Name: Une description visuelle de la dissection de la vascularisation cérébrale et de surface associées Méninges et le plexus choroïde du cerveau de rat (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-11-14T12:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 31 s
Description: Découvrez la dissection de la vascularisation cérébrale de surface et du plexus choroïde chez le rat. Cette méthode permet d'étudier les méninges et leur rôle dans la dynamique du liquide céphalo-rachidien.

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Ce travail a été financé par NCTR / FDA.

Bien que non représenté dans la vidéo, les rats ont d&#39;abord reçu une surdose de 300 mg / kg de pentobarbital, résultant en anesthésie en moins de 3 min, puis tués par décapitation. Leurs cerveaux ont ensuite été rapidement mais soigneusement retirée du crâne et refroidi dans la glace froide saline normale pendant 5 min. Il est important de laisser refroidir le cerveau de ce laps de temps avant la dissection de la MAV de sorte que la MAV peut être séparée de la surface du cortex (couche supérieure de I). Le cerveau a ensuite été placé dans le fond d&#39;un plat en verre de Pétri reposant sur la glace qui était plein (1 cm de profondeur) des glacé solution saline normale ou de sodium 0,1 M de tampon phosphate salin pH = 7,4. Toute la dissection se fait avec le cerveau pour la plupart plongés dans une solution saline. 1. Retrait de la glande pinéale <ol><li> Placer le haut côté dorsal du cerveau (par rapport au fond de la boîte de Pétri). La glande pinéale est située dans la région la plus caudale ventrale entre les deux hémisphères juste rostrale à til cervelet (évidement pinéale), et il est juste en dessous ou à la surface des méninges au cours de la colliculi. Retirer la glande pinéale de la première utilisation de deux petites pinces à bout courbé. Il est de couleur rose comme le cortex, mais est souvent entouré de restes de sang et le système vasculaire résiduel de l&#39;élimination du cerveau. </li></ol> 2. Suppression de la MAV <ol><li> Retournez le cerveau sur &quot;upside down&quot; et de séparer l&#39;artère vertébrale, les petites artères et des méninges portant sur la protubérance du système vasculaire des méninges et du cerveau antérieur. Suppression de la MAV cerveau antérieur est alors démarré. Il est important de commencer ventralement dans le processus de dissection. Les grandes artères majeures du cercle de Willis, artères cérébrales moyennes (MCA) et les artères antérieures sont les plus forts et servir de «échafaudage» par lequel les petites artères et artérioles superficielles de la pie-mère membrane peut alors être retiré du cortex et le reste des méninges. Voir toutes les évaluations par Scremin 7 pour mminerai de représentations visuelles et les détails de la vascularisation cérébrale. surface </li><li> À commencer par les deux hémisphères, utilisez la pince petites pointes recourbées à couper l&#39;artère communicante postérieure juste en arrière de la jonction de la carotide interne. Ainsi, en séparant les arbres plus antérieure et postérieure des artères du cerveau antérieur. Répétez le même processus pour l&#39;hémisphère controlatéral. </li><li> Saisir le MCA et l&#39;artère interventriculaire antérieure avec la pince, tirer doucement dans une direction antérieure-dorsale de telle sorte que la MAV couvrant le cortex antérieur ventral (piriforme, tubercule olfactif) est soulevée au-dessus et autour de l&#39;appareil olfactif. Cela supprime une grande partie de la MAV couvrant le cortex antérieur (cingulaire et orbital). </li><li> Tournez le cerveau à un angle de 45 à 90 ° vers la boîte de Pétri. Les latéraux, les régions plus antérieures de la MAV entourant les régions corticales latérales (granulaire insulaire, somatosensoriel secondaire et le cortex auditif) peuvent être libérés à partir du cortex en saisissant le MCA et associée arters et en tirant doucement le long de la face dorsale du cortex. Le cas échéant, les extrémités de la pince peut être utilisée pour soulever et libérer les artères principales du cortex pendant la dissection. </li><li> Maintenant, enlevez les régions plus postérieures latérales de la MAV. (Remarque: il est préférable de passer d&#39;un hémisphère à l&#39;autre au cours de ce processus de récolte pour s&#39;assurer que le MAV reste froid et hydratée. Par ailleurs, si la résistance à libérer la MAV à partir du cortex est rencontré sur un commutateur hémisphère à l&#39;hémisphère controlatéral temporairement puis revenir à l&#39;hémisphère d&#39;origine plus tard.) </li><li> Pour supprimer les régions les plus dorsales de la MAV autour de la