Étude de l’accumulation d’alpha-synucléine dans les neurones dopaminergiques embryonnaires primaires de souris
Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
0 vues • 3:13 min • July 8th, 2025
Prenez des cultures micro-insulaires de neurones dopaminergiques embryonnaires primaires de souris dans une plaque multipuits contenant du milieu.
Ces neurones sont prétraités avec des fibrilles préformées (PFF) - des formes mal repliées et agrégées de la protéine alpha-synucléine.
Les PFF agissent comme des graines, déclenchant un repliement et une oligomérisation supplémentaires de l’alpha-synucléine endogène, formant des fibrilles d’alpha-synucléine phosphorylées. Ces fibrilles finissent par former des corps de Lewy.
Remplacer le support par un fixateur pour préserver la morphologie cellulaire.
Lavez les cellules avec un tampon.
Introduisez un tampon contenant un détergent pour perméabiliser les membranes cellulaires.
Ajoutez une solution bloquante pour empêcher la liaison d’anticorps non spécifiques.
Ajouter des anticorps primaires ciblant l’alpha-synucléine phosphorylée et une protéine de référence omniprésente dans les neurones dopaminergiques.
Laver pour éliminer les anticorps non liés.
Introduire des anticorps secondaires conjugués aux fluorophores ciblant les anticorps primaires respectifs.
Lavez à nouveau pour éliminer les anticorps non liés.
Ajoutez un colorant de liaiso
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