Examen cinético de la actividad de nucleasa utilizando sondas de ácido nucleico

Este protocolo proporciona una alternativa poderosa para el cribado de la actividad de la nucleasa como biomarcador de la enfermedad, con una metodología fácil de implementar incluso para investigadores que no están tan especializados en sondas de ácido nucleico. La principal ventaja de esta técnica es la capacidad de seleccionar sondas de ácido nucleico que pueden identificar actividades de nucleasa conocidas y desconocidas, aprovechando la interacción dinámica sonda-nucleasa. Otras ventajas de esta metodología son su flexibilidad, alta reproducibilidad y facilidad de uso.

La demostración será realizada por Khadija, un estudiante de maestría, y Baris, un postdoctorado de nuestro laboratorio. Al diseñar una biblioteca de oligonucleótidos, incluya al menos un ADN y una secuencia aleatoria de ARN que contenga una combinación de adenina, guanina, citosina y tiamina o uracilo. Para preparar las sondas de oligonucleótidos, gire hacia abajo las sondas de oligonucleótidos liofilizados y diluya cada sonda en el tampón Tris-EDTA a una concentración de 500 picomolar por microlitro para evitar la degradación de la nucleasa.