somato-sensoriel primaire et le cortex moteur tourner jusqu&#39;à la face dorsale du cerveau (par rapport au fond de la boîte de Pétri). Enfin à libérer la MAV de cerveau, utiliser les extrémités de la pince le long du sinus sagittal. Cette partie de la MAV récoltées peuvent être soit conservées temporairement dans une solution saline glacée jusqu&#39;à ce que les tests et l&#39;analyse ou congelés pour un traitement ultérieur. Souventla MAV couvrant les régions les plus postérieures / caudale du cortex entorhinal (cortex auditifs, visuels et la plus caudale) reste attaché au cortex. Son retrait est indiqué plus loin dans la vidéo lorsque la MAV entre le cortex rétrosplénial et recouvrant les colliculi sont disséqués. </li></ol> 3. Le retrait du plexus choroïde <ol><li> Placez le côté dorsal du cerveau et maintenir en place avec des pinces plus grandes Pousser la pince vers le bas les petits travers la ligne médiane entre les deux hémisphères, puis utilisez les extrémités pour percer à travers le corps calleux cortex et corpus (≈ -3,3 mm à partir du bregma) dans le haut de la ligne médiane de l&#39;hippocampe. </li><li> Utilisez la pince pour tirer le cortex avec calleux loin de l&#39;hippocampe dorsal et du septum, ce qui expose la plupart du ventricule latéral. Le plexus choroïde peut être localisé et identifié par la ligne ondulée rouge délimitant la grande artère qui passe sa longueur. Utiliser les deux extrémités de la pince pour soulever les parois latérales de la troisième ventricle et l&#39;agrandir à l&#39;extrémité la plus caudale (≈ -4,3 mm du bregma 8). </li><li> À l&#39;aide des petites pinces, tirer cette extrémité du plexus choroïde libre. Ensuite, allez à la région très antérieure entre le septum et du noyau caudé / putamen (mesure la plus rostrale, ≈ 1,6 mm de bregma) et avec la pince agrandir cette section du ventricule et tirez sur le plexus choroïde libre. Effectuez la même procédure sur l&#39;hémisphère controlatéral pour obtenir le deuxième choroïde plexus restante. Encore une fois ce tissu peut être soit conservées temporairement dans une solution saline glacée jusqu&#39;à ce que les tests et l&#39;analyse ou congelés pour un traitement ultérieur. </li></ol> 4. Suppression de la MAV restant dans le ventricule 3 ème Recouvrant le thalamus et le colliculi ainsi que celle sur les régions plus caudal de l&#39;Cortex y compris rétrosplénial, Cortex auditif et visuel <ol><li> Retirer l&#39;hippocampe ensemble des deux hémisphères exposant la MAV sur le thalamus et colliculi. La suppression descette partie de la MAV est beaucoup moins difficile que la suppression de la MAV sur le cortex. </li><li> Tirez cette partie de la MAV libre en saisissant la plus grande vascularisation recouvrant la partie antérieure du thalamus et en tirant doucement caudale. Ce système vasculaire est connecté au réseau colliculaire précité et irrigue l&#39;hippocampe dorsal et le réseau dorsal du thalamus. Retirez-le en bas et progressivement le réseau sans supracollicular jusqu&#39;à atteindre les dernières portions de la vascularisation cercle artériel caudal. À ce stade, plusieurs précautions doivent être prises pour éliminer tout reste de MAV ventral postérieur à la surface de la rétrosplénial granulaire, auditif primaire et cortex visuel. Comme avec l&#39;autre section de la MAV couvrant les parties plus antérieures du cortex, ce tissu peut être soit conservées temporairement dans une solution saline glacée jusqu&#39;à ce que les tests et l&#39;analyse ou congelés pour un traitement ultérieur. Tout reste MAV ventral postérieur récoltés avec cette deuxième partie MAV doit être retiré d&#39;und a ajouté à la section MAV disséqué premier couvrant le cortex si elles doivent être analysés séparément. </li></ol> 5. Les résultats représentatifs Lorsque la dissection est exécutée correctement, les tissus résultant VAC doit être en deux entités intactes pesant environ 35 à 45 mg au total. Le premier disséqué MAV qui entoure la plupart du cortex devrait peser environ 25 mg et la MAV couvrant le thalamus, colliculi et cortex occipital doit peser environ 15 mg. Il devrait être légèrement rosâtre en couleurs à partir du sang résiduel dans le système vasculaire. Le bilatérale du plexus choroïde récolté doit être dans deux échantillons de tissus intacts pesant chacun avec 1 à 2 mg. Bien que l&#39;excès d&#39;eau peut être retiré de la MAV avant le stockage ou le traitement avec du papier tel que celui utilisé dans le nettoyage de la lentille, afin d&#39;éviter la perte de tissu ce n&#39;est pas une bonne idée d&#39;enlever l&#39;excès d&#39;eau de la choroïde plexus disséqué. Figure 1 a été généré