Summary
这项工作提出了建立从茶(山茶)叶衍生的细胞悬浮培养物的协议,可用于研究整个植物可以采用的外部化合物的代谢,如杀虫剂。
Abstract
利用茶植物体外组织研究杀虫剂代谢的平台。从无菌茶树叶诱导形成松散的卡苏在Murashige和Skoog(MS)基底培养基与植物激素2,4二氯苯氧乙酸(2,4-D,1.0毫克L-1)和基尼汀(KT,0.1毫克L-1)。在3或4轮次培养后形成,每轮持续28天。然后,将松弛的卡鲁斯(约3克)接种到含有相同植物激素的B5液体介质中,并在25~1°C的黑暗中,在摇动的培养箱(120 rpm)中培养。在3⁄4亚培养后,以1:1和1:2(悬浮母液:新鲜介质)的亚培养比建立从茶叶中提取的细胞悬浮液。利用该平台,在茶叶衍生细胞悬浮培养中加入六种杀虫剂(每片甲氨酰胺、伊米达洛狄德、乙酰胺、伊米达布蒂、二甲苯酸盐和奥米霍特)。利用液相色谱和气相色谱跟踪杀虫剂的代谢。为了验证茶细胞悬浮物培养物的效用,使用质谱法比较了处理过的细胞培养和完整植物中存在的三甲氧西和二甲苯甲酸酯的代谢物。在治疗茶细胞培养中,发现七种三甲氧烷代谢物和两种二甲苯醚代谢物,而在治疗完好的植物中,只发现两种三甲氧烷代谢物和一种二甲苯甲酸酯。与使用完整的茶树相比,使用细胞悬浮液简化了代谢分析,尤其是对于茶等困难的基质。
Introduction
茶是世界上消费最广泛的非酒精饮料之一。茶是由木本多年生山茶的叶子和芽,茶植物生长在广阔的种植园,易受大量害虫3,4。有机磷和尼古丁类杀虫剂常被用作系统性杀虫剂5,以保护茶树免受害虫,如白蝇,叶漏斗,和一些白鳍豚物种6,7。施用后,这些杀虫剂被吸收或转移到植物中。在植物内部,这些系统杀虫剂可以通过水解、氧化或植物酶的还原反应转化。这些转化产物可能比母化合物更极性,毒性更低。然而,对于一些有机磷酸盐,一些产品的生物活性较高。例如,乙酰胺被代谢成毒性更大的甲胺磷8,9,和二甲苯酸盐成欧美磷10,11。因此,植物代谢研究对于确定植物中农药的命运非常重要。
植物组织培养物已被证明是研究农药代谢的有用平台,其识别代谢物与在完整植物13、14、15中发现的代谢物相似。使用组织培养物,特别是细胞悬浮培养物,有几个优点。首先,可以进行无微生物的实验,从而避免微生物对农药转化或降解的干扰。其次,组织培养提供一致的材料,随时使用。第三,代谢物比从完整植物中提取更容易,组织培养物通常具有较少的相互作用化合物和较低的化合物复杂性。最后,组织培养可以更容易地用于比较一系列农药代谢在一个单一的实验16。
在这项研究中,成功地建立了从无菌生长的茶树叶中提取的细胞悬浮液。然后用茶细胞悬浮培养法比较六种系统杀虫剂的耗散行为。
这个详细的协议旨在提供一些指导,以便研究人员可以建立一个植物组织培养平台,有用的研究异种生物在茶中的代谢命运。
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Protocol
1. 茶文化
注:无菌叶来自在研究组17中首次开发的体外生长的植物系。除孵化器中的培养时间外,所有程序均在第5节进行无菌层流罩。
