Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Encyclopedia of Experiments
Encyclopedia of Experiments: Biology

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

استخراج الحمض النووي من مقطع الذيل

 
Click here for the English version

استخراج الحمض النووي من مقطع الذيل: طريقة تستخدم في جينوتيبينج حمار وحشي

Article

Transcript

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the English version.

- ابدأ الإجراء بوضع سمكة بالغة مخدرة على كومة من الورق الماصة. نقل مقطع الذيل إلى أنبوب نظيف يحتوي على عازل تحلل. يحتوي مخزن التحلل المؤقت على المنظفات غير الأيونية، التي تعمل على تليين غشاء البلازما والغشاء النووي للخلية. ويحتوي العازل أيضا على إنزيم يسمى proteinase K يكسر البروتينات ويمكن من إطلاق الحمض النووي في الليسات. الهضم.

الآن، وترك أنابيب مع مقاطع الذيل في حاضنة بين عشية وضحاها لكسر تماما أسفل الأنسجة في 55 درجة مئوية مع دوران مستمر. بعد ذلك ، سخني الأنبوب عند 95 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة لتثبيط البروتين K. Centrifuge الأنبوب إلى الكريات المواد غير المهضومة ونقل الناطقة التي تحتوي على الحمض النووي إلى أنبوب آخر.

- في يوم إعداد الحمض النووي، أضف بروتينا طازجا K إلى حاجز التحلل بتركيز 1 ملليغرام لكل ملليلتر.

أولا، تخدير الأسماك في حل tricaine. انتظر حتى حركات الخياشيم بطيئة. ثم، وضع السمك على كومة من الأنسجة، ومع شفرة حلاقة معقمة، وقطع قطعة صغيرة من زعنفة الذيل حوالي 2 إلى 3 ملليمترات طويلة.

التقط مشبك الزعنفة بطرف ماصة معقم ونقله إلى أنبوب مليء بمائة ميكرولتر من مخزن تحلل الحمض النووي.

بعد الحضانة، تعطيل البروتين K عن طريق تسخين الأنابيب في 95 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة.

Tags

قيمة فارغة، مشكلة ،
Read Article

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter