Visualisation du plexus choroïde du cerveau d’une souris à l’aide de la microscopie électronique à balayage
JoVE Encyclopedia of Experiments
Neurosciences
0 vues • 2:23 min • June 17th, 2025
Prélever le plexus choroïde d’un cerveau de souris dans un panier à échantillons.
Le tissu, situé à l’intérieur des ventricules cérébraux, contient une couche de cellules épithéliales comportant des microvillosités sur leur surface apicale.
Incuber le tissu dans une solution fixatrice pour préserver son architecture cellulaire.
Laver avec un tampon pour éliminer l’excès de fixateur et stabiliser le pH.
Incuber le tissu avec du tétroxyde d’osmium qui se lie aux lipides de la membrane cellulaire, préservant ainsi la stabilité de la membrane, puis rincez l’excès de réactif.
Déshydratez les tissus en augmentant les concentrations d’alcool pour éviter la distorsion des tissus pendant l’imagerie.
Séchez le tissu, fixez-le sur un support d’échantillon recouvert de carbone, puis enduisez-le d’une couche de platine conductrice.
À l’aide de la microscopie électronique à balayage, focalisez un faisceau d’électrons sur la surface. La couche de platine dissipe les électrons, empêchant l’accumulation de charge et minimisant les artefacts d’imagerie.
Un détecteur capture les électrons rétrodiffusés à partir de la surface, produisant une image du tissu présentant des cellules épithéliales avec des microvillosités.
Pour effectuer la préparation de l’échantillon pour le MEB, transférez le plexus choroïde fraîchement isolé dans une solution de fixation fraîchement préparée et incubez pendant la nuit à 4 degrés Celsius. Une fois cela fait, lavez l’échantillon trois fois à l’aide de 3 à 5 millilitres de tampon de cacodylate de sodium de 0,1 molaire pendant cinq minutes chacun.
Post-fixer les échantillons dans 3 à 5 millilitres de tétroxyde d’osmium à 2 % dans un tampon de cacodylate de sodium à 0,1 molaire pendant 30 minutes. Ensuite, lavez les échantillons trois fois pendant cinq minutes, chacune avec 3 à 5 millilitres d’eau ultrapure. Ensuite, déshydratez les échantillons dans une série croissante de concentrations d’alcool éthylique glacé avec 15 minutes par solution d’alcool éthylique. Utilisez un sécheur à points critiques pour sécher correctement l’échantillon. Positionnez soigneusement l’échantillon sur un support d’échantillon à l’aide d’un autocollant en carbone et visualisez les échantillons de plexus choroïde à l’aide d’un MEB.
Aperçu
Cet article décrit un protocole de microdissection et de visualisation par microscopie électronique à balayage (MEB) en montage complet du plexus choroïde de la souris. Cette méthode permet une imagerie à haute résolution de la couche épithéliale des cellules tissulaires et de leurs microvillosités, offrant ainsi des informations structurales sur cette région cérébrale spécialisée.
Composantes clés de l'étude
Domaine scientifique
- Neurosciences
- Microscopie électronique
- Préparation des tissus
Contexte
- Le plexus choroïde est situé dans les ventricules cérébraux et est composé de cellules épithéliales dotées de microvillosités apicales.
- Une visualisation détaillée de ces structures est essentielle pour comprendre leur fonction et leur pathologie.
- La microscopie électronique à balayage (MEB) permet une imagerie de surface à haute résolution, ce qui la rend adaptée à l'étude des microvillosités et de l'architecture cellulaire.
- Une préparation adéquate des échantillons est cruciale pour préserver la morphologie tissulaire et éviter les artefacts d'imagerie.
Objectif de l'étude
- Démontrer un protocole fiable pour l'isolement et la préparation du tissu du plexus choroïde de souris en vue d'une analyse en microscopie électronique à balayage (MEB).
- Visualiser les caractéristiques ultrastructurales des cellules épithéliales du plexus choroïde, en particulier leurs microvillosités.
- Fournir un guide étape par étape aux chercheurs intéressés par l'imagerie en MEB de tissus cérébraux délicats.
Méthodes utilisées
- Microdissection du plexus choroïde des ventricules cérébraux de souris.
- Fixation du tissu dans une solution fixative pendant une nuit à 4 °C.
- Lavages au tampon pour éliminer l'excès de fixatif et stabiliser le pH.
- Post-fixation avec du tétraoxyde d'osmium afin de préserver les lipides membranaires.
- Déshydratation au moyen d'une série progressive d'alcool éthylique glacé à concentrations croissantes.
- Séchage au point critique pour éviter toute déformation tissulaire.
- Montage sur des supports d'échantillons revêtus de carbone et dépôt d'une couche conductrice de platine.
