Fixation à l’éthanol et coloration DAPI : une méthode pour visualiser l’ADN chez C. elegans

- Commencez par une goutte de solution tampon sur une lame de microscope et transférez les vers intacts dans la gouttelette. Une fois les vers en place, utilisez un mouchoir non pelucheux pour absorber et retirer le tampon. Fixez l’échantillon en baignant plusieurs fois les échantillons avec de l’éthanol à 90 %, en le laissant s’évaporer après chaque application.

Une fois que l’éthanol s’est évaporé après le rinçage final, ajoutez une solution contenant le colorant d’acide nucléique, DAPI, à l’échantillon. Le DAPI se lie préférentiellement aux bases adénine et thymine dans le sillon mineur de l’ADN. Lorsqu’il est lié, le complexe DAPI-ADN absorbe la lumière UV et émet de la lumière bleue visible.

Ajoutez ensuite un conservateur anti-décoloration pour prolonger la durée de conservation de l’échantillon. Appliquez une lamelle et scellez-la sur la lame. Ensuite, utilisez un microscope fluorescent avec un filtre bleu pour visualiser les corps DAPI, qui, en fonction de la cellule et de l’état de son cycle, peuvent représenter des chromosomes uniques, des paires de chromatides sœurs ou des noyaux entiers. Dans cette expérience, nous compterons les paires de chromatides sœurs colorées au