- 在高压灭菌之前,将两种介质的pH值(Murashige和Skoog [MS] 基底介质和甘博格的B5液体介质)调整到5.8。C,20分钟。
- 用剪刀沿着无菌叶的中间静脉切开,然后将每半部分细分为约 0.3 厘米 x 0.3 厘米的培养皿中的小块。
- 将无菌外植(小叶片)放入含有植物激素 2,4-D (1.0 mg L-1)和 KT (0.1 mgL-1) 的 MS 基础培养基。六种外植可放置在含有100 mL MS基底介质的300 mL烧瓶中。
- 在黑暗中,在25°C的恒温下培养上述叶外植物。28天后,选择第一代诱导的烧瓶,并转移到新鲜的烧瓶(亚文化)。在3⁄4亚培养后获得松散和易碎的调用。
2. 茶细胞悬浮培养
- 在无菌条件下,使用无菌手术刀片将坚固介质中的有力、易碎和松弛的切口切成小块(范围为 0.5⁄2 mm)。
- 称重约3克的小卡鲁斯。将 callus 放入含有 20 mL B5 液体介质的 150 mL 烧瓶中,辅以 2,4-D (1.0 mg L-1)和 KT (0.1 毫克 L-1)。
- 在黑暗中,在120rpm的摇动培养箱中,在恒温(25 ± 1 °C)下培养液体细胞悬浮液。
- 经过7至10天的栽培后,取出培养瓶,让它们站立几分钟。
- 以所有上清液作为种子材料进行亚培养至新鲜介质(悬浮母液与新鲜介质的亚培养比在1:1至1:2之间)。取出沉淀的大呼叫。
- 获得最终良好生长的细胞悬浮培养后,3⁄4亚培养周期28天。
3. 三聚苯乙烯氯化物细胞活力测定
- 在100°C下杀死活细胞样本10分钟,作为对照细胞,然后再进行存活染色。
- 在6000 x g下将所有细胞悬浮培养基离心8分钟。在将2.5 mL的磷酸盐缓冲盐水(PBS)缓冲液(pH 7.3)中细胞悬浮之前,取出上清液,并用手摇动1分钟。
- 加入2.5 mL的0.4%三氯四氯苯(TTC)溶液,然后再次用手摇动。
- 在常设培养箱(30°C)中孵育混合物1小时。
4. 用杀虫剂处理和取样茶细胞悬浮物培养物
- 在细胞悬浮培养物中加入400 μL的过滤灭菌液溶液(500μgmL-1),包括四种尼古丁类化合物(二甲酰胺、乙酰氨基、依米达洛韦和伊米达克洛兹)或两种有机磷酸盐(二甲酸酯和omethoate),分别。
注:如果目的是比较异种生物行为,使用同一母体细胞悬浮液测试不同的化合物。 - 在恒温(25 ± 1 °C)和摇动培养箱速度(120 rpm)下用杀虫剂培养细胞悬浮液样品。在 0、3、5 10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70 和 75 天内采集样本(参见步骤 4.3 或 4.4)。
- 要测试含有尼古丁类的样品,请去除同质细胞培养物的1 mL等分,将其放入1.5 mL塑料离心管中,并在4000 x g下离心2分钟。
- 在通过高性能液相色谱-紫外线 (HPLC-UV) 和超高性能液相色谱四极极极飞行时间 (UPLC-QTOF) 质量 (UPLC-QTOF) 质量进行分析之前,将超生物通过 0.22 μm 孔径滤膜光谱学 (材料表).