pour comparant profil d&#39;expression<html> es dans trois régions (striatum, le cortex pariétal et MAV) dans des conditions de contrôle en utilisant Agilent-014879 Whole Genome Rat 4x44K 60mer réseaux d&#39;oligonucléotides (G4131F, Agilent Technologies, Palo Alto, en Californie, NCBI GEO Accession # GPL7294; GSE23093 et ​​GSE29733 qui sont présents à le dépôt NCBI GEO). Les deux parcelles dans la figure graphiquement montrer l&#39;expression en 1) le striatum par rapport au cortex pariétal et 2) la MAV par rapport au cortex pariétal. Il est clair que le striatum et du cortex pariétal sont beaucoup plus étroitement liés les uns aux autres que la MAV. Les données comparant le plexus choroïde avec le MAV sera présenté dans une prochaine publication. Cependant, il est probable que les profils d&#39;expression de la MAV et du plexus choroïde sont plus étroitement liés les uns aux autres qu&#39;ils ne le sont dans le striatum et du cortex pariétal. Figure 2 montre la réponse expression différentielle de gènes à l&#39;hyperthermie (EIH) par rapport à AMPH MAV par rapport à contrôler et l&#39;autre. contenu &quot;&gt; L&#39;expression des gènes de plus de 11.000 gènes avec des symboles officiels de gènes NCBI dans MAV d&#39;animaux témoins ont été comparées à celles enregistrées dans le striatum et du cortex pariétal. Plus de 2000 de ces gènes avaient une expression de 2,5 fois ou plus différant par la MAV par rapport aux deux neurones riches en tissus, et 550 gènes avaient une différence de 10 fois plus grande dans l&#39;expression. Un peu plus de 40% (253) d&#39;entre eux étaient des gènes avec une expression diminuée de 10 fois ou plus dans VAC et étaient liés à la fonction neuronale. Il y avait 343 gènes ayant une expression plus de 10 fois ou plus par rapport à MAV cortex pariétal et le striatum. Cette liste de gènes a été utilisé comme un point de départ permettant de déterminer les gènes avec un enrichissement très élevé dans la MAV. Tableau 1 énumère les gènes présentant supérieure à l&#39;expression de 15 fois par rapport à MAV cortex pariétal et le striatum et les classe par rapport à la fonction. Beaucoup de ces gènes étaient liés au système vasculaire et / ou le système immunitaire. Ces Types de gènes doit être enrichi à environ 5 - à 10 - fois à cause de l&#39;augmentation de la vascularisation artérielle elle-même et présente en son sein. Cependant, même pour les gènes ayant des fonctions générales connues vasculaires, soit une augmentation supérieure à 15 fois indique un enrichissement en MAV. Il y avait aussi nombre de gènes avec de très grandes variations de pliage qui sont: 1) les protéines de la matrice extracellulaire (pas spécifiquement lié au système vasculaire), 2) les transporteurs de soluté et 3) métabolisme des lipides et l&#39;acide rétinoïque. En outre, la croissance de quelques-uns et gène de différenciation ou de facteurs de transcription ont été trouvés. <img alt="Figure 1" src="/files/ftp_upload/4285/4285fig1.jpg" /> Figure 1. Comparaison de l&#39;expression des gènes dans MAV avec Cortex pariétal et le striatum. Graphique Volcano comparant les niveaux d&#39;expression des gènes de la pariétal et le cortex strié (tracé du haut) et le cortex pariétal et MAV (tracé du bas). Les symboles rouges indiquent les gènes qui sont significativement différentes betwefr régions à p &lt;0,05 et ont une expression différentielle de 1,5 fois ou plus entre les régions. Les symboles noirs représentent des gènes qui ne sont pas significativement différentes entre les régions (p&gt; 0,05) et moins de 1,5 fois différentes dans l&#39;expression. Les symboles indiquent les gènes rose avec une différence de moins de 1,5 fois de l&#39;expression, mais statistiquement significativement différentes à p &lt;0,05. Les symboles jaunes d&#39;identifier les gènes qui ont une expression de 1,5 fois ou plus, mais ce changement n&#39;est pas statistiquement significatif à p &lt;0,05. Abréviations Amphétamine AMPH EIH environnement hyperthermie induite Méninges VAC et associé vasculaire cérébral Norm normothermique contrôle <img alt="Figure 2" src="/files/ftp_upload/4285/4285fig2.jpg" /> Figure 2. Parcelles Volcano effets de l&#39;hyperthermie et de l&#39;amphétamine sur l&#39;expression des gènes dans VAC. Comparantles niveaux d&#39;expression des gènes dans la MAV après saline, EIH ou AMPH au point 3 h de temps. Les symboles rouges indiquent les gènes qui sont réputés être très différents, tandis que les points noirs / cercles représentent des gènes qui ne sont pas significativement différentes entre les régions. Une analyse statistique supplémentaire a été utilisé pour vérifier que