Encyclopédie des expériences JoVE
Recherche sur le cancer
0 vues • 3:01 min • April 30th, 2023
La métabolomique est l’étude permettant d’identifier et de quantifier les métabolites présents dans les cellules. Pour préparer l’échantillon, commencez par ensemencer les cellules cancéreuses du sein avec le milieu de croissance dans deux plaques étiquetées comme test et contrôle. Incuber pendant trois jours à 37 degrés Celsius. Maintenant, retirez le milieu et ajoutez un milieu frais avec de l’œstradiol dans la plaque d’essai et un milieu ordinaire dans la plaque de contrôle.
L’œstradiol se lie au récepteur alpha des œstrogènes dans les cellules cancéreuses du sein pour induire certaines expressions, provoquant un changement dans la composition des métabolites. Incuber les plaques pendant la durée souhaitée. Remplacez le milieu par une solution saline tamponnée au phosphate glacée ou du PBS pour laver les cellules, puis ajoutez de l’acétone glacée. Les réactifs glacés arrêtent l’action des protéases et empêchent ainsi la dégradation des protéines.
Utilisez maintenant un grattoir pour détacher les cellules des plaques et transférez-les dans des tubes à l’aide d’une pipette. Prenez 20 microlitres de cette suspension cellulaire sur un hémocytomètre et comptez le nombre de cellules.
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