for+the+normal+migration+and+specification+of+cortical+interneuron+subtypes%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+neuroscience+%3A+the+official+journal+of+the+Society+for+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Lhx6 activity is required for the normal migration and specification of cortical interneuron subtypes.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 27, 3078-3089 (2007).</li>
<li>Du, T., Xu, Q., Ocbina, P. J., Anderson, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NKX2.1+specifies+cortical+interneuron+fate+by+activating+Lhx6%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">NKX2.1 specifies cortical interneuron fate by activating Lhx6.</a> Development. 135, 1559-1567 (2008).</li>
<li>Marin, O., Anderson, S. A., Rubenstein, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Origin+and+molecular+specification+of+striatal+interneurons%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Origin and molecular specification of striatal interneurons.</a> Journal of Neuroscience. 20, 6063-6076 (2000).</li>
<li>Xu, Q., Wonders, C. P., Anderson, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sonic+hedgehog+maintains+the+identity+of+cortical+interneuron+progenitors+in+the+ventral+telencephalon%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Sonic hedgehog maintains the identity of cortical interneuron progenitors in the ventral telencephalon.</a> Development. 132, 4987-4998 (2005).</li>
<li>Glickstein, S. B., Alexander, S., Ross, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differences+in+cyclin+D2+and+D1+protein+expression+distinguish+forebrain+progenitor+subsets%5BTitle%5D)+AND+%22Cereb+Cortex%22%5BJournal%5D)">Differences in cyclin D2 and D1 protein expression distinguish forebrain progenitor subsets.</a> Cereb Cortex. 17, 632-642 (2007).</li>
<li>Petros, T. J., Bultje, R. S., Ross, M. E., Fishell, G., Anderson, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apical+versus+Basal+Neurogenesis+Directs+Cortical+Interneuron+Subclass+Fate%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Apical versus Basal Neurogenesis Directs Cortical Interneuron Subclass Fate.</a> Cell Rep. 13, 1090-1095 (2015).</li>
<li>Xu, Q., Tam, M., Anderson, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fate+mapping+Nkx2.1-lineage+cells+in+the+mouse+telencephalon%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Fate mapping Nkx2.1-lineage cells in the mouse telencephalon.</a> J Comp Neurol. 506, 16-29 (2008).</li>
<li>Wonders, C. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+spatial+bias+for+the+origins+of+interneuron+subgroups+within+the+medial+ganglionic+eminence%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">A spatial bias for the origins of interneuron subgroups within the medial ganglionic eminence.</a> Dev Biol. 314, 127-136 (2008).</li>
<li>Inan, M., Welagen, J., Anderson, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatial+and+temporal+bias+in+the+mitotic+origins+of+somatostatin-+and+parvalbumin-expressing+interneuron+subgroups+and+the+chandelier+subtype+in+the+medial+ganglionic+eminence%5BTitle%5D)+AND+%22Cereb+Cortex%22%5BJournal%5D)">Spatial and temporal bias in the mitotic origins of somatostatin- and parvalbumin-expressing interneuron subgroups and the chandelier subtype in the medial ganglionic eminence.</a> Cereb Cortex. 22, 820-827 (2012).</li>
<li>Flames, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Delineation+of+multiple+subpallial+progenitor+domains+by+the+combinatorial+expression+of+transcriptional+codes%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+neuroscience%3A+the+official+journal+of+the+Society+for+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Delineation of multiple subpallial progenitor domains by the combinatorial expression of transcriptional codes.</a> The Journal of neuroscience: the official journal of the Society for Neuroscience. 27, 9682-9695 (2007).</li>