l&#39;expression des différences entre le contrôle et les traitements étaient en fait statistiquement significative. <table border="1"><tbody><tr><td fo:width="1in"> Expression MAV cérébrale Expression </td><td fo:width="4.5in"> NCBI Gene Symboles </td><td fo:width="1.5in"> Spécificité tissu ou d&#39;une fonction déclarée (s) </td></tr><tr><td> &gt; 50 fois </td><td> ANXA2 a, Col8a1, Des, ESM1, Glycam1, Kl a, Lect1, Lepr, Lum, MYH11, OGN, Tagln, Thbs2, TNNT2 </td><td> Vascularisation et coeur </td></tr><tr><td> &gt; 50 fois </td><td> CCL19, CD74 a, DEFB1, Lrrc21, Mgl1, MRC1, Msln, Pl.a2g5, PRG4, RT1-Bb, RT1-Da </td><td> Système immunitaire </td></tr><tr><td> &gt; 50 fois </td><td> ADH1, Aebp1, Aldh1a2, Gstm2 </td><td> L&#39;acide rétinoïque et traitement des lipides </td></tr><tr><td> &gt; 50 fois </td><td> Cdh1, COL3A1, COL1A2, Colec12, Cpxm2, Cpz, DCN, Emp3, GPC3, Nupr1, Omd, Pcolce Slamf9, Tmem27, Tspan8 </td><td> Matrice extracellulaire jonctions cellule-cellule et </td></tr><tr><td> &gt; 50 fois </td><td> AQP1, Asgr1, Kcnj13, Slc5a5, Slc6a13, Slc6a20, Slc22a6, Sned1, Ttr </td><td> Ion &amp; homéostasie Solute </td></tr><tr><td> &gt; 50 fois </td><td> AlX3, Cdkn1c, FOXC2, IGFBP2, Ifitm1, Ifitm2, Nkx6-1, OSR1, Prrx2, SFRP1, TBX15. Upk1b, Wisp2, Wnt6 </td><td> Développement et régulation de la transcription </td></tr><tr><td> &gt; 50 fois </td><td> Gpha2, Mfap5, Mpzl2 Plac8, Scgb1c1, Sostdc1, Steap1 </td><td> Inconnu &amp; Divers </td></tr><tr><td> De 30 à 50 fois </td&gt; <td> ANXA1 a, Angpt2, C6 a, GJB2, Ptgis, Thbd, TIMP1 </td><td> Vascularisation et coeur </td></tr><tr><td> De 30 à 50 fois </td><td> Casp12, CCL2 CCR1, Cd14, CXCL10, Ifitm3, Klra5, Lgals1, Lgals3, Ms4a4a, Ms4a7, Plscr1, SPP1, Xcl1 </td><td> Système immunitaire </td></tr><tr><td> De 30 à 50 fois </td><td> COL6A3, Cpxm1, Efemp1, Fmod, Mgp, NID2 </td><td> Matrice extracellulaire jonctions cellule-cellule et </td></tr><tr><td> De 30 à 50 fois </td><td> Cp, CUBN, GCGR, S100A6, Scn7a, Sct, Slc4a5, Slc16a11, Slco1a5 </td><td> Ion et l&#39;homéostasie Solute </td></tr><tr><td> De 30 à 50 fois </td><td> Cfd, Ch25h, Crabp2, Rarres2 </td><td> L&#39;acide rétinoïque et traitement des lipides </td></tr><tr><td> De 30 à 50 fois </td><td> BMP6, Casp12, DAB2 Folr1, IGF2, Msx1, Tbx18, TWIST1, Wnt5b </td><td> Développement et régulation de la transcription </td></tr><tr><td> De 30 à 50 fois </td><td> Cela3b, CLN6, C1qtnf7, Copz2, Dhrs7c, Gng11, Prss23, Srpx, Vim </td><td> Inconnu &amp; Divers </td></tr><tr><td> De 15 à 30 fois </td><td> Adm, Angpt1, Angptl2, BGN, un CKLF, CNN1, Cox8h, CTSK, F13a1, GJA5, Klf4, Lox, Lyz, Myl9, Procr, Pros1, RT1-Ba, Serpinb10, Serping1, Serpinf1, TGM2, TNMD, Trim63, Txnip un, Vamp5, Vtn </td><td> Vascularisation et coeur </td></tr><tr><td> De 15 à 30 fois </td><td> Ada a, BST2, Ccl6, CD40, CD68, CNTC, Dap, Faim3, Fkbp9, Fxyd5, FMO1, Glipr1, Ier3, Ifi47, Igsf6, Msc, NFATc4, RT1-Db1, Serpinb1a, TiR4, Tubb6 </td><td> Système immunitaire </td></tr><tr><td> De 15 à 30 fois </td><td> Adamtsl4, COL1A1, CRB3, Dpt, Egfl3, FBN1, FBLN1, FBLN5, Fn1, ITGB4, LAMA2, Lgals3bp, LOXL1, Mfap4, MMP14, Mmp23, PPIC, Serpinh1, TIMP3 </td><td> Matrice extracellulaire jonctions cellule-cellule et </td></tr><tr><td> De 15 à 30 fois </td><td> Cybrd1, Selenbp1, Slc2a4, Slc9a2, Slc13a3, Slc16a4, Slc22a8, Slc22a18 </td><td> Ion et l&#39;homéostasie Solute </td></tr><tr><td> De 15 à 30 fois </td><td> AGPAT2, Bdh2, Cyp26b1, Lpar3, Ltb4dh, OLR1, PON3, RBP1, RBP4 </td><td> L&#39;acide rétinoïque et traitement des lipides </td></tr><tr><td> De 15 à 30 fois </td><td> ATF3, Dkk4, Eya2, Ifitm7, Ltbp1, Mustn1, Nr2f2, ptrf, Sphk1, TGFBI, Tcea3 Tcfap2b, Wnt2b, WNT5A, ZIC1 </td><td> Développement et régulation de la transcription </td></tr><tr><td> De 15 à 30 fois </td><td> Adamts12, Adamtsl3, C1r, Crispld2, Crygn, CYP1B1, dse, ENPEP, Enpp2, Epn3, FLNA, FMO3, GNMT, GPRC5C, HSPB1, KLC3, Krt18, Krt19, Mdk, Mesp1, Ms4a6a, Ms4a6b, Ms4a11, Net1, Pdlim2, Phactr2, PLP2, Ppp1r3b, Pqlc3, Rin3, Spag11, SULT1A1, Tmem106a, Wfikkn2 </td><td> Inconnu &amp; Divers </td></tr></tbody></table> * Les gènes inclus dans le tableau doit être à la fois l&#39;expression de plus de 15 fois supérieure dans le striatum et Parietal cortex et de 5 fois au-dessus des niveaux de fond. Le plus faible des deux ratios (MAV / striatum ou VAC / cortex pariétal) pour chaque gène a été utilisé pour le regroupement. un des gènes se trouvent dans les cellules endothéliales, mais aussi sans doute jouer un rôle important dans la médiation des réponses immunitaires. Tableau 1. Gènes avec une * 15 fois ou plus l&#39;expression accrue de MAV par rapport à striatum et du cortex pariétal.