- 要测试含有有机磷的样品,请去除细胞培养物的500μL等分,并放入35 mL离心管或1.5 mL塑料离心管中(制备后一种样品,如尼古丁类样品)。
- 在 500 μL 样品的 35 mL 离心管中加入 0.1 克氯化钠和 5 mL 丙酮/乙酸乙酯 (3:7,v/v)。
- 将混合物涡旋1分钟,然后让它们休息10分钟。
- 将上清液的2.5 mL放入10 mL玻璃管中,在40°C下使用氮蒸发器蒸发至接近干燥。
- 用1 mL丙酮溶解残留物,涡流1分钟,通过0.22μm滤膜,然后由气相色谱-火焰光度检测器(GC-FPD)进行分析。
5. 用杀虫剂制备完整茶树的样品
注:完整的茶树试验是在水培系统中使用在50 mL中生长的营养溶液(30 NH4+,10 NO3-,3.1 PO4- 、 40 K+、20 Ca2+、25 Mg2+、 0.35 Fe2+,0.1 B) 的茶苗进行的3+, 1.0 Mn2+,0.1 Zn2+, 0.025 Cu2+,0.05 Mo+,和 10 Al3+,在毫克 L-1)18.安徽农业大学一个实验温室处于20°C的浅暗循环(12小时光和12小时黑暗)。
- 将五株植物放入4升塑料锅中15天。
- 分别在塑料罐中加入0 ppm(控制)或100ppm的三甲氧西甲酸酯或二甲苯甲酸酯。
- 根据前一种方法制备完整的植物样品,除预浸泡19外,然后用质谱分析,获得精确的质量光谱。
6. 仪器分析
-
新生儿碱代谢行为的HPLC分析
- 使用HPLC-UV(材料表)检测第4.3节样品中波长为254nm的三甲氧西胺和乙酰胺的含量和代谢产物,以及270nm的imidacloprid和imidaclothiz的含量和代谢产物。
注:HPLC-UV条件与前一研究19相同。
- 使用HPLC-UV(材料表)检测第4.3节样品中波长为254nm的三甲氧西胺和乙酰胺的含量和代谢产物,以及270nm的imidacloprid和imidaclothiz的含量和代谢产物。
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有机磷酸盐代谢行为的GC分析
- 使用手性柱(材料表)检测GC-FPD第4.4节样品中二甲霍伊酸酯和二甲苯甲酸酯的含量。
- 使用氮气作为载运气,并将流量设置为1.0 mL最小-1。
- 将初始温度设置为 120°C,并按住 5 分钟,在 30°C 最小-1时将温度升高至 150°C,在 10°C 最小-1时保持 3 分钟,在 10°C -1 时增加到 170°C,保持 7 分钟。最后在30°C-1时增加到210°C,然后保持5分钟。
- 在无分体模式下将喷射温度设置为 200 °C;将探测器温度设置为 250°C。
- 将喷射音量设置为 1 μL。
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细胞培养中杀虫剂代谢物的UPLC-QTOF分析
- 使用带有C18列(材料表)的UPLC-QTOF检测细胞培养中的杀虫剂的代谢物(来自第4.3节的样本)。
- 将流速设置为 0.2 mL 最小-1。将喷射音量设置为 10 μL。
- 对于经尼古丁类处理的样品,将初始移动相设置为 85% A(5 mM 铵甲酸水)和 15% B(乙酰乙酯)。超过 10 分钟,将移动阶段 B 增加到 38%,并在 1 分钟内返回 15%,保持 9 分钟。
- 对于有机磷处理的样品,将初始移动相设置为 55% A(0.1% 用于酸水)和 45% B(乙酰乙酯)。超过 5 分钟,将移动阶段 B 增加到 70%,然后在 0.5 分钟内返回到 B 的 45%,保持 2.5 分钟。
- 将QTOF操作参数设置如下:气体温度,325°C;干燥气体(氮气),10 L最小-1;护套气体温度,350°C;护套气流,11 L 最小-1;毛细管电压,4000 V;喷嘴电压,1000 V;碎片电压,100 V用于新烟碱杀虫剂,110 V用于有机磷杀虫剂;滑马器电压,65 V;在正子模式下工作。
- 将仪器设置为全扫描频谱和目标 MS/MS 模式。