<li>Fogarty, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatial+genetic+patterning+of+the+embryonic+neuroepithelium+generates+GABAergic+interneuron+diversity+in+the+adult+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+neuroscience+%3A+the+official+journal+of+the+Society+for+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Spatial genetic patterning of the embryonic neuroepithelium generates GABAergic interneuron diversity in the adult cortex.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 27, 10935-10946 (2007).</li>
<li>Eiraku, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Self-organized+formation+of+polarized+cortical+tissues+from+ESCs+and+its+active+manipulation+by+extrinsic+signals%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Self-organized formation of polarized cortical tissues from ESCs and its active manipulation by extrinsic signals.</a> Cell Stem Cell. 3, 519-532 (2008).</li>
<li>Colasante, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+Conversion+of+Fibroblasts+into+Functional+Forebrain+GABAergic+Interneurons+by+Direct+Genetic+Reprogramming%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Rapid Conversion of Fibroblasts into Functional Forebrain GABAergic Interneurons by Direct Genetic Reprogramming.</a> Cell Stem Cell. 17, 719-734 (2015).</li>
<li>Xu, Q., Cobos, I., De La Cruz, E., Rubenstein, J. L., Anderson, S. A. <a target="_blank" href="http://homes.mpimf-heidelberg.mpg.de/~mhelmsta/pdf/2004%20Xu%20et%20al%20JNeurosci.pdf">Origins of cortical interneuron subtypes.</a> The Journal of neuroscience: the official journal of the Society for Neuroscience. 24, 2612-2622 (2004).</li>
<li>Southwell, D. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interneurons+from+embryonic+development+to+cell-based+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Interneurons from embryonic development to cell-based therapy.</a> Science. 344, 1240622(2014).</li>
<li>Tyson, J. A., Anderson, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GABAergic+interneuron+transplants+to+study+development+and+treat+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Neurosci%22%5BJournal%5D)">GABAergic interneuron transplants to study development and treat disease.</a> Trends Neurosci. 37, 169-177 (2014).</li>
<li>Donegan, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stem+cell-derived+interneuron+transplants+as+a+treatment+for+schizophrenia%3A+preclinical+validation+in+a+rodent+model%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Stem cell-derived interneuron transplants as a treatment for schizophrenia: preclinical validation in a rodent model.</a> Mol Psychiatry. , (2016).</li>
<li>Deglincerti, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Self-organization+of+human+embryonic+stem+cells+on+micropatterns%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Self-organization of human embryonic stem cells on micropatterns.</a> Nat Protoc. 11, 2223-2232 (2016).</li>
<li>Chambers, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Highly+efficient+neural+conversion+of+human+ES+and+iPS+cells+by+dual+inhibition+of+SMAD+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Highly efficient neural conversion of human ES and iPS cells by dual inhibition of SMAD signaling.</a> Nat Biotechnol. 27, 275-280 (2009).</li>
<li>Wang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+cultivation+of+naive-like+human+pluripotent+stem+cells+based+on+HERVH+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Isolation and cultivation of naive-like human pluripotent stem cells based on HERVH expression.</a> Nat Protoc. 11, 327-346 (2016).</li>
<li>Zeltner, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Capturing+the+biology+of+disease+severity+in+a+PSC-based+model+of+familial+dysautonomia%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Capturing the biology of disease severity in a PSC-based model of familial dysautonomia.</a> Nat Med. 22, 1421-1427 (2016).</li>
<li>Blahos, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+site+on+the+Galpha+-protein+that+recognizes+heptahelical+receptors%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">A novel site on the Galpha -protein that recognizes heptahelical receptors.</a> J Biol Chem. 276, 3262-3269 (2001).</li>
</ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

