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JoVE Journal Bioengineering
Characterization of Complex Systems Using the Design of Experiments Approach: Transient Protein Expression in Tobacco as a Case Study

Caractérisation des systèmes complexes à l'aide de la conception des expériences approche: l'expression transitoire de protéines dans le tabac comme une étude de cas

Full Text
17,195 Views
20:24 min
January 31, 2014

DOI: 10.3791/51216-v

Johannes Felix Buyel1, Rainer Fischer1,2

1Institute for Molecular Biotechnology,RWTH Aachen University, 2Institute for Molecular Biology and Applied Ecology,Fraunhofer Gesellschaft

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Nous décrivons une conception de l'approche des expériences