- 使用准确的批量工具处理数据;推断没有标准产物的代谢物从MS/MS注释以及文献12,15,20,21,22 。
-
完整植物提取物中杀虫剂代谢物的UPLC-Orbitrap分析
- 使用UPLC-Orbitrap质谱法(材料表)检测完整植物提取物中杀虫剂的代谢物。
- 将质谱(材料表)操作参数设置如下:护套气体压力,35 arb;气体温度,300°C;喷嘴电压,3.5千伏;毛细管温度,350 °C。
- 将洗脱程序设置为上述(步骤 6.3.3 和 6.3.4),以便对细胞培养进行 UPLC-QTOF 分析。
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Representative Results
在MS介质上种植28天后,通过测量污染、褐化和诱导,从田间种植的茶树和从在无菌环境中在体外生长的茶树中切去的叶子中,对叶的诱导进行了比较。图 1A.在20、37、62和90天的文化上,卡鲁斯的增长被记录下来(图1B)。在整整90天的栽培过程中,从体外生长的叶子中提取的卡鲁斯比从田间生长的叶子中提取的卡鲁斯更活跃。无菌叶子的叫声是亮黄色的,而田间生长的叶子的叫声是棕色的(图1B)。
在浓度为1.0毫克L-1的2,4-D23,KT的浓度得到优化。在0.05毫克L-1KT时,卡鲁斯的生长速度缓慢,质地稍小,卡us呈白色(图2C);在0.1毫克L-1KT浓度下,甲流生长速率最高,高达61.5%(图2A),质地松散,颜色呈黄色(图2C);当KT增加到0.5毫克L-1时,卡鲁斯是紧凑和不规则的和棕色的中心(图2C)。选择KT浓度后,进一步研究2,4-D的浓度。在1毫克L-1 2,4-D和0.1毫克L-1KT的组合,甲流增长率最高,达到46.9%,和卡鲁斯的外观是最好的(图2B,D)。
在固体介质上第二次培养后,每个切除了的叶子表面的一半以上被生长的卡鲁斯覆盖(图3A)。第四次亚文化后,叶部分被卡鲁斯完全覆盖。在第五次亚文化之后,卡鲁斯纹理开始变得紧凑,底部有一些白色和棕色斑点。
当亚文化周期为21天(图3B)时,卡US是活跃的,但增长量最大,这表明频繁的亚文化将导致更少的调用量。当亚文化周期为28天长时,卡鲁斯生长活跃,颜色呈黄色,质地松散。35天后,卡鲁斯开始从中心变棕色。在42天的时候,卡鲁斯处于最糟糕的状态,呈深棕色,不再生长。
比较了两种液体介质对细胞悬浮液生长和细胞悬浮液颜色的影响(图4)。测试了母液与培养液总体积的三种不同比例。在75天的培养过程中,细胞密度在培养中逐渐增加,从所有三个比率开始。40 mL 新介质 (v/v) 中 15 g 细胞的比值产生光学密度 (OD) 值明显高于 40 mL (v/v) 中的 4 g 和 40 mL (v/v) 中的 6 g (图 5A)。经过4个子培养周期,每次28天,在B5液体介质中,从无菌茶液中成功建立了茶细胞悬浮系统(图6)。
图 1:从采摘的叶子和无菌植物叶中诱导的调用诱导的比较。(A) 从种植的茶树和从无菌、体外生长的植物中切去的叶子中收获的叶子的诱导。观察到外植的污染源、褐色和诱导性。(B) 种植园种植的茶树(第1组)和无菌体外栽生植物(第2组)的叶子生长量的比较:照片不同:20(面板a); 37 (b)62 (c);和 90 (d).这个数字已由焦等人24日修改。请点击此处查看此图的较大版本。
图 2:不同植物激素浓度下茶叶衍生菌的生长速率和生长状态。不同KT浓度和1mgL-1 2,4-D下茶叶衍生的叶的生长速率 (A) 和生长状态 (C) ;不同浓度为2,4-D浓度和0.5mgL-1 KT的卡鲁斯的生长速率 (B) 和生长状态 (D) .这个数字已由焦等人24日修改。请点击此处查看此图的较大版本。
图 3:不同数量的亚文化周期(A)和不同长度的亚文化周期(B)之后的Callus状态。这个数字已由焦等人24日修改。请点击此处查看此图的较大版本。
图 4:不同介质类型对液体悬浮培养系统中卡苏生长的影响。(A) B5 介质.(B) MS 介质。这个数字已由焦等人24日修改。请点击此处查看此图的较大版本。