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</ol>

Nous n&#39;avons rien à déclarer. Le travail présenté ici ne représentent pas nécessairement les vues de la Food and Drug Administration.

Aspects techniques de la MAV et dissection du plexus choroïde Il est essentiel lors de la dissection de la MAV d&#39;avoir le cerveau &quot;submergé&quot; la plupart du temps dans le sérum physiologique ou de sodium tampon phosphate salin. Permettre à la MAV et le cortex se déshydrater pendant la dissection se traduira par la MAV adhérant étroitement à I. couche corticale Cela permettra d&#39;accroître la quantité de tissu cortical récolté avec la MAV et / ou le résultat de l&#39;incapacité de supprimer ces sections VAC adhérents du cortex. En outre, la patience est nécessaire lors de la dissection. Encore une fois, si l&#39;on se heurte à une certaine résistance au retrait de la MAV à partir du cortex dans un hémisphère lors de la dissection, passer à l&#39;autre hémisphère et revenir plus tard sur le côté où la résistance a été rencontrée. Cette méthode prend un peu de pratique de la perfection et nécessite environ 5 à 15 &quot;pratique&quot; dissections avant une récolte constante uniforme du tissu MAV est atteint. Procédé de démarrage et de la dissection removal de la MAV au cercle artériel à la base du cerveau facilite l&#39;élimination des méninges en utilisant le système vasculaire plus grande que le soutien &quot;échafaudage&quot;. Une grande partie de l&#39;origine du sang dans les vaisseaux MAV après sacrifice doit être éjecté au cours de la dissection, et moins de 5% de l&#39;ARN à partir de la récolte MAV doit être d&#39;origine sanguine. Il est possible de supprimer pratiquement tout le sang de l&#39;animal par perfusion avec 50 à 70 ml d&#39;une solution saline, en utilisant les techniques histologiques, avant la décapitation et le cerveau enlèvement. Cependant, il est alors beaucoup plus difficile de visualiser les tissus VAC pendant la dissection. Les trois sources les plus probables de la «contamination» des tissus VAC sont la glande pinéale, je couche corticale résiduelle des tissus et des tissus bulbe olfactif, mais il est également possible d&#39;obtenir des tissus de la glande pituitaire dans la préparation. Contamination pinéale dans la MAV est détectée par la MAV contenant un cycle de 1 à 2 mm de diamètre sphère qui est colorée en rouge foncé. La fonction principalede la glande pinéale est normalement considéré comme complètement différente de la MAV. Sa fonction principale est de produire la mélatonine, qui réglemente certains aspects du rythme circadien 9, et dans lipoxygénation 10 de précurseurs lipidiques. Bien que le gène Lox, qui régule l&#39;activité lipoxygénase, a été pensé pour être présents chez les adultes, principalement dans la glande pinéale 10, nos résultats indiquent qu&#39;il est également toujours présent à des niveaux significatifs dans MAV. Résiduelles corticales ou olfactives résultats de contamination ampoule dans la rosée toile d&#39;araignée tissu MAV ayant des 1 à 2 mm tissus plus denses qui sont beaucoup plus pâle en couleur enfermé dans celui-ci. Ce peut être repéré par &quot;flottant&quot; de la MAV sur la surface du tampon, et ensuite l&#39;élimination des tissus plus lourds corticales ou ampoule en utilisant les deux pince à disséquer. Si la contamination de la MAV de la couche corticale I tissu, un tissu hypothalamique ou la glande pinéale est présent, plusieurs gènes auront une imporexpression significativement supérieure à ce qui est normalement présent dans la «propreté» de dissection. La contamination de la MAV avec la glande pinéale se traduira par une expression plus élevée de arylalkylamine N-acétyltransférase (AANAT) qui est nécessaire pour la synthèse de la mélatonine. Malheureusement, si la contamination se produit lors de la dissection pinéale MAV, les niveaux de Lox dans MAV ne pourra pas être déterminée avec précision. La contamination de la MAV avec le tissu cortical se traduira par une expression plus élevée de neurones spécifiques des gènes tels que hippocalcin (HPCA), parvalbumine (Pvalb) et / ou le récepteur pentraxine neuronale (Nptxr). La contamination des MAV avec le tissu hypothalamique se traduira par l&#39;expression supérieure de 1 &#39;hormone de croissance (GH1), proopiomélanocortine (POMC). Dans le cas où une contamination existe dans les tissus récoltés, la plupart de ces gènes peuvent être identifiés et non utilisées dans l&#39;analyse d&#39;expression génique. Ceci est particulièrement important pour les gènes présents dans la circulation blood qui peuvent encore être présents dans VAC ou du plexus choroïde. Interpretting données d&#39;expression génique à partir récolté MAV et du plexus choroïde La surface cérébrale (superficiel) avec système vasculaire méninges associés (MAV) et le plexus choroïde sont nécessaires pour la circulation sanguine cérébrale et le liquide céphalo-rachidien (LCR) homéostasie 4,11, 12, 13, 14, 15, 16, 17. La récolte tissu est adapté à l&#39;analyse biochimique et physiologique, et la MAV a été montré pour être sensibles aux dommages produits par l&#39;amphétamine et 1,2 hyperthermie par analyse de l&#39;expression génique. Ces résultats sont en rapport avec ce qui est également connu à propos de l&#39;hyperthermie sévère et l&#39;exposition aux amphétamines à la vascularisation du cerveau en général, 18,19,20. Des données cliniques humaines soutient la croyance que la vascularisation sous-dural est sensible aux dégâts provoqués par 21,22 amphétamine et de la méthamphétamine. En outre, les vascularisations majeures et mineures cérébraux inclus,compris ceux dans la couche pial des méninges qui sont récoltées dans VAC sont d&#39;un intérêt potentiellement élevé lorsqu&#39;ils enquêtent sur ​​les types de traumatisme crânien commotion 23,24 25. Le profil d&#39;expression génique de courant produit à partir de la MAV indique que la pie-mère et éventuellement les membranes méningées arachnoïdiennes peuvent jouer un rôle plus important que prévu dans la régulation de la composition du LCR. Dans le futur, par l&#39;utilisation de techniques de dissection microscope, il peut être possible de séparer davantage les tissus comprenant la MAV de sorte que les membranes et piales arachnoïde peut être séparé du présent système vasculaire artériel et éventuellement plus large de l&#39;autre. Cela permettra une meilleure interprétation de la fonction de chacun de ces 3 composantes de la MAV récolté.

