Méthode ELISA d’analyse des interactions entre les protéines d’appât et de proie

L’interaction physique entre deux partenaires protéiques module les mécanismes biologiques en aval.

Pour détecter les interactions protéine-protéine à l’aide du test immuno-enzymatique ELISA, prenez une plaque d’immunodosage multipuits. Ajoutez un tampon d’enrobage contenant l’une des protéines en interaction – la protéine d’appât – et incuber. Les protéines de l’appât sont adsorbées sur la surface du puits via des interactions hydrophobes non spécifiques.

Jetez la solution épuisée et lavez la plaque avec un tampon pour éliminer les protéines non liées. Ajoutez une solution bloquante et incuber, permettant aux molécules d’agent bloquant de la solution de bloquer les sites de liaison non spécifiques à la surface du puits.

Ajoutez le partenaire protéique en interaction – la protéine de proie – marqué avec des résidus d’histidine pour une quantification facile. Incuber, ce qui permet à la protéine de la proie de se lier spécifiquement à son partenaire interactif, l’appât. Ajoutez une solution d’anticorps antihistidiniques conjugués à des enzymes peroxydase de raifort qui se lient à la proie, formant un complexe appât-proie-anticorps.

Pipetez une solution contenant le substrat de l’enz