- Imagerie par microscopie électronique à balayage pour capturer les structures de surface détaillées.
Résultats principaux
- L'imagerie par MEB a révélé des cellules épithéliales bien préservées, présentant des microvillosités marquées à la surface du plexus choroïde.
- Le revêtement en platine a minimisé les phénomènes de charge et les artefacts d'imagerie, produisant des images de haute qualité.
- Le protocole a préservé l'intégrité tissulaire et l'architecture cellulaire tout au long de la préparation et de l'imagerie.
- Une visualisation détaillée des microvillosités et des surfaces cellulaires a été obtenue.
Conclusions
- Ce protocole permet une préparation fiable et l'imagerie en MEB de tissus du plexus choroïde de souris.
- La méthode préserve des détails structuraux fins, tels que les microvillosités, essentiels aux études morphologiques.
- Il constitue une ressource précieuse pour les chercheurs étudiant les tissus des barrières hémato-encéphaliques et leur ultrastructure.
Questions fréquemment posées
Pertinence industrielle pour les cadres
La visualisation haute résolution du plexus choroïde de la souris à l'aide de la microscopie électronique à balayage (SEM) permet une évaluation détaillée de l'architecture des cellules épithéliales et des microvillosités, soutenant ainsi les études mécanistiques des tissus de la barrière hémato-encéphalique. Cette capacité est essentielle pour les équipes de découverte précoce cherchant à clarifier la morphologie spécifique aux tissus et à réduire les risques liés aux hypothèses biologiques dans les pipelines de neuropharmacie. Une imagerie ultrastructurale fiable informe la validation des cibles et la recherche translationnelle en fournissant des références morphologiques quantitatives.
Applications stratégiques en recherche et développement en biopharmaceutique
Début de la découverte et validation de la cible
- Permet une caractérisation morphologique précise des cellules épithéliales du plexus choroïde et des microvillosités.
- Facilite la détection des risques biologiques en confirmant l'intégrité du tissu et l'architecture cellulaire.
- Fournit des références structurales pour évaluer les modèles de maladies et l'engagement des cibles.
Développement de tests et criblage
- Facilite la préparation d'échantillons tissulaires validés pour des flux de travail d'imagerie en aval.
- Garantit la reproductibilité et la standardisation du traitement des échantillons et des résultats d'imagerie.
- Fournit des données quantitatives sur la morphologie de surface destinées à une analyse comparative.
Recherche translationnelle et préclinique
- Corrèle les observations morphologiques avec des modèles de barrière hémato-encéphalique pertinents pour la maladie.
- Permet une continuité entre l'imagerie de découverte et la validation tissulaire préclinique.
- Facilite un développement adapté au risque en fournissant des preuves ultrastructurales de la santé du tissu.
Intégration du pipeline et du flux de travail
Ce protocole fondé sur la MEB s'intègre à la continuité découverte-préclinique en fournissant des données morphologiques solides pour le test d'hypothèses et la validation de modèles.
- Biologie de la découverte : Confirme les caractéristiques cellulaires et subcellulaires essentielles aux études mécanistiques.
- Écrantage : Standardise les résultats d'imagerie pour permettre la comparaison entre différentes conditions.
- Analytique : Génère des images haute résolution permettant une évaluation quantitative de la densité des microvillosités et de l'intégrité épithéliale.
- Recherche translationnelle : Relie les données morphologiques de la recherche fondamentale à la modélisation des maladies.
- Réutilisation en entreprise : Établit un protocole d'imagerie reproductible applicable à l'ensemble des projets en neuropharmaceutique.
Impact opérationnel et organisationnel
- Valeur scientifique : Accroît la confiance prédictive dans la validation des cibles basée sur les tissus.
- Valeur opérationnelle : Fournit des protocoles d'imagerie standardisés et reproductibles pour une adoption à l'échelle de l'entreprise.
- Valeur stratégique : Réduit l'ambiguïté mécanistique et soutient des décisions éclairées de poursuite ou d'abandon.
- Impact sur le portefeuille : Permet une priorisation ajustée au risque des actifs en neuropharmacie fondée sur des données morphologiques solides.
Considérations relatives à la mise en œuvre
- Nécessite une expertise en microdissection des tissus et en préparation des échantillons pour la microscopie électronique.
- Exige un accès à un équipement de MEB et à une infrastructure de séchage au point critique.
- Implique une standardisation interéquipes des protocoles de fixation, de déshydratation et de métallisation.
- Une adaptation peut être nécessaire selon les régions cérébrales ou les modèles de maladie.
- L'intégrité de l'échantillon et la qualité des images dépendent d'une exécution précise de chaque étape de préparation.
F.A.Q. sur la bio-industrie pharmaceutique
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Dernière mise à jour : 22 août 2026