Une description visuelle de la dissection de la vascularisation cérébrale et de surface associées Méninges et le plexus choroïde du cerveau de rat

L’objectif global de cette procédure est de disséquer efficacement et rapidement les parties pelées et arachnoïdiennes des méninges et le système vasculaire artériel associé, recouvrant la surface du cortex du cerveau antérieur et du mésencéphale, du thalamus et des calli, ainsi que de prélever le plexus choroïde des ventricules latéraux. Ceci est accompli en enlevant d’abord la glande pinéale et en séparant les méninges et les arbres artériels dorlotés au cerveau antérieur. Deuxièmement, les artères et les artères de la surface corticale sont soigneusement retirées, en commençant par le cercle ventral de Willis, puis en passant aux surfaces corticales dorsales afin que le pelage et les membranes arachnoïdiennes restantes restent attachés au système vasculaire, en veillant à minimiser la récolte des tissus de surface corticale adjacents.

Ensuite, le cortex et les fibres commissurales sont disséqués loin du septum et de l’hippocampe, exposant les ventricules latéraux pour permettre le prélèvement du plexus choroïde. Enfin, l’hippocampe est retiré, exposant le thalamus et les cals du mésencéphale. Les méninges et le système vasculaire associé recouvrant cette région sont ensuite disséqués.

En fin de compte, l’intégrité et la spécificité des méninges disséquées et du système vasculaire artériel associé, ainsi que du plexus choroïde, peuvent être déterminées en comparant les profils d’expression génique de chacune de ces régions. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans la recherche liée au système vasculaire qui soutient la fonction cérébrale. Il comprend des similitudes, des comparaisons et des différences dans la fonction du plexus choroïde par rapport aux méninges et à son système vasculaire artériel associé en ce qui concerne le débit sanguin, la fonction du LCR, les agressions neurotoxiques et les traumatismes crâniens.

Pour commencer ce protocole, placez des cerveaux qui viennent d’être retirés des rats immédiatement après qu’ils aient été euthanasiés dans une solution saline normale et glacée pendant cinq minutes. Il est important de laisser le cerveau refroidir pendant ce laps de temps avant de disséquer afin que les quatre méninges cérébrales et le système vasculaire artériel associé ou puissent être séparés de la surface du cortex. Ensuite, placez le cerveau au fond d’une boîte de Pétri en verre reposant sur de la glace avec un centimètre de glace, une solution saline froide et normale ou une solution saline tamponnée au phosphate de sodium de 0,1 molaire à un pH de 7,4.

Toute dissection doit être faite avec le cerveau, la plupart du temps immergé dans une solution saline. Pour commencer la dissection, placez le côté dorsal du cerveau vers le haut dans la boîte de Pétri et localisez la glande pinéale, qui se trouve dans la région ventrale la plus choyée entre les deux hémisphères. Juste rostral au cervelet et juste en dessous, ou à la surface des méninges.

Sur le colli. Retirez la glande pinéale à l’aide de deux petites pinces à pointe courbée. Notez que la glande pinéale est de couleur rose comme le cortex, mais qu’elle est souvent entourée de restes de sang résiduel et de système vasculaire provenant de l’ablation du cerveau.

Ensuite, retournez le cerveau dans la boîte de Pétri. Séparez ensuite l’artère vertébrale et les petites artères et méninges recouvrant le pont des méninges et du système vasculaire du cerveau antérieur. Ensuite, commencez le retrait du.

Il est important de commencer ventralement dans le processus de dissection avec les artères principales du cercle de Willis, les artères cérébrales moyennes et les artères antérieures. Ensuite, en commençant par l’un ou l’autre hémisphère, utilisez une petite pince à pointe courbée pour sectionner l’artère communicante postérieure juste en arrière de la jonction carotide interne, séparant ainsi les arbres artériels les plus antérieurs et postérieurs du cerveau antérieur. Répétez ensuite le même processus pour l’hémisphère controlatéral.

Maintenant, en saisissant le MCA et l’artère antérieure avec la pince, tirez doucement dans une direction dorsale antérieure de sorte que le couvrant le cortex antérieur ventral soit soulevé au-dessus et autour du tractus olfactif. Cela enlève une grande partie du recouvrant le cortex antérieur. Tournez le cerveau à un angle de 45 à 90 degrés par rapport à la boîte de Pétri afin que les régions latérales plus antérieures du entourant les régions corticales latérales puissent être libérées du cortex, saisissez le MCA et les artères associées et tirez doucement dorsalement le long du cortex.

Si nécessaire, les extrémités de la pince peuvent être utilisées pour soulever et libérer les artères principales du cortex lors de la dissection. Maintenant, retirez les régions latérales les plus postérieures du. Notez qu’il est préférable de passer d’un hémisphère à l’autre au cours de ce processus de récolte pour s’assurer que le reste froid et hydraté, changez également d’hémisphère si une résistance à la libération du du cortex est rencontrée.