<table border="1"><tbody><tr><td> Nom du réactif / équipement </td><td> Entreprise </td><td> Numéro de catalogue </td><td> Commentaires (optionnel) </td></tr><tr><td> Solution saline normale (9 grammes salins / 1 litre H 2 O) </td><td> Interne </td><td></td><td> Dissection tampon </td></tr><tr><td> 0,1 M pH 7,4 phosphate de sodium </td><td> Interne </td><td></td><td> Dissection tampon </td></tr><tr><td> Os Rongeurs </td><td> Roboz </td><td> RS-8300 </td><td> L&#39;enlèvement os du crâne </td></tr><tr><td> Pince-plié pointe (4 &quot;de long et 0,8 mm de large pourboire) </td><td> Roboz </td><td> RS-5135 ou RS-5137 </td><td> Pince à dissection </td></tr><tr><td> Pince-droite pointe (5,5 &quot;de long) </td><td> Roboz </td><td> RS-8124 ou RS-8104 </td><td> Pince à pansements pouce </td></tr></tbody></table>

une description visuelle de la dissection de la vascularisation cérébrale et de surface associées méninges et le plexus choroïde du cerveau de rat

A Visual Description of the Dissection of the Cerebral Surface Vasculature and Associated Meninges and the Choroid Plexus from Rat Brain

Cette présentation vidéo a été créé pour montrer une méthode de récolte des deux plus importantes structures fortement vascularisés, ne réside pas dans le cerveau proprement dit, que la fonction du cerveau antérieur soutien. Ils sont la surface cérébrale (superficielle) vasculaire ainsi que méninges associés (MAV) et la choroïde qui sont nécessaires pour le débit sanguin cérébral et le liquide céphalo-rachidien (LCR) l&#39;homéostasie du plexus. Le tissu prélevé est adapté à l&#39;analyse biochimique et physiologique, et la MAV a été montré pour être sensibles aux dommages produits par l&#39;amphétamine et 1,2 hyperthermie. En outre, les vascularisations cérébrales majeures et mineures récoltés dans MAV sont d&#39;un intérêt potentiellement élevé lors des enquêtes types commotion de traumatisme crânien. La MAV disséqué dans cette présentation consiste en la piale et une partie de la membrane arachnoïde (moins-mère) des méninges et du système vasculaire surface majeure et mineure cérébrale. La dissection du plexus choroïde est la structure qui se trouve dans le lateral ventricules comme décrit par Oldfield et McKinley 3,4,5,6. Les méthodes utilisées pour la récolte de ces deux tissus aussi faciliter la récolte du tissu cortical régionale dépourvue de méninges et plus vasculaire cérébral surface, et est compatible avec la récolte d&#39;autres tissus du cerveau comme le striatum, l&#39;hypothalamus, l&#39;hippocampe, etc La dissection des deux tissus prend 5 à 10 min au total. Les niveaux d&#39;expression génique pour la MAV disséqués et du plexus choroïde, comme représentés et décrits dans le présent document peut être trouvé à GSE23093 (MAV) et GSE29733 (plexus choroïde) dans le dépôt NCBI GEO. Ces données ont été, et est, utilisé pour aider à mieux comprendre le fonctionnement de la MAV et du plexus choroïde et de la façon dont les événements neurotoxiques tels que hyperthermie sévère et AMPH nuire à leur fonction.

Cette présentation vidéo montre une méthode de récolte des deux plus importantes structures hautement vasculaires qui soutiennent la fonction du cerveau antérieur. Ils sont la surface cérébrale (superficielle) vasculaire ainsi que méninges associés (MAV) et la choroïde qui sont nécessaires pour le débit sanguin cérébral et le liquide céphalo-rachidien (LCR) l&#39;homéostasie du plexus.

Une description visuelle de la dissection de la vascularisation cérébrale et de surface associées Méninges et le plexus choroïde du cerveau de rat

Cette présentation vidéo a été conçue pour présenter une méthode de prélèvement des deux structures hautement vascularisées les plus importantes ne résidant pas dans le cerveau...

