C. elegans Dissection de blastomères : procédé d’extraction de la coquille d’œuf et de dissociation de cellules embryonnaires

- Pour cette dissection, utilisez deux micropipettes : l’une avec une ouverture à peu près de la même largeur qu’un œuf et l’autre deux fois plus large, et une série de solutions organisées en puits pour faciliter un transfert rapide entre elles.

Tout d’abord, placez les hermaphrodites adultes dans une solution de sel d’œuf, qui est osmotiquement équilibrée pour empêcher les embryons d’éclater. Coupez les vers en deux pour libérer les embryons en développement.

Ensuite, identifiez les embryons au stade de deux cellules. Ces cellules sont les blastomères formés par la division de l’ovule fécondé. Utilisez la micropipette avec la plus grande ouverture pour transférer un embryon dans une solution d’hypochlorite, de l’eau de Javel, qui commencera à décomposer la coquille protectrice de l’œuf.

Après seulement 40 à 55 secondes, transférez l’embryon dans le milieu de croissance de Shelton, ou SGM. Lavez brièvement chaque embryon dans deux puits de SGM pour éliminer toute trace d’eau de Javel avant de les placer dans un troisième puits.

Maintenant, utilisez la micropipette plus petite pour pipeter à plusieurs reprises l’embryon en fournissant la force mécanique pour retirer la coquille de