Mientras que este método es altamente efectivo en patrones derivados de J1 troncales (SCRC-1010), hemos experimentado éxito variable con otras líneas de mESC y aislamientos clonales. Por ejemplo, Foxg1::venus troncales (EB3-derivado; Danjo et al. 13) responden mal a este protocolo y Foxg1 inducción por DD12 es típicamente del orden de 1-2%. Por razones que no entendemos, Nkx2.1::mCherry:Lhx6::GFP otro reportero doble clon (llamado JQ59) fue aislado simultáneamente como la línea descrita e...

En ratones y seres humanos, aproximadamente la mitad de todo corticales inhibitorios interneurons (CIns) originan dentro de una estructura subcortical transitoria conocida como la eminencia ganglionar medial (MGE), donde los progenitores neuroepiteliales de CIns y neuronal y glial los subgrupos expresan el factor de transcripción Nkx2.11,2. CIn los subgrupos o subtipos son definidos por la intersección electrofisiológicos, neuroquímicos y morfológicas y características de conectividad de3,4. El CIns derivado de MGE se pueden agrupar en subgrupos no superpuestos sobre todo basan en su expresión de PV o SST, la expresión de que se correlaciona con particular electrofisiológicos y conectividad tendencias5. Disfunción de interneuronas, especialmente ésos en el subgrupo de PV, se ha implicado en múltiples neuropsiquiátricos desórdenes y enfermedades6,7. El objetivo general de este método es producir derivados de células mitóticas progenitores y precursores migratorias enriquecidos por PV o SST CIn destino para estudiar biología cortical interneurona y para uso en terapias basadas en células.
Hemos desarrollado un método escalable, altamente eficiente para la derivación de expresa Nkx2.1 interneurona progenitores y su progenie de troncales. Utilizando un Nkx2.1::mCherry:Lhx6::GFP reportero doble mESC línea8, Nkx2.1 progenitores o su progenie poste-mitotic expresando Lhx6 puede ser aislado por FACS y posteriormente utilizado en un número de aplicaciones posteriores. Mediante la manipulación de un número de vías de señalización, duración de la cultura y modo de la neurogénesis, podemos obtener millones de precursores de interneurona fluorescente etiquetado adecuados para multitud de aplicaciones posteriores.
Aunque existen varios otros métodos para la generación de MGE-como progenitores de troncales9,10,11,12,13,14, nuestro método, que depende de la Wnt antagonista XAV-939, es particularmente eficaz en generar Foxg1/Nkx2.1 Co expresando progenitores telencéfalo. Además, la capacidad para seleccionar progenitores interneurona o su progenie poste-mitotic Lhx6 expresando a través de nuestro sistema dual de reportero, realza grandemente la capacidad de generar distintos progenitores y su progenie.

