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Neurosciences
0 vues • 2:53 min • April 28th, 2025
Prenez une section de cerveau de souris fixée au tétroxyde d’osmium intégrée dans un bloc de résine.
Obtenez une image de coupe et alignez-la avec une image d’atlas pré-préparée pour identifier la région d’intérêt.
Marquez les limites de cette région sur le pâté de maisons.
Chauffez la résine pour la ramollir et excisez la région marquée.
Collez l’échantillon sur une barre de maintien en verre et coupez-le.
À l’aide d’un ultramicrotome, préparez des coupes semi-minces et ultraminces.
Transférez les sections semi-minces et ultraminces sur des supports en verre et des grilles en nickel, respectivement.
Teindre les sections semi-minces avec un colorant qui se lie aux acides nucléiques, au cytoplasme riche en ribosomes et à la matrice extracellulaire.
Lavez les coupes et examinez-les au microscope optique pour confirmer la présence de la zone cible.
Observez les coupes ultraminces au microscope électronique à transmission.
Le tétroxyde d’osmium améliore la densité électronique des membranes cellulaires et des organites, offrant un contraste élevé par rapport au cytoplasme moins dense en électrons, permettant de visualiser l’ultrastructure cellulaire.
Pour cartographier une zone d’intérêt, sélectionnez une image contenant la zone d’intérêt dans l’atlas d’images précédemment préparé. Esquissez les limites de la zone d’intérêt sur l’image en coupe. Superposez optiquement ces bordures sur l’échantillon intégré au microscope et utilisez une aiguille d’un pouce de calibre 26 pour gratter ces bordures de région sur l’échantillon de résine. Ensuite, chauffez les spécimens à 95 degrés Celsius afin de ramollir la résine.
Ensuite, sortez les échantillons de résine chauds du four et utilisez une lame de rasoir pour exciser les zones d’intérêt. Collez les échantillons sur des barres de maintien en verre acrylique du calibre approprié et coupez les échantillons montés pour une section semi-fine et ultra-mince. À l’aide d’un ultramicrotome, vous pouvez acquérir des sections semi-minces de 0,7 micromètre et ultraminces de 70 nanomètres, en recueillant les sections semi-minces sur des supports en verre et les sections ultraminces sur des grilles de nickel.
Teindre les lames semi-minces avec 1 % de bleu de toluidine dans du PBS pendant quatre minutes, suivies de plusieurs lavages à l’eau désionisée avant d’examiner les coupes par microscopie optique. Les lames ultra-minces peuvent ensuite être directement évaluées par microscopie électronique à transmission à 180 kilovolts, sans autre modification.
Cet article décrit une méthode de préparation de sections semi-minces et ultramince de tissu cérébral de souris fixé à l'oxyde d'osmium pour l'examen microscopique. Le processus comprend l'alignement des images de sections avec un atlas, l'excision de régions d'intérêt et l'utilisation de techniques de coloration pour améliorer la visualisation.
L'analyse ultrastructurale par microscopie électronique en transmission (TEM) permet une visualisation à haute résolution des caractéristiques cellulaires et subcellulaires dans le tissu cérébral de souris, soutenant ainsi la réduction des risques mécanistiques dans la découverte de médicaments axée sur la neurobiologie. Une cartographie précise des régions d'intérêt et un imagerie quantitative facilitent une validation fiable des cibles et éclairent les décisions prises en amont pour le portefeuille de projets. Ce flux de travail assure une continuité translationnelle en reliant les interventions moléculaires à des résultats ultrastructuraux observables.
Ce protocole basé sur la MET s'intègre à la chaîne de découverte, depuis les premiers tests d'hypothèses jusqu'à la validation de modèles précliniques, soutenant à la fois les études mécanistiques et la recherche translationnelle.
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Dernière mise à jour : 29 août 2026