Étude de l’excitabilité des neurones fluorescents à l’aide d’une pince à patch de cellules entières
Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
0 vues • 3:06 min • July 8th, 2025
Prenez une tranche coronaire de souris transfectée immobilisée dans une chambre d’enregistrement perfusée avec un LCR.
La tranche contient une population de neurones pyramidaux clairsemée exprimant une enzyme cible et une protéine fluorescente.
Assembler une pipette d’enregistrement composée d’une solution intracellulaire et d’une électrode reliée à un amplificateur pour la mesure des signaux neuronaux.
Identifiez au microscope la zone du tissu cible et localisez un neurone fluorescent.
Appliquez une pression positive sur la pipette pour éviter le colmatage et faites-la avancer vers le neurone cible.
La pression positive provoque une légère indentation sur la membrane neuronale au contact.
Relâchez la pression, formant un joint étanche entre la membrane et la pointe.
Réglez le potentiel de maintien à une valeur négative constante pour stabiliser le neurone.
Appliquez une brève pression négative pour rompre la membrane, en connectant le cytoplasme à l’intérieur de la pipette et en établissant une configuration de cellules entières.
Passez en mode pince de courant et appliquez des impulsions de courant positives, générant des potentiels d’action indiquant l’excitabilité neuronale.
Tr
Consultez la transcription complète et accédez à des milliers de vidéos scientifiques