<table><tbody><tr><td>Sistema de filtro de vacío con tapa de botella</td> Tubo de ensayo de <td>CLS430769</td><td></td><td>Corning</td></tr><tr><td>con filtro de celdas Snap Cap</td><td>ThermoFisher</td><td>Corning 352235</td><td></td></tr><tr><td>Fibroblastos embrionarios de ratón (CF-1 MEF IRR 7M)</td><td>MTI-Globalstem</td><td>GSC-6101G</td><td>1 vial de MEFs de 7M es suficiente para cuatro placas TC de 10 cm. Referencias: 29,35</td></tr><tr><td>FBS</td><td>Atlanta Biologicals</td><td>S11150H</td><td></td></tr><tr><td>Primocin</td><td>Invivogen</td><td>Ant-pm-2</td><td>También conocido como agente antimicrobiano. No filtre con medios base, agregue después de la filtración. Referencias: 9,11,36,37</td></tr><tr><td>N2 supplement-B</td><td>Stemcell Technologies</td><td>7156</td><td>No filtrar con medios base -- añadir después de la filtración</td></tr><tr><td>Glutamax (100x)</td><td>ThermoFisher</td><td>35050061</td><td>También conocido como L-alanina-L-glutamina. Referencias: 9,11,38,39</td></tr><tr><td>KnockOut Serum Replacement (KSR)</td><td>ThermoFisher</td><td>10828028</td><td>También conocido como suplemento medio sin suero. Referencias: 9,11</td></tr><tr><td>L-glutamina (100x)</td><td>ThermoFisher</td><td>25030081</td><td></td></tr><tr><td>MEM-NEAA (100x)</td><td>ThermoFisher</td><td>11140050</td><td></td></tr><tr><td>2-Mercaptoethanol</td><td>ThermoFisher</td><td>21985023</td><td></td></tr><tr><td>KnockOut DMEM</td><td>ThermoFisher</td><td>10829018</td><td>También conocido como DMEM que contiene no glutamina. Referencias: 9,11</td></tr><tr><td>Hyclone FBS</td><td></td><td>VWR 82013-578</td><td>También conocido como FBS de grado de células madre. Referencias: 9,11</td></tr><tr><td>Placa tratada con cultivo de tejidos (10cm)</td><td>BD Falcon</td><td>353003</td><td></td></tr><tr><td>Placa de Petri estéril no adherente (10cm)</td><td>VWR</td><td>25384-342</td><td></td></tr><tr><td>Factor inhibidor de la leucemia (mLIF)</td><td>Chemicon</td><td>ESG1107</td><td>No congelar, almacenar a 4'C. Referencias: 9,11</td></tr><tr><td>DMEM/F12</td><td>ThermoFisher</td><td>11330032</td><td></td></tr><tr><td>0.1% Solución de gelatina</td><td>ATCC</td><td>ATCC PCS-999-027</td><td></td></tr><tr><td>Laminina</td><td>Sigma</td><td>L2020</td><td></td></tr><tr><td>Poly-L-lisina</td><td>Sigma</td><td>P6282</td><td></td></tr><tr><td>Tripsina-EDTA (0,05%)</td><td>ThermoFisher</td><td>25300054</td><td></td></tr><tr><td>Accutase</td><td>ThermoFisher</td><td>A1110501</td><td>También conocido como reactivo de disociación celular que contiene no tripsina. Referencias: 9,11</td></tr><tr><td>RQ1 DNasa libre de RNasa</td><td>Promega</td><td>M610A</td><td></td></tr><tr><td>LDN-193189</td><td>Stemgent</td><td>04-0074</td><td>Resuspender en DMSO y almacenar a -80'C en alícuotas de un solo uso</td></tr><tr><td>XAV939</td><td>Stemgent</td><td>04-0046</td><td>Resuspender en DMSO y almacenar a -80'C en alícuotas de un solo uso</td></tr><tr><td>rhFGF-2</td><td>R& D Systems</td><td>233-FB</td><td>Resuspender en PBS con 0.1% BSA y almacenar a -80'C en alícuotas de un solo uso</td></tr><tr><td>rhIGF-2</td><td>R& D Systems</td><td>291-G1</td><td>Resuspender en PBS con 0.1% de BSA y almacenar a -80'C en alícuotas de un solo uso</td></tr><tr><td>Inhibidor de rocas (Y-27632)</td><td>Tocris</td><td>1254</td><td>Resuspender en DMSO y almacenar a -80'C en alícuotas de un solo uso</td></tr><tr><td>Agonista suavizado (SAG)</td><td>Millipore</td><td>566660-1MG</td><td>Resuspender en H20 y almacenar a -80'C en alícuotas de un solo uso</td></tr><tr><td>rm Sonic Hedgehog/SHH</td><td>R& D Systems</td><td>464-SH-025</td><td>Resuspender en PBS con 0.1% BSA y almacenar a -80'C en alícuotas de un solo uso</td></tr><tr><td>PKC&zeta; Inhibidor de pseudosustrato, miristoilado</td><td>EMD Millipore</td><td>539624</td><td>Resuspender en H20 y almacenar a -80'C en alícuotas de un solo uso</td></tr></tbody></table>

diferenciación de células madre embrionarias de ratón en precursores corticales interneurona

Differentiation of Mouse Embryonic Stem Cells into Cortical Interneuron Precursors

