Name: Análisis de las interacciones ADN-proteína con la interferometría de biocapas basada en estreptavidina (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-01-17T12:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 7 s
Description: Aprende a analizar interacciones ADN-proteína mediante interferometría de biocapas basada en estreptavidina. Este método permite estudiar la cinética de unión de la proteína A de replicación con ADN de cadena sencilla en tiempo real.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>Análisis cuantitativo de la cinética de unión de RPA-ssDNA utilizando métodos sin etiquetas

<table><tbody><tr><td>0,5 mL Micro Tubos de Centrífuga</td><td>Globe Scientific</td><td>111554A</td><td></td></tr><tr><td>96 Pocillos Microplaca Negra Estándar</td><td>Dot Scientific</td><td>4TI-0223</td><td></td></tr><tr><td>Biotinilado Poly dT Oligonucleótido</td><td>IDT</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Albúmina sérica bovina (BSA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A2153-10G</td><td></td></tr><tr><td>Ditiotritol (DTT)</td><td>Dot Scientific</td><td>DSD11000-10</td><td></td></tr><tr><td>Ácido etilendiaminotetraacético (EDTA)</td><td>Dot Scientific</td><td>DSE57020-500</td><td></td></tr><tr><td>Ácido clorhídrico&nbsp;</td><td>Fisher Scientific&nbsp;</td><td>A144-500</td><td></td></tr><tr><td>Kimtec Science Kimwipes&nbsp;</td><td>Kimtech</td><td>34120</td><td></td></tr><tr><td>Octeto N1 Software</td><td>Sartorius&nbsp;</td><td>1.4.0.13</td><td></td></tr><tr><td>Octeto SA Biosensor&nbsp;</td><td>Sartorius&nbsp;</td><td>18-5019</td><td></td></tr><tr><td>PBS pH 7.2 (10x)</td><td>Gibco</td><td>1666711</td><td></td></tr><tr><td>Sistema de Octeto de Ensayo Personal N1</td><td>Sartorius&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ácido fosfórico&nbsp;</td><td>Ward's Science</td><td>470302-024</td><td></td></tr><tr><td>Cloruro de sodio (NaCl)</td><td>Dot Scientific</td><td>DSS23020-5000</td><td></td></tr><tr><td>Tris Base</td><td>Dot Scientific</td><td>DST60040-5000</td><td></td></tr><tr><td>Tween20&nbsp;</td><td>Bio-RAD</td><td>170-6531</td><td></td></tr></tbody></table>

análisis de las interacciones adn-proteína con la interferometría de biocapas basada en estreptavidina

Analyzing DNA-Protein Interactions with Streptavidin-Based Biolayer Interferometry

En BLI, la luz blanca se refleja desde la interfaz de biocapa/tampón y la interfaz de referencia interna al espectrómetro. Se registra el diagrama de interferencia resultante, y el desplazamiento espectral se mide a lo largo de un período de tiempo y se representa como la respuesta de las curvas de enlace en nm. En la Figura 1 se muestra una figura representativa que muestra la punta del biosensor con y sin unión al analito y el correspondiente desplazamiento de la longitud de onda espectral...

Análisis de las interacciones ADN-proteína con la interferometría de biocapas basada en estreptavidina

Protein-DNA interactions underpin essential cellular processes. Understanding these interactions is critical for elucidating the molecular mechanisms of ...

analyzing-dna-protein-interactions-with-streptavidin-based-biolayer

Research

Investigación

JoVE Journal

Biochemistry

Bioquímica

En este video, demostramos la tecnología de interferometría de biocapas (BLI) para detectar las interacciones intermoleculares entre ligandos y analitos objetivo en tiempo real. BLI mide los cambios en el patrón de interferencia de la luz blanca reflejada por una capa de ligandos inmovilizados en la superficie de un biosensor a medida que interactúan con los analitos en solución.

Tecnología de interferometría de biocapas para detectar interacciones entre ligando y analito

Los protocolos siguientes describen ensayos cinéticos de las interacciones proteína-proteína con Interferometría Bio-capa. F-tipo ATP sintasa, que está implicado en el metabolismo de la energía celular, puede ser inhibida por su subunidad ε en bacterias. Hemos adaptado Interferometría Bio-capa para estudiar las interacciones del complejo catalítico con el dominio del ε inhibidora C-terminal.

