Microextraction en phase solide : une technique basée sur des sondes pour l’extraction d’échantillons à partir de tissus greffés

Le stockage à long terme d’un greffon d’organe affecte son profil métabolique, qui est un indicateur de la fonction de l’organe et du rejet précoce de l’organe.

Pour isoler ces métabolites, il faut commencer par prendre une sonde mince de microextraction en phase solide ou SPME recouverte d’un sorbant biocompatible. Plongez la sonde dans une solution de nettoyage hydroalcoolique pour hydrater le réactif enrobé et détacher les impuretés liées.

Agitez la sonde pour éliminer les impuretés. Ensuite, placez la sonde dans une solution d’activation et agitez à nouveau. Les produits chimiques contenus dans la solution d’activation modifient la surface de la sonde, améliorant ainsi son potentiel d’adsorption. Rincez la sonde à l’eau et stérilisez-la pour éliminer les contaminants microbiens.

Maintenant, insérez la sonde stérile et activée dans la greffe d’organe de sorte que la matrice tissulaire recouvre toute la surface du sorbant. Le matériau absorbant attire les métabolites polaires et non polaires libres du greffon, ce qui permet l’adsorption sur sa surface. Rétractez la sonde et rincez-la à l’eau pour éliminer tout tissu résiduel.

Ensuite, placez la sonde dans une solution de désorption, qui interagit avec les métabolites adsorbés. Agitez la sonde pour séparer et solubiliser les métabolites capturés dans la solution de désorption. Enfin, retirez la sonde et traitez le mélange de métabolites résultant pour une analyse ultérieure.

Commencez par préparer un mélange de préconditionnement composé de 1 à 1 méthanol et d’eau. Pipetez 1 millilitre de solution dans chaque flacon en verre de 2 millilitres et placez une sonde dans chaque flacon. Agitez les flacons sur un agitateur vortex à 1 200 tr/min pendant 1 heure. Ensuite, rincez les sondes avec de l’eau de qualité LC-MS et stérilisez-les selon le protocole de stérilisation chirurgicale standard ou dans le service de traitement stérile.

Lorsque vous êtes prêt à extraire l’échantillon, ouvrez l’emballage stérile et insérez deux sondes directement dans le cortex rénal pendant 10 minutes par point temporel, en vous assurant que toute la longueur du revêtement est recouverte par la matrice tissulaire. Assurez-vous de garder une trace de l’heure de l’échantillonnage pour chaque sonde. Rétractez la sonde en la retirant du tissu et rincez immédiatement le revêtement avec de l’eau de qualité LC-MS pour éliminer tout sang restant, en veillant à rincer loin du site chirurgical.

Pour transporter les sondes, placez-les dans des flacons séparés et fermez-les. Ensuite, placez les flacons dans une boîte remplie de glace carbonique ou d’azote liquide. Conservez les échantillons à moins 80 degrés Celsius ou procédez immédiatement à la désorption.

Préparez une solution de désorption composée d’acétonitrile et d’eau pour l’analyse métabolomique et une autre composée d’isopropanol et de méthanol pour l’analyse lipidomique. Ajoutez 100 microlitres de la solution dans les inserts des flacons étiquetés de 2 millilitres et placez une sonde dans chaque flacon. Agitez les flacons à 1 200 tr/min pendant 2 heures. Ensuite, retirez les sondes des flacons et procédez à l’analyse LC-MS.