Encyclopédie des expériences JoVE
Techniques biologiques
0 vues • 5:03 min • July 8th, 2025
La coloration fluorescente à l’argent des protéines dans les gels de polyacrylamide utilise des sondes fluorogéniques pour détecter et quantifier les protéines.
Commencez avec un gel de polyacrylamide avec des protéines, séparés en bandes par électrophorèse. Trempez-le dans un mélange fixateur d’éthanol et d’acide acétique, qui empêche les bandes de se diffuser en dénaturant les protéines.
Lavez le gel pour éliminer les résidus d’acide acétique et d’éthanol. Plongez le gel dans la teinture au nitrate d’argent. Les ions d’argent se lient fortement aux groupes chargés négativement dans les protéines.
Incuber dans l’obscurité. Rincez le gel à l’eau ultra-pure pour éliminer les complexes d’ions d’argent non liés.
Immergez le gel dans une solution en développement contenant une sonde fluorogénique multi-composants - TPE-4TA. Cette sonde anionique cible les ions d’argent liés à la protéine, formant des agrégats insolubles qui activent les propriétés fluorogéniques de la sonde, conférant ainsi une fluorescence.
Comme l’activation de la fluorescence dépend de l’agrégation, les sondes non liées n’émettent aucun signal, ce qui permet une coloration totale des protéines avec une émission de f
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