Encyclopédie des expériences JoVE
Techniques biologiques
0 vues • 4:21 min • July 8th, 2025
phiC31 integrase est une enzyme recombinase dérivée d’un phage qui catalyse la recombinaison spécifique d’un transgène, un gène étranger, dans le génome de l’hôte. Pour l’intégration du transgène dans un hôte d’anophèle, commencez par un embryon d’anophèle dans un tampon approprié.
Le génome de l’anophèle est pré-conçu avec un site d’attache pour l’intégration des gènes et un marqueur cyan-fluorescent pour la sélection visuelle. Ensuite, ajoutez un petit volume de plasmide donneur transportant la cargaison de transgène souhaitée, un site de fixation, un marqueur fluorescent rouge et des composants du squelette plasmidique dans un flacon. Ensuite, ajoutez un volume optimal d’un plasmide auxiliaire portant une intégrase codant pour le gène. Maintenant, chargez le mélange plasmidique dans une microseringue.
Injectez doucement les plasmides dans le pôle postérieur de l’embryon, le site d’origine des cellules germinales, ce qui entraîne un léger mouvement du cytoplasme. Une fois à l’intérieur de l’embryon, le plasmide auxiliaire commence à synthétiser les enzymes intégrases.
L’enzyme intégrase médie la recombinaison spécifique du site entre le plasmide donneur et le génome de l’hôte. Ai
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