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DOI: 10.3791/50197-v
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Nous démontrons une technique peu invasive appelée électroporation zone sous-ventriculaire néonatal. La technique consiste à injecter de l'ADN plasmidique dans les ventricules latéraux de chiots nouveau-nés et application d'un courant électrique à fournir et manipuler génétiquement des cellules souches neurales
Le but de cette procédure est de marquer génétiquement et de manipuler les constituants moléculaires des cellules souches neurales de la zone sous-ventriculaire. Ceci est accompli en insérant d’abord une pipette en verre chargée d’ADN dans le ventricule latéral d’un P zéro P.La deuxième étape consiste à expulser l’ADN dans le liquide céphalo-rachidien du ventricule latéral. Le courant suivant est appliqué au P.Cela permet le transfert de l’ADN vers les cellules souches neurales qui tapissent les ventricules latéraux.
En fin de compte, une combinaison de techniques moléculaires, notamment l’immunohistochimie, la biologie moléculaire, la microscopie et l’électrophysiologie, est utilisée pour visualiser les changements de destin, de prolifération, de migration et de maturation des cellules souches neurologiques de la zone sous-ventriculaire. L’électroporation de la zone sous-ventriculaire néonatale peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine de la neurogenèse, telles que les voies moléculaires responsables de la régulation de la prolifération, de la différenciation, de la migration et de la maturation des cellules souches neuronales et de leur descendance. Le principal avantage de cette technique par rapport aux méthodes existantes, telles que les souris transgéniques, est qu’elle permet le marquage rapide et robuste des cellules souches neuronales de la SVZ de manière efficace et rentable.
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