Un abonnement JoVE est requis pour visualiser ce contenu. Connectez-vous ou commencez votre période d'essai gratuite.

Article de méthode

Aiguë traumatisme cérébral chez la souris Suivi par longitudinale à deux photons imagerie

12.2K vues

⸱

DOI :

10.3791/51559

⸱

6 avril 2014

 ,  ,  ,  ,  , 

Dans cet article

Résumé

Traumatisme cérébral aigu est une blessure grave qui n'a pas de traitement adéquat à ce jour. La microscopie multiphotonique permet d'étudier longitudinalement le processus de développement du cerveau de traumatisme aigu et stratégies thérapeutiques sondage chez les rongeurs. Deux modèles de traumatisme cérébral aigu étudié avec in vivo à deux photons imagerie cérébrale sont démontrées dans ce protocole.

Résumé

Bien traumatisme cérébral aigu entraîne souvent des dommages de tête dans différentes accidents et affecte une fraction importante de la population, il n'existe aucun traitement efficace pour le moment. Limites de modèles animaux actuellement utilisés empêchent la compréhension du mécanisme de la pathologie. La microscopie multiphotonique permet d'étudier les cellules et les tissus dans le cerveau des animaux intacts longitudinalement dans des conditions physiologiques et pathologiques. Ici, nous décrivons deux modèles de lésion cérébrale aiguë étudiés au moyen de l'imagerie à deux photons du comportement des cellules du cerveau dans des conditions post-traumatiques. Une région du cerveau est lésé choisi avec une aiguille pour produire un traumatisme, d'une largeur et une profondeur contrôlée dans le parenchyme cérébral. Notre procédé utilise stéréotaxique piqûre avec une aiguille de seringue, qui peut être combinée avec l'application simultanée de médicaments. Nous proposons que cette méthode peut être utilisée comme un outil de pointe pour étudier les mécanismes cellulaires de conséquences physiopathologiques de traumatisme aigu dans le cerveau des mammifères

Introduction

Lésion cérébrale aiguë est un problème important de santé publique avec une incidence élevée de blessures dans des accidents de véhicules à moteur, les chutes ou les agressions, et la forte prévalence de l'incapacité chronique ultérieure. Approches thérapeutiques pour le traitement des lésions du cerveau restent totalement symptomatique, limitant ainsi l'efficacité des soins préhospitaliers, chirurgicale et critique. Cela rend l'impact social et économique de la lésion cérébrale particulièrement sévère. Pour une variété de raisons, la plupart des essais cliniques n'ont pas réussi à démontrer l'amélioration de la récupération après une lésion céréb....

Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.

Protocole

Toutes les procédures présentées ici ont été réalisées selon les recommandations locales pour les soins des animaux (La loi finlandaise sur l'expérimentation animale 62/2006). licence d'animaux (ESAVI/2857/04.10.03/2012) a été obtenu de l'autorité locale (ELÄINKOELAUTAKUNTA-ELLA). Souris adultes de 1-3 mois d'âge, poids 24-38 g, ont été maintenus dans des cages individuelles dans l'animalerie de l'Université certifié et fourni de la nourriture et de l'eau ad libitum.

Une. D'imagerie cérébrale des blessures à travers une fenêtre crânienne

  1. Anesthésier les animaux et la préparation du champ....

Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.

Résultats

Nous avons optimisé deux procédures de fonctionnement: 1) la fenêtre crânienne chronique et 2) crâne éclaircie, pour l'imagerie du cerveau post-traumatique chez les souris transgéniques. Vue schématique de la préparation expérimentale est présentée dans la figure 1. Traumatique piqûre par aiguille en acier de 0,3 mm de diamètre extérieur (30 U) est appliquée à la puits foré (figure 1A). Une préparation crânienne succès de la fenêtre permet l'imagerie à des profondeurs allant jus.......

Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.

Discussion

traumatisme du cerveau est, un événement imprévisible brusque. Ici, nous décrivons le modèle animal qui reproduit un spectre de changements pathologiques observés chez des patients humains après une lésion cérébrale telle que la neurodégénérescence, l'élimination des dendrites, un oedème cérébral, une cicatrice gliale, des hémorragies dans le cortex cérébral associé à une hémorragie sous-arachnoïdienne focal et une perméabilité accrue de l' barrière hémato-encéphalique. Pour étudier la pathogenèse primaire et se.......

Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.

Déclarations de divulgation

Les auteurs n'ont rien à révéler.

Remerciements

Nous sommes profondément reconnaissants au Dr Frank Kirchhoff pour fournir GFAP-EGFP et souches de souris CX3CR1-EGFP. Le travail a été soutenu par des subventions du Centre de mobilité internationale de la Finlande, Tekes, finlandais Graduate School of Neuroscience (FGSN) et l'Académie de Finlande.

....

Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
2A-sa pince à épiler muette, 115 mmXYtronicXY-2A-SA
30 G ½ ; en aiguilleBDREF 304000
Tondeuse pour animaux, machine à raserAesculapIsis GT420
Microscope binoculaireZeissStemi 2000
Régulateur de température biologique avec coussin chauffant en acier inoxydableSupertechTMP-5b
Lame microchirurgicale émousséeBDREF 374769
Tube borosilicaté avec filamentSutter InstrumentsBF120-69-10Pour la production de pipettes en verre
CarprofenePfizerRimadyl vet
Chlorhexidine digluconateSigmaC9394
Ciment dentaireDrguDent, DentsplyREF 640 200 271
DexaméthasoneFaunaPharmaRapidexon vet
Forets jetablesMeisingerHP 310 104 001 001 008
Dulbeco' s PBS 10xSigmaD1408
Dumont #5 pince, 110 mmFST91150-20
Extracteur de microélectrodes EalingEaling 50-2013Extracteur vertical pour la production de pipettes en verre
Pommade pour les yeuxNovartisViscotears
perceuseForedomFM3545
Foredom micromoteur à mainForedomMH-145
Plate-forme d’anesthésie gazeuse pour sourisStoelting50264Assemblé sur instrument stéréotaxique Hémostase
Collagen SpongeAvitene, Ultrafoam BARDRef 1050050
ImarisBitplane
KetamineIntervetKetaminol vet
Mai Tai DeepSee laserSpectra-Physics
Support en métalNeurotar
Pince à micropansements, 105 mmAesculapBD302R
MicrofilWPIMF34G-5Micro seringue de remplissage capillaires
Huile minéraleSigmaM8410
Microscope à balayage laser multiphotoniqueOlympusFV1000MPE
NanoFil Seringue 10 &mu ; lWPINANOFILSeringue Hamilton
Écouvillons non tissés 5 x 5Molnlycke Health CareMesoftTampons chirurgicaux
Colle polyacryliqueHenkelLoctite 401
Couvre-objet en verre rond  ;Microscopie électronique Sciences
1,5 épaisseur  ;
Instrument stéréotaxique pour petits animauxDavid Kopf Instruments900
Adaptateur pour souris et rat nouveau-néStoelting51625Assemblé sur instrument stéréotaxique.
Ciseaux à iris d’étudiant, droits 11,5 cmFST91460-11
Sondes moléculairesSulforhodamine 101S-359
Pompe à microseringue UMP3 et contrôleur de pompe à micro-seringue Micro 4WPIUMP3-1Micro-injecteur et contrôleur
XylazineBayer Health CareRompun vétérinaire
Foredom Foredom contrôle de

Références

  1. Lighthall, J. W. Controlled cortical impact: A new experimental brain injury model. J. Neurotrauma. 5 (1), 1-15 (1988).
  2. Lindgren, S., Rinder, L. Experimental studies in head injury. Biophysik. 2 (5), 320-329 (1965).
  3. Shreiber, D. I., et al.

Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.

Réimpressions et autorisations

Explorer plus d’articles

Ponction stéréotaxiqueFenêtre crânienneAmincissement du crâneMicroscopie multiphotoniqueGénération de seconde harmoniqueActivation des astrocytesImagerie de la microglieParenchyme cérébral