Développement d’un réseau neuronal issu d’une micro-ingénierie tissulaire à l’aide d’une micro-colonne à base d’hydrogel

Commencez par un plat contenant une micro-colonne. La micro-colonne est dotée d’une enveloppe extérieure en hydrogel et d’une matrice extracellulaire, ou noyau ECM.

Ajoutez des gouttes de milieu de culture dans le même plat.

Transférez les agrégats de cellules neuronales dans la boîte, puis placez-les dans l’une des gouttelettes moyennes.

Observez au stéréomicroscope et insérez les agrégats cellulaires aux deux extrémités de la microcolonne.

Ensuite, transférez la micro-colonne ensemencée dans le milieu pour la viabilité cellulaire.

Incuber pour permettre la fixation de la cellule à l’ECM.

À l’aide du stéréomicroscope, confirmez l’attachement des cellules. Ensuite, ajoutez un milieu de culture pour couvrir le plat et incuber.

Les neurones attachés commencent à étendre leurs axones par le biais de l’ECM.

Remplacez régulièrement le demi-milieu par un milieu frais pour maintenir les niveaux de nutriments.

Au fil du temps, les axones se développent et s’étendent sur toute la longueur de la micro-colonne, formant des réseaux neuronaux.

Le réseau neuronal développé est prêt à reconstruire les circuits neuronaux endommagés.

Procéder à l’ensemencement cellulaire immédiatement après l’incubation. Transférez environ 10 à 20 microlitres de milieu de culture dans deux zones libres dans les boîtes de Pétri contenant les micro-colonnes. À l’aide d’une micropipette, collectez les agrégats neuronaux individuellement et transférez-les dans la boîte de Pétri contenant les constructions. Déplacez les agrégats à l’aide d’une pince dans l’un des petits bassins de milieu de culture pour préserver la santé cellulaire.

Lors de l’observation au stéréomicroscope, utilisez une pince pour insérer un agrégat à une extrémité des micro-colonnes pour les micro-TEN unidirectionnels ou à chaque extrémité pour une architecture bidirectionnelle. Ensuite, déplacez la micro-colonne ensemencée vers l’autre petit bassin de milieu de culture pour éviter la déshydratation et préserver la santé globale. Lorsque toutes les micro-colonnes ont été chargées, incuber à 37 degrés Celsius et 5 % de dioxyde de carbone pendant 45 minutes pour permettre aux agrégats d’adhérer à l’ECM.

Après l’incubation, vérifiez que les agrégats restent aux extrémités des micro-colonnes, à l’aide du stéréomicroscope. Enfin, inonder soigneusement les boîtes de Pétri contenant les micro-TENN avec du milieu de culture à l’aide d’une pipette. Placez les plats dans un incubateur à 37 degrés Celsius et 5 % de dioxyde de carbone pour une culture à long terme.