L'objectif général de cette procédure est de disséquer efficacement et rapidement la couche externe et les parties arachnoïdiennes des méninges ainsi que le réseau vasculaire artériel associé, recouvrant la surface du cortex du cerveau antérieur et du mésencéphale, du thalamus et des corps calleux, tout en récoltant le plexus choroïde des ventricules latéraux. Cette opération s'effectue en deux étapes : premièrement, on retire la glande pinéale et on sépare les méninges et les arbres artériels adjacents au cerveau antérieur. Deuxièmement, on prélève soigneusement les artères et artérioles présentes sur la surface corticale, en commençant par le cercle artériel de Willis au niveau ventral, puis en progressant vers les surfaces corticales dorsales, de sorte que la couche externe et les membranes arachnoïdiennes résiduelles restent attachées au réseau vasculaire, en veillant à limiter au minimum la récolte des tissus corticaux adjacents.Ensuite, le cortex et les fibres commissurales sont disséqués pour les séparer du septum et de l'hippocampe, exposant ainsi les ventricules latéraux afin de permettre la récolte du plexus choroïde. Enfin, l'hippocampe est retiré, exposant le thalamus et les corps calleux du mésencéphale. Les méninges et les vaisseaux sanguins associés recouvrant cette région sont ensuite disséqués.En fin de compte, l'intégrité et la spécificité des méninges disséquées et de la vascularisation artérielle associée, ainsi que du plexus choroïde, peuvent être déterminées en comparant les profils d'expression génique de chacune de ces régions. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans les recherches portant sur la vascularisation soutenant la fonction cérébrale. Elle inclut des similitudes et des comparaisons, ainsi que des différences dans la fonction du plexus choroïde par rapport aux méninges et à leur vascularisation artérielle associée, en ce qui concerne le débit sanguin, la fonction du LCS, les atteintes neurotoxiques et les traumatismes cérébraux.Pour commencer ce protocole, placez immédiatement les cerveaux prélevés sur des rats juste après leur euthanasie dans une solution saline normale glacée pendant cinq minutes. Il est important de laisser refroidir le cerveau pendant cette durée avant la dissection, afin que les quatre méninges cérébrales et la vascularisation artérielle associée, ou MAV, puissent être séparées de la surface du cortex. Ensuite, placez le cerveau au fond d'une boîte de Pétri en verre posée sur de la glace, avec un centimètre de solution saline normale glacée ou de solution saline tamponnée au phosphate de sodium 0,1 molaire à un pH de 7,4.Toute dissection doit être effectuée avec le cerveau, en grande partie immergé dans du sérum physiologique. Pour commencer la dissection, placez le cerveau avec la face dorsale vers le haut dans la boîte de Pétri et repérez la glande pinéale, située dans la région ventrale la plus caudale entre les deux hémisphères. Elle se trouve juste rostralement au cervelet et juste en dessous, ou à la surface des méninges.Au-dessus des collines. Retirer la glande pinéale à l’aide de deux petites pinces à extrémité recourbée. Remarquer que la glande pinéale est de couleur rose, comme le cortex, mais qu’elle est souvent entourée de restes de sang et de vaisseaux sanguins résiduels provenant du retrait du cerveau.Ensuite, retourner le cerveau à l’envers dans la boîte de Pétri. Puis séparer l’artère vertébrale ainsi que les artères plus petites et les méninges recouvrant le pont des méninges et du système vasculaire du prosencéphale. Ensuite, commencer l’ablation du MAV.Il est important de commencer par la partie ventrale lors du processus de dissection, en s'orientant vers les artères principales du cercle de Willis, les artères cérébrales moyennes et les artères antérieures. Ensuite, en partant d'un hémisphère quelconque, utilisez une pince à extrémité recourbée de petite taille pour sectionner l'artère communicante postérieure juste en arrière de la jonction carotidienne interne, séparant ainsi les arbres artériels antérieur et postérieur du cerveau antérieur. Répétez ensuite le même processus pour l'hémisphère controlatéral.À présent, en maintenant l'artère cérébrale moyenne et l'artère antérieure avec la pince, tirer doucement vers l'avant et en direction dorsale afin que la membrane arachnoïdienne ventrale recouvrant le cortex antérieur soit soulevée par-dessus et autour du tractus olfactif. Cette manipulation permet d'ôter une grande partie de la membrane arachnoïdienne recouvrant le cortex antérieur. Tourner le cerveau selon un angle de 45 à 90 degrés par rapport à la boîte de Pétri, de sorte que les régions latérales et plus antérieures de la membrane arachnoïdienne entourant les régions corticales latérales puissent être dissociées du cortex ; saisir alors l'artère cérébrale moyenne et les artères associées, puis tirer doucement en direction dorsale le long du cortex.Si nécessaire, les extrémités de la pince peuvent être utilisées pour soulever et libérer les artères principales du cortex pendant la dissection. Retirez maintenant les régions latérales postérieures des VAM. Notez qu'il est préférable de passer d'un hémisphère à l'autre pendant ce processus de prélèvement afin de garantir que les VAM restent froides et hydratées ; changez également d'hémisphère si une résistance survient lors de la libération des VAM par rapport au cortex.Enfin, afin d'extraire les régions les plus dorsales de la MAV entourant le cortex somesthésique primaire et le cortex moteur, retourner le cerveau avec la face dorsale vers le haut pour détacher cette section du cerveau, en utilisant les extrémités de la pince le long du sinus sagittal. Ce fragment de MAV prélevé peut être conservé temporairement dans une solution saline glacée jusqu'à son utilisation pour les tests et l'analyse, ou congelé pour un