Interferometría Bio-capa para Cinética de interacciones proteína-proteína y alostéricos Efectos ligando medición

Aquí se describe la instrumentación y métodos para la detección de moléculas de proteína única etiquetados con fluorescencia que interaccionan con una sola molécula de ADN suspendido entre dos microesferas ópticamente atrapados.

Combinando Manipulación sola molécula y de imagen para el estudio de las interacciones proteína-ADN

Aquí presentamos un protocolo para supervisar el montaje y desmontaje de la toxina del ántrax mediante interferometría de la biocapa (BLI). Tras el montaje y desmontaje en la superficie del biosensor, los complejos de proteínas grandes son liberados de la superficie para la visualización e identificación de componentes de los complejos usando microscopia electrónica y espectrometría de masas, respectivamente.

Análisis complejos de la proteína dinámica montan en y de interferometría de biocapa Biosensor usando espectrometría de masas y microscopia electrónica

Las interacciones de los factores de transcripción (TO) con el ARN polimerasa generalmente se estudian mediante ensayos desplegables. Aplicamos una tecnología Biolayer Interferometry (BLI) para caracterizar la interacción de GrgA con el ARN polimeraso clamítico. En comparación con los ensayos desplegables, BLI detecta la asociación y disociación en tiempo real, ofrece una mayor sensibilidad y es altamente cuantitativa.

Aplicación de la interferometría de Biolayer (BLI) para el estudio de las interacciones proteínas y proteínas en la transcripción

flexibilidad conformacional desempeña un papel crítico en la función de la proteína. En este documento, se describe el uso de la espectrometría de masas de ionización por electrospray resuelta en el tiempo junto con el intercambio de hidrógeno-deuterio para sondear los rápidos cambios estructurales que impulsan función en proteínas ordenadas y desordenadas.

Resuelta en el tiempo de ionización por electrospray de hidrógeno-deuterio Espectrometría de Masas de cambio para el estudio de la estructura proteica y Dinámica

Este protocolo describe la separación de complejos funcionales de cadenas de transporte de electrones mitocondriales (Cx) IV y sus supercomplejos utilizando electroforesis nativa para revelar información sobre su ensamblaje y estructura. El gel nativo puede someterse a inmunotransferencia, ensayos en gel y purificación por electroelución para caracterizar adicionalmente los complejos individuales.

Análisis de supercomplexes de la cadena de transporte de electrones mitocondriales con electroforesis nativa, ensayos en gel y electroelución

Presentamos un protocolo para la caracterización rápida de biomolecular plegado y encuadernación interacciones con ligandos termolábiles utilizando calorimetría diferencial.

Medición de perfiles Biomolecular DSC con ligandos termolábiles para caracterizar rápidamente doblar y atar las interacciones

El protocolo aquí describe las interacciones de la proteína de canal de iones hEAG1 purificada con la pequeña molécula lipídica ligando fosfatidilinositol 4, 5-bifosfato (PIP2). La medición demuestra que BLI podría ser un método potencial para la detección de iones de molécula pequeña novela canal ligando.

Captura de la cinética de la interacción de una proteína de canal iónico con moléculas pequeñas por el ensayo de interferometría de la Bio-capa

Mutagénesis sitio-dirigida es una técnica utilizada para introducir mutaciones específicas en el ácido desoxirribonucleico (ADN). Este protocolo describe cómo realizar mutagénesis sitio-dirigida con un 2-paso y enfoque, que es aplicable a cualquier fragmento de ADN de interés basado en la reacción en cadena de polimerasa de 3 pasos (PCR).

Mutagénesis sitio-dirigida para In Vitro e In Vivo experimentos, ejemplificados con las interacciones de la ARN en Escherichia Coli

Aprende a analizar interacciones ADN-proteína mediante interferometría de biocapas basada en estreptavidina. Este método permite estudiar la cinética de unión de la proteína A de replicación con ADN de cadena sencilla en tiempo real.

Análisis de las interacciones ADN-proteína con la interferometría de biocapas basada en estreptavidina

Explorar más videos