Enfin, pour enlever les régions les plus dorsales du entourant le cortex somatosensoriel et moteur primaire, tournez le côté dorsal du cerveau vers le haut pour libérer cette section du cerveau, utilisez les extrémités de la pince le long du sinus sagittal. Cette portion du récolté peut être conservée temporairement dans une solution saline glacée jusqu’à ce qu’elle soit nécessaire pour des tests et des analyses, ou congelée pour un traitement ultérieur. Souvent, le couvrant les régions les plus postérieures de la coddine du cortex reste attaché.

Sa suppression est montrée dans une section ultérieure de cette vidéo. Pour retirer le plexus choroïde, placez d’abord le côté dorsal du cerveau vers le haut et maintenez-le en place avec la pince plus grande. Ensuite, poussez la plus petite pince vers le bas à travers la ligne médiane entre les hémisphères et utilisez les extrémités pour percer à travers le cortex et le corps calleux jusqu’au haut de la ligne médiane de l’hippocampe.

Ensuite, utilisez la pince pour éloigner le cortex avec du calleux de l’hippocampe dorsal et du septum exposant la majeure partie du ventricule latéral. Le plexus choroïde peut être localisé et identifié par la ligne rouge ondulée délimitant l’artère principale qui s’étend sur toute sa longueur. Utilisez les deux extrémités de la pince pour soulever les parois latérales du troisième ventricule et l’agrandir à son extrémité la plus dorlotée.

Ensuite, à l’aide de la petite pince, libérez cette extrémité du plexus choroïde. Ensuite, utilisez la pince pour agrandir la région très antérieure entre le septum et la région du putamen caudé et libérez également le plexus choroïde à cette extrémité. Effectuez également la même procédure sur l’hémisphère controlatéral pour obtenir le deuxième plexus choroïde restant.

Encore une fois, ce tissu peut être conservé temporairement dans de la glace, au froid, à l’état salin ou congelé pour un traitement ultérieur. Pour retirer le restant couvrant les régions les plus postérieures du cortex, retirez d’abord tout l’hippocampe des deux hémisphères exposant le sur le thalamus et les collicules. Notez que l’ablation de cette partie du sera beaucoup moins difficile que son retrait du cortex pour le restant.

En saisissant le système vasculaire plus grand recouvrant la partie antérieure du thalamus et en tirant doucement de manière coddique, ce système vasculaire est connecté au réseau supra-curriculaire et fournit du sang à l’hippocampe dorsal et au réseau du thalamus dorsal. Tirez doucement et finalement le supra-réseau sera libéré et les dernières parties du cercle artériel de la dorlote pourront alors être atteintes. À ce stade, il faut prendre plus de précautions pour éliminer tout restant à la surface des cortex primaires, auditifs et visuels rétrolinéaires granulaires.

Tout cortical ventral postérieur restant récolté avec cette deuxième section thalamique et calli doit être retiré et ajouté à la première section corticale disséquée s’ils doivent être analysés séparément. Ensuite, pour comparer les profils d’expression génique entre le cortex pariétal du striatum et les régions dans des conditions de contrôle, l’analyse de l’expression génique peut être effectuée à l’aide du génome entier du rat Agilent 0 1 4 8 7 9, quatre par 44, 060 réseaux d’oligonucléotides mères. Vous trouverez de plus amples détails sur le traitement, la numérisation et le stockage initial des données dans Thomas et al.

Lorsque la dissection est exécutée correctement. Les tissus résultants doivent être en deux entités intactes pesant environ 35 à 45 milligrammes au total. Le initialement disséqué entourant la majeure partie du cortex devrait peser environ 25 milligrammes, et celui couvrant le thalamus, les calli et le cortex occipital devrait peser environ 15 milligrammes.

Les tissus doivent être de couleur légèrement rosée à cause du sang résiduel dans le système vasculaire. Le plexus choroïde bilatéral prélevé doit se trouver dans deux échantillons de tissus intacts, pesant chacun un à deux milligrammes, comme on le voit ici. Ici, nous voyons une comparaison des profils d’expression génique dans le cortex pariétal du striatum et le dans des conditions de contrôle.

Le graphique du haut montre l’expression dans le striatum par rapport au cortex pariétal. Alors que le graphique du bas montre l’expression dans le par rapport au cortex pariétal, on peut voir que le striatum et le cortex pariétal sont beaucoup plus étroitement liés l’un à l’autre que le. Ici, nous voyons l’expression différentielle des gènes dans le en réponse à l’hyperthermie par rapport au contrôle, en réponse à l’amphétamine par rapport au contrôle et dans l’hyperthermie par rapport à l’amphétamine.

Enfin, nous voyons ici des gènes avec une expression supérieure à 15 fois dans le par rapport au cortex pariétal et au striatum caractérisés par la fonction. Beaucoup de ces gènes sont liés au système vasculaire et/ou au système immunitaire. D’autres gènes avec de très grands changements de pliage sont les protéines de la matrice extracellulaire, les transporteurs de sauté et le métabolisme des lipides et de l’acide rétinoïque.

Lors de cette procédure, il est important de se rappeler d’être patient lors de la dissection du. Il est également important que le cerveau reste immergé dans une solution saline isotonique ou une solution saline tamponnée au phosphate pendant toute la dissection. Aussi, il est conseillé de pratiquer la section du sur quatre ou cinq rats avant d’obtenir des tissus pour générer des données expérimentales.