traitement ultérieur. Fréquemment, la MAV recouvrant les régions corticales postérieures les plus profondes reste attachée.La suppression est illustrée dans une section ultérieure de cette vidéo. Pour retirer le plexus choroïde, placez d'abord le cerveau avec la face dorsale vers le haut et maintenez-le en place à l’aide de la pince plus grande. Ensuite, enfoncez la pince plus petite à travers la ligne médiane entre les hémisphères et utilisez ses extrémités pour percer le cortex et le corps calleux jusqu’au sommet de la ligne médiane de l’hippocampe.Ensuite, utilisez la pince pour tirer le cortex avec le corps calleux loin de l'hippocampe dorsal et du septum, exposant ainsi la majeure partie du ventricule latéral. Le plexus choroïde peut être localisé et identifié par la ligne rouge ondulée délimitant l'artère principale qui s'étend sur toute sa longueur. Utilisez les deux extrémités de la pince pour écarter les parois latérales du troisième ventricule et l'agrandir à son extrémité la plus caudale.Ensuite, à l’aide de la petite pince, tirez cet extrémité du plexus choroïde pour la détacher. Puis, utilisez la pince pour élargir la région très antérieure située entre le septum et la région du putamen caudé et détachez également le plexus choroïde à cette extrémité. Effectuez également la même procédure sur l’hémisphère controlatéral afin d’obtenir le second plexus choroïde restant.À nouveau, ce tissu peut être temporairement conservé sur de la glace, dans du sérum physiologique froid, ou congelé en vue d'un traitement ultérieur. Pour éliminer le MAV restant recouvrant les régions coddles postérieures du cortex, commencez par retirer entièrement l'hippocampe des deux hémisphères, exposant ainsi le MAV au-dessus du thalamus et des colliculus. Notez que le retrait de cette portion du MAV sera nettement moins difficile que son retrait du cortex pour le MAV restant.En saisissant la vascularisation plus importante recouvrant la partie antérieure du thalamus et en tirant délicatement vers le bas, on constate que cette vascularisation est reliée au réseau supracoronnal et vascularise le réseau du hippocampe dorsal et du thalamus dorsal. Tirer doucement vers le bas jusqu'à ce que le réseau supra soit libéré, permettant alors d'atteindre les dernières portions du cercle artériel coddle. À ce stade, une attention accrue doit être portée à l'élimination de toute MAV résiduelle située à la surface des cortex rétrolinéaires primaires, auditif et visuel.Tout MAV cortical ventral postérieur restant récolté avec cette deuxième section de MAV thalamique et du corps calleux doit être retiré et ajouté à la première section de MAV cortical disséquée, s'ils doivent être analysés séparément. Ensuite, afin de comparer les profils d'expression génique entre le striatum, le cortex pariétal et les régions MAV dans des conditions contrôles, une analyse d'expression génique peut être réalisée à l'aide de puces à ADN oligonucléotidiques Agilent 0 1 4 8 7 9 couvrant tout le génome du rat, quatre par 44 060 mer. Des détails supplémentaires concernant le traitement, la numérisation et le stockage initial des données sont disponibles dans Thomas et al.Lorsque la dissection est effectuée correctement, les tissus MAV résultants doivent former deux entités intactes pesant au total environ 35 à 45 milligrammes. Le MAV initialement disséqué, entourant la majeure partie du cortex, devrait peser environ 25 milligrammes, tandis que celui recouvrant le thalamus, les corps calleux et le cortex occipital devrait peser environ 15 milligrammes.Le tissu doit présenter une légère teinte rosée due au sang résiduel dans le réseau vasculaire. Le plexus choroïde bilatéral récolté doit se composer de deux échantillons tissulaires intacts, chacun pesant de un à deux milligrammes, comme illustré ici. Ici, nous observons une comparaison des profils d'expression génique dans le striatum, le cortex pariétal et le MAV dans des conditions témoins.Le graphique supérieur montre l'expression dans le striatum par rapport au cortex pariétal. Alors que le graphique inférieur montre l'expression dans le MAV par rapport au cortex pariétal, on observe que le striatum et le cortex pariétal sont beaucoup plus étroitement liés l'un à l'autre que le MAV. Ici, nous observons l'expression différentielle des gènes dans le MAV en réponse à l'hyperthermie par rapport au témoin, en réponse à l'amphétamine par rapport au témoin, et en conditions d'hyperthermie versus amphétamine.Enfin, ici, nous observons des gènes présentant une expression supérieure à 15 fois dans le MAV par rapport au cortex pariétal et au striatum, caractérisés par leur fonction. Plusieurs de ces gènes sont associés au système vasculaire et/ou au système immunitaire. D'autres gènes présentant des variations d'expression très importantes sont des protéines de la matrice extracellulaire, des transporteurs de sels, ainsi que des protéines impliquées dans le métabolisme des lipides et de l'acide rétinoïque.Lors de la réalisation de cette procédure, il est important de rester patient lors de la dissection de l'AMV. Il est également essentiel de maintenir le cerveau immergé dans une solution saline isotonique ou une solution saline tamponnée au phosphate pendant toute la durée de la dissection. En outre, il est conseillé de s'exercer à la dissection de l'AMV sur quatre ou cinq rats avant de prélever les tissus destinés à la génération de données expérimentales.

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Une description visuelle de la dissection de la vascularisation cérébrale et de surface associées Méninges et le plexus choroïde du cerveau de rat (Vidéo) | JoVE Journal

Une description visuelle de la dissection de la vascularisation cérébrale et de surface associées Méninges et le plexus choroïde du cerveau de rat

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