テールクリップからのDNA抽出:ゼブラフィッシュジェノタイピングに用いられる方法

- 吸水性紙の積み重ねに麻酔をかけた成体魚を置くことで手順を開始します。今、無菌カミソリブレードを使用して尾ひれを切断し、回復のために新鮮な水を含むタンクに魚を素早く移します。リシスバッファーを含むきれいなチューブにテールクリップを移す;溶解バッファーには、細胞の原形質膜と核膜を可溶化する非イオン性洗剤が含まれています。消化。

今、連続的な回転で摂氏55度で組織を完全に分解するために、一晩インキュベーターにテールクリップ付きのチューブを残します。 次に、チューブを摂氏95度で15分間加熱し、プロテイナーゼK.遠心分離酵素を無消化物にしてペレット未消化物に移し、DNAを含む上清を別のチューブに移します。

- DNA調製の日に、1ミリリットル当たり1ミリグラムの濃度でリシスバッファーに新鮮なプロテイナーゼKを加える。

まず、トリカイン溶液中の魚を麻酔します。ギルの動きが遅くなるまで待って、組織のスタックに魚を置き、滅菌カミソリの刃で、長さ約2〜3ミリメートルの尾ひれの小片を切り落とします。

無菌ピペットチップでフィンクリップを拾い、100マイクロリットルのDNAリシスバッファーで満たされたチューブに移してください。動物のタンクとチューブの両方にラベルを付けてください。

インキュベーション後、チューブを摂氏95度で15分間加熱してプロテナーゼKを不活性化する。