Interneuronas corticales de GABAérgico son una población heterogénea de células que desempeñan un papel crítico en la regulación de la salida de neuronas piramidales excitatorias como sincronizar las salidas de conjuntos de neuronas piramidales. Déficits en la función de interneurona se han implicado en una variedad de trastornos neuropsiquiátricos, incluyendo autismo, la esquizofrenia y la epilepsia. La derivación de interneuronas corticales de las células madre embrionarias no sólo permite el estudio de su desarrollo y función, sino que proporciona una idea de los mecanismos moleculares subyacentes a la patogénesis de trastornos relacionados con la interneurona corticales. Interneuronas también tienen la notable capacidad de sobrevivir, migrar e integrar en host circuitos corticales poste-trasplante, haciéndolos candidatos ideales para su uso en terapias basadas en células. Aquí, presentamos un método de cuerpo para monocapa embryoid escalable, altamente eficiente, modificado para la derivación de expresa Nkx2.1 interneurona progenitores y su progenie de células madre embrionarias de ratón (troncales). Usando una línea de Nkx2.1::mCherry:Lhx6::GFP doble reportero mESC, Nkx2.1 progenitores o su progenie poste-mitotic expresando Lhx6 puede ser aislado a través de células activado por fluorescencia (FACS) de clasificación y posteriormente utilizado en un número de aplicaciones posteriores. También ofrecemos métodos para enriquecer parvalbúmina (PV) o somatostatina subgrupos de interneurona (SST), que puede ser útil para estudiar aspectos de la determinación de destino o para su uso en aplicaciones terapéuticas que se beneficiarían de interneurona enriquecido de subgrupo trasplantes.

El protocolo descrito en este documento es una versión modificada de nuestros protocolos publicados15,16,17 y ha sido optimizado para su uso con nuestra línea de mESC dual-reportero de Nkx2.1::mCherry:Lhx6::GFP. Mediante la adición de los inhibidores de Wnt XAV-939 de DD0-5, combinado con nuevo chapado en DD8, logramos robusta inducción Nkx2.1, en donde más del 50% de todos los núcleos DAPI + cul...

Este protocolo describe un método para generar progenitores interneurona cortical y poste-mitotic interneurona precursores de células madre embrionarias del ratón usando un método modificado de cuerpo para monocapa embryoid. Estos progenitores/precursores puede ser usado en vitro fluorescencia ordenados y trasplantado en neocortex neonatal para el estudio de determinación de destino o utilizado en aplicaciones terapéuticas.

Diferenciación de células madre embrionarias de ratón en precursores corticales interneurona

GABAergic cortical interneurons are a heterogeneous population of cells that play critical roles in regulating the output of excitatory pyramidal neurons ...

El objetivo general de este procedimiento es generar progenitores de interneuronas corticales en precursores de interneuronas postmitóticas para células madre embrionarias de ratón utilizando un método de cuerpo embrioide modificado a monocapa. Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo de la neurociencia, como la forma en que los subtipos de interneuronas corticales logran sus destinos individuales durante el desarrollo. La principal ventaja de esta técnica es que permite la generación eficiente de progenitores de interneuronas que expresan Nkx2.1, así como métodos para enriquecer para los subgrupos de interneuronas de parvalbúmina o somatostatina.Para comenzar este procedimiento, coloque placas en las células alimentadoras de MEF mitóticamente inactivas en medios MEF en placas tratadas con cultivo de tejidos. Espere al menos 12 horas para que se asienten en una incubadora de cultivo celular a 37 grados centígrados antes de sembrar las mESC. Si no se utiliza inmediatamente, reemplace el medio MEF cada tres días.A continuación, agregue mESC que contienen el factor inhibidor de la leucemia de ratón a las placas MEF. Incubar las células a 37 grados centígrados e

differentiation-mouse-embryonic-stem-cells-into-cortical-interneuron

Research

Investigación

JoVE Journal

Neuroscience

Neurociencia

Este vídeo describe el método utilizado para el aislamiento de neuroprecursors de la corteza en desarrollo de embriones de ratones. El procedimiento para la eliminación de embriones del útero, la disección de los tejidos corticales, y la digestión de la corteza cerebral aislada se muestra.

Cultura de ratón con células madre neurales Precursores

Se describe una molécula basada en pequeñas protocolo para la diferenciación de las células madre embrionarias de ratón en células precursoras de oligodendrocitos (OPC). Este protocolo genera Olig2 + NG2 + OPC con alta eficiencia de 30 días de diferenciación. También describe un método para generar "picos" OPC que puede disparar potenciales de acción.

La diferenciación de células madre embrionarias en los precursores de oligodendrocitos

Hemos desarrollado un nuevo protocolo para mejorar la eficiencia de la diferenciación in vitro de células madre embrionarias de ratón en neuronas motoras. Las células madre embrionarias diferenciadas adquirida cuenta con las neuronas motoras como lo demuestra la expresión de marcadores neuronales de neuronas y el motor mediante técnicas de inmunohistoquímica.

La diferenciación eficiente de las células madre embrionarias de ratón en neuronas motoras

Este video demuestra la diferenciación de células madre embrionarias humanas, o hESCs, directamente en células progenitoras neurales sin usar células alimentadoras ni ningún paso intermedio. La inhibición selectiva de la proteína morfogenética ósea o BMP y las vías de señalización del factor de crecimiento transformante beta, o TGF-β, conducen a la diferenciación de las hESC en células progenitoras neurales, o NPC.

Diferenciación de células madre embrionarias humanas en progenitores neurales

Este video presenta un método para generar precursores de interneuronas corticales a partir de células madre embrionarias de ratón. El protocolo consiste en cultivar las células madre en medios que contienen inhibidores específicos de moléculas pequeñas, que facilitan la proliferación y la agregación de células madre en cuerpos embrioides (EB). Posteriormente, las EBs se disocian con enzimas y se colocan en pocillos de placa de cultivo recubiertos con proteínas de adhesión para promover su...

Generación de precursores de interneuronas corticales a partir de células madre embrionarias de ratón

Este video muestra un método para la generación in vitro de células progenitoras neurales (NPCs) a partir de células madre embrionarias de ratón (mESCs). Las mESCs se cultivan en suspensión para formar cuerpos embrioides (EBs), que luego son guiados para diferenciarse en NPCs mediante tratamiento con ácido retinoico en un cultivo adherente.

Una técnica para generar células progenitoras neurales a partir de células madre embrionarias de ratón

El video mostró un método de cultivo celular para diferenciar células progenitoras neurales en neuronas. Al incubar las células en un medio rico en nutrientes complementado con factores de crecimiento, las células progenitoras maduraron hasta convertirse en neuronas con axones y dendritas desarrollados. Un agente estabilizador garantizaba la viabilidad celular y protegía contra el daño oxidativo durante todo el proceso de diferenciación.

Diferenciación de Células Progenitoras Neurales en Neuronas

Este video muestra una técnica para la diferenciación de células madre embrionarias en una población en red de neuronas con sinapsis funcionales. Describe los pasos involucrados en la diferenciación de células madre embrionarias en neuronas, la inducción de la formación de redes neuronales y el enriquecimiento del cultivo con neuronas en red.

Diferenciación de células madre embrionarias de ratón en una población de neuronas en red

Este protocolo describe en detalle el método para generar progenitores neurales a partir de células madre embrionarias utilizando un método de monocapa sin suero. Estos progenitores se pueden utilizar para derivar tipos de células neuronales maduras o para estudiar el proceso de especificación neuronal y son susceptibles de escalado en formato multipocillo para el cribado de compuestos.

Diferenciación neural de células madre embrionarias de ratón en el suero libre de monocapa Cultura

Aquí, establecimos un método de bajo costo y fácil de operar que dirige la diferenciación rápida y eficiente de las células madre embrionarias a las neuronas. Este método es adecuado para la popularización entre laboratorios y puede ser una herramienta útil para la investigación neurológica.

Diferenciación neuronal de las células madre embrionarias del ratón in vitro

Describimos el procedimiento para la diferenciación in vitro de células madre embrionarias de ratón en células neuronales utilizando el método de la gota colgante. Además, realizamos un análisis fenotípico exhaustivo a través de RT-qPCR, inmunofluorescencia, ARN-seq y citometría de flujo.

Diferenciación y caracterización de progenitores neurales y neuronas a partir de células madre embrionarias de ratón

Aprende a generar progenitores de interneuronas corticales a partir de células madre embrionarias de ratón mediante el método modificado de cuerpos embrionarios a monocapa. Esta técnica permite estudiar la determinación del destino celular y aplicaciones terapéuticas en neurociencia.

Diferenciación de células madre embrionarias de ratón en precursores corticales interneurona

Explorar más videos