Visualisation du plexus choroïde du cerveau d’une souris à l’aide de la microscopie électronique à balayage

Prélever le plexus choroïde d’un cerveau de souris dans un panier à échantillons.

Le tissu, situé à l’intérieur des ventricules cérébraux, contient une couche de cellules épithéliales comportant des microvillosités sur leur surface apicale.

Incuber le tissu dans une solution fixatrice pour préserver son architecture cellulaire.

Laver avec un tampon pour éliminer l’excès de fixateur et stabiliser le pH.

Incuber le tissu avec du tétroxyde d’osmium qui se lie aux lipides de la membrane cellulaire, préservant ainsi la stabilité de la membrane, puis rincez l’excès de réactif.

Déshydratez les tissus en augmentant les concentrations d’alcool pour éviter la distorsion des tissus pendant l’imagerie.

Séchez le tissu, fixez-le sur un support d’échantillon recouvert de carbone, puis enduisez-le d’une couche de platine conductrice.

À l’aide de la microscopie électronique à balayage, focalisez un faisceau d’électrons sur la surface. La couche de platine dissipe les électrons, empêchant l’accumulation de charge et minimisant les artefacts d’imagerie.

Un détecteur capture les électrons rétrodiffusés à partir de la surface, produisant une image du tissu présentant des cellules épithéliales avec des microvillosités.

Pour effectuer la préparation de l’échantillon pour le MEB, transférez le plexus choroïde fraîchement isolé dans une solution de fixation fraîchement préparée et incubez pendant la nuit à 4 degrés Celsius. Une fois cela fait, lavez l’échantillon trois fois à l’aide de 3 à 5 millilitres de tampon de cacodylate de sodium de 0,1 molaire pendant cinq minutes chacun.

Post-fixer les échantillons dans 3 à 5 millilitres de tétroxyde d’osmium à 2 % dans un tampon de cacodylate de sodium à 0,1 molaire pendant 30 minutes. Ensuite, lavez les échantillons trois fois pendant cinq minutes, chacune avec 3 à 5 millilitres d’eau ultrapure. Ensuite, déshydratez les échantillons dans une série croissante de concentrations d’alcool éthylique glacé avec 15 minutes par solution d’alcool éthylique. Utilisez un sécheur à points critiques pour sécher correctement l’échantillon. Positionnez soigneusement l’échantillon sur un support d’échantillon à l’aide d’un autocollant en carbone et visualisez les échantillons de plexus choroïde à l’aide d’un MEB.