从尾夹中提取DNA：斑马鱼基因型平中使用的方法

- 开始程序，将麻醉的成年鱼放在一叠吸水纸上，现在使用无菌剃须刀刀片切割尾鳍，并迅速将鱼转移到含有淡水的鱼缸中进行回收。 将尾夹转移到包含裂解缓冲器的干净管中。裂解缓冲液包含非离子洗涤剂，可溶解血浆膜和细胞核膜。 缓冲器还含有一种叫做蛋白酶K的酶，这种酶分解蛋白质，使DNA释放到裂解物中。 它还降解核糖核酸，保护DNA免受核糖脂消化。

现在，将带尾夹的管子留在孵化器中过夜，以连续旋转在55 摄氏度下完全分解组织。接下来，在 95 摄氏度下加热管子 15 分钟，使蛋白酶 K.将管子离心机分给未消化的材料，并将含有DNA的超自然物质转移到另一个管子上。加入酒精，使DNA沉淀，然后再次离心，在颗粒中收集DNA。 在下列协议中，我们将从成年斑马鱼的尾夹和整个胚胎中分离出DNA。

-在DNA制备的当天，在裂解缓冲器中加入新鲜蛋白酶K，浓度为每毫升1毫克。组织可以使用鳍夹或胚胎鱼从成年鱼类中采集。

首先，用三合一溶液麻醉鱼。等到刺移动缓慢。然后，将鱼放在一叠纸巾上，用无菌剃须刀刀片切掉一小块长约2至3毫米的尾鳍。迅速将鱼放入贴有淡水的标记水箱中，以便恢复。

用无菌移液器尖端拾取鳍夹，将其转移到装满一百微升DNA裂解缓冲器的管子里。一定要给动物的罐子和管子贴上标签。在摄氏55度下，将所有采集到的组织孵化至少4小时，并通宵进行。

孵化后，通过在95摄氏度的温度下加热管子15分钟来灭活蛋白酶K，这些样品应立即用于PCR，但也可以储存在零下20摄氏度的温度下长达3个月。