Détection des agents pathogènes des poissons à l’aide de l’analyse par répétition en tandem à nombre variable (VNTR)

Commencez par une plaque PCR contenant une solution dénaturante à base de formamide.

Ajoutez les amplicons PCR dilués dérivés d’une bactérie pathogène des poissons dans chaque puits.

Ces amplicons contiennent des répétitions en tandem à nombre variable (VNTR) marquées par fluorescent, des séquences courtes et répétitives utilisées comme marqueurs génétiques pour l’identification bactérienne.

Scellez la plaque et la centrifugeuse pour éliminer les bulles d’air.

Chauffez la plaque dans un cycleur thermique pour dénaturer les VNTR à double brin.

La formamide améliore la séparation des brins et inhibe le re-recuit.

Refroidissez rapidement la plaque pour stabiliser l’ADN simple brin.

Centrifugeuse pour collecter le volume de l’échantillon.

Retirez le joint et fixez la plaque avec un cadre.

Placez le tube capillaire et effectuez l’électrophorèse capillaire.

Lors de l’électrophorèse, les fragments de VNTR migrent à travers le capillaire sous un champ électrique et se séparent par taille.

Un laser excite les balises fluorescentes sur chaque fragment, produisant des signaux codés par couleur.

L’électrophérogramme résultant montre des schémas de pic VNTR correspondant à la bactérie pathogène.

Après confi