图 5:光学密度值和TTC染色。(A) 细胞悬浮液的OD680值从0到75天的不同比率开始;(B) 活细胞和控制细胞的TTC染色。这个数字已由焦等人24日修改。请点击此处查看此图的较大版本。
图 6:在暗箱中恒温(25~1°C)建立茶细胞悬浮培养的过程。茶树作为叶外植物来源的无菌栽培(a);用2,4-D(1.0毫克L-1)和KT(0.1毫克L-1)(b)接种到MS培养基的茶叶;28天后首次培养的调用 (c);卡鲁斯适合在4个亚培养周期后,每个28天(d);其余步骤在相同的温度下,但在摇动的培养箱中以120rpm的恒定速度:卡鲁斯接种到B5培养基7至10天(e);去除沉淀和大卡US后的种子细胞悬浮液(f );细胞悬浮的亚培养,在1周期28天(g);成熟细胞悬浮期后3-4亚培养周期28天(h)。这个数字已由焦等人24日修改。请点击此处查看此图的较大版本。
补充图1:茶细胞悬浮培养和介质(CK)中6种杀虫剂的5微克/mL代谢在恒温(25~1°C)孵育,在75天内摇动培养箱速度(120rpm)。蒂亚美特索桑 (A), 伊米达洛普里德 (B),乙酰胺(C), 伊米达克洛齐 (D), 二甲苯醚(E1), 和奥米霍特 (F );(E2)随着时间的推移,在二甲苯醚处理细胞培养和培养基中产生的二甲苯醚代谢物(二甲苯醚)的生产。这个数字已由焦等人24日修改。请点击此处下载此图。
补充图2:未经处理的控制细胞培养、三甲氧西甲酸酶处理细胞培养、三甲氧乙烷处理介质(无细胞)提取物的总组子色谱(TiCs)。峰1-5,7和8是三甲氧西的代谢物,峰6是三甲苯甲氧西(A);脱二甲苯醚处理细胞培养基、二甲苯醚处理介质(无细胞)和60天后未经治疗的对照细胞的萃取物的TCS。峰1和2是二甲苯醚的代谢物,峰3是二甲苯甲醚(B);从硅甲氧西酮处理(上)和未经处理(下)完整植物(C);脱二甲苯醚(上)和未经处理(下)完整植物的提取物的TCS(D );在完整植物中,在tR1.86分钟(D1)中二甲苯酸盐的代谢物; 未经处理的植物(D2)在tR1.86分钟时未检测到化合物。 这个数字已由焦等人24日修改。请点击此处下载此图。
补充图3:使用UPLC-QTOF的二级质谱,该峰来自使用(A)二甲氧西甲酸酯和(B)二甲苯甲酸酯治疗的培养物。这个数字已由焦等人24日修改。请点击此处下载此图。
补充图4:使用Q-Exactive的二级质谱,从使用三甲氧烷(A1、A2和A3)和二甲苯甲酸酯(B1和B2)处理的完整植物中衍生的峰位。这个数字已由焦等人24日修改。请点击此处下载此图。
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Discussion
本文介绍了在茶植物组织中建立农药代谢模型的详细过程,包括植物外植物的选择、细胞活力的测定、茶细胞悬浮培养的建立等。活动。植物组织的任何部分都可以用来在消毒环境中启动callus25。在这项研究中,茶叶被选择用于开叶,不仅因为叶子比地下部分受到的污染要小,还因为它们是作物的可食用部分和杀虫剂应用的主要目标。
在这项研究中,比较了从田间采摘的叶子和从体外生长的无菌植物中切去的叶子的诱导率和生长状态。与田间生长的叶子相比,无菌叶的褐化和污染率要低得多,诱导率也更高。这可能是因为田间种植植物的叶子不仅使用乙醇和汞进行表面灭菌,而且生长环境也发生了变化,而无菌叶片是在无菌环境中栽培的,无需直接使用。额外的灭菌。此外,在90天的栽培过程中,来自体外生长的无菌植物的叶片比田间生长的叶子生长更有力。来自无菌植物的叶子更适合诱导茶壶,不仅因为它们的诱导率高,污染率低,还因为预处理时间较短,并且不受季节因素的影响。
要培养松散和易碎的调用,关键参数,主要是植物生长调节器水平和长度和亚培养周期的数量,必须优化25。2,4-D能有效地促进卡鲁斯诱导和生长,是卡鲁斯培养中应用最广泛的激素26。亚文化时间和亚文化周期长度对于卡鲁斯文化25也很重要。在每个周期的2至4个亚培养28天后,callus的纹理松散,呈黄色,没有褐色。优化实验确定,最好的卡鲁斯诱导方案是将来自无菌植物的叶子外植放在含有1mgL-1 2,4-D和0.1 mgL-1 KT的MS基基介质上,并每28天转移一次植物/植物。共有4个亚文化周期。该协议启动松散和易碎的调用,适合启动细胞悬浮。
在植物组织培养中,用于甲流生长的固体介质常可用于液体形式23的细胞悬浮培养。而茶在MS基基培养基中产生大量多酚,含有高浓度的无机盐,导致白发27,28。在这项研究中,对液体B5介质和MS介质进行了测试。两种培养物的平均增长率没有显著差异(B5基底介质为16.66%,MS基底介质为15.77%;图 4.然而,在MS基础介质中,调用是棕色的。因此,在该方法中选取了B5基底介质。
氧气对植物细胞生长和新陈代谢很重要。在液体培养中,过量的液体会降低氧浓度,抑制细胞生长,而太少的液体也会抑制细胞生长。测试了液体与烧瓶体积(mL液体:mL烧瓶)的几种比比。根据 21 d 后细胞生长的干重,液体:烧瓶比排名如下: 30:150 > 40:150 > 20:150, 50:150, 60:150 (mL: mL)23.在这项研究中,根据肉眼观察的细胞悬浮液观察方式,将40mL的培养液放入150 mL烧瓶(40 mL:150 mL)中。
当细胞密度过高或过低时,植物细胞不能很好地生长。因此,母细胞悬浮培养在亚培养时与新鲜培养基的比例影响细胞的生长潜力29。本研究使用均质细胞悬浮培养物的OD值来表示细胞生长量。将15克母液接种成培养液总体积40mL(v/v)适合细胞生长。亚培养比等于1:1和1:2(悬浮母液:新鲜介质)。
茶细胞悬浮培养液中的细胞活力通过TTC染色测试。无色TTC化合物可以通过活细胞线粒体中的脱氢酶转化为红色,但颜色不能从死细胞中改变(图5B)。该方法验证了液体培养细胞的生长状态。
茶细胞悬浮培养物的建立为研究不同农药的代谢和代谢物提供了一个方便的体外研究平台。独立于季节和天气,细胞悬浮培养物可以用不同的杀虫剂、不同浓度的活性成分和不同的时间长度进行处理。茶细胞悬浮培养物中产生的代谢物与从完整植物中提取的代谢物相似(补充图1和补充图2)。有趣的是,在茶细胞悬浮培养物中检测到七种二甲苯甲氧西甲烷代谢物和两种二甲苯醚代谢物,但只有两种甲氨酰氨基甲酸酯代谢物和一种用于治疗完整植物的二甲苯醚(补充图1, 补充图 2和补充图 3)。这可能是因为更容易从没有蜡质角质的细胞中提取,茶中干扰质谱结果的化合物较少(基质效应),或者与整个植物相比,茶细胞的代谢物轮廓更简单。
结果表明,与其他三种尼古丁类化合物相比,茶细胞更容易代谢二甲苯甲酰氨基甲氧西酮(补充图4)。有机磷酸盐(二甲苯酸盐和奥美磷)的代谢速度比尼古丁类化合物快。这些结果表明了茶细胞代谢途径和代谢调节的多样性,需要进一步研究。
使用完整的植物来研究杀虫剂的代谢和识别杀虫剂代谢物会带来许多困难,包括植物内初始和分解化合物的吸收和远距离迁移的障碍。细胞悬浮培养不仅可以解决这个问题,而且与新鲜叶提取物24相比,在样品分析中减少基质干扰。本研究证明,茶细胞悬浮培养物是研究茶植物异种生物化合物代谢的有效平台。它可以作为研究异种生物在其他植物中的代谢模式。
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Disclosures
作者没有什么可透露的。
Acknowledgments
这项工作得到了国家重点研究与发展计划(2016YFD0200900)、国家自然科学基金(第31772076号、第31270728号)、中国博士后科学基金会(2018M630700)和开放基金的支持。茶植物生物学与利用国家重点实验室(SKLTOF20180111)。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Acetamiprid (99.8%) | Dr. Ehrenstorfer | 46717 | CAS No: 135410-20-7 |
| Acetonitrile (CAN, 99.9%) | Tedia | AS1122-801 | CAS No: 75-05-8 |
| Agar | Solarbio Science & Technology | A8190 | CAS No: 9002-18-0 |
| Clothianidin (99.8%) | Dr. Ehrenstorfer | 525 | CAS No: 210880-92-5 |
| Dimethoate (98.5%) | Dr. Ehrenstorfer | 109217 | CAS No: 60-51-5 |
| Imidacloprid (99.8%) | Dr. Ehrenstorfer | 91029 | CAS No: 138261-41-3 |
| Imidaclothiz (99.5%) | Toronto Research Chemical | I275000 | CAS No: 105843-36-5 |
| Kinetin (KT, >98.0%) | Solarbio Science & Technology | K8010 | CAS No: 525-79-1 |
| Omethoate (98.5%) | Dr. Ehrenstorfer | 105491 | CAS No: 1113-02-6 |
| Polyvinylpolypyrrolidone (PVPP) | Solarbio Science & Technology | P8070 | CAS No: 25249-54-1 |
| Sucrose | Tocris Bioscience | 5511 | CAS No: 57-50-1 |
| Thiamethoxam (99.8%) | Dr. Ehrenstorfer | 20625 | CAS No: 153719-23-4 |
| Triphenyltetrazolium Chloride (TTC, 98.0%) | Solarbio Science & Technology | T8170 | CAS No: 298-96-4 |
| 2,4-Dichlorophenoxyacetic Acid (2,4-D, >98.0%) | Guangzhou Saiguo Biotech | D8100 | CAS No: 94-75-7 |
| chiral column | Agilent CYCLOSIL-B | 112-6632 | Chromatography column (30 m × 0.25 mm × 0.25 μm) |
| Gas chromatography (GC) | Shimadu | 2010-Plus | Paired with Flame Photometric Detector (FPD) |
| High-performance liquid chromatography (HPLC) | Agilent | 1260 | Paired with Ultraviolet detector (UV) |
| HSS T3 C18 column | Waters | 186003539 | Chromatography column (100 mm × 2.1 mm × 1.8 μm) |
| Ultra-high-performance liquid chromatography (UPLC) | Agilent | 1290-6545 | Tandem quadrupole time-of-flight mass spectrometer (QTOF) |
| Ultra-high-performance liquid chromatography (UPLC) | Thermo Scientific | Ultimate 3000-Q Exactive Focus | Connected to a Orbitrap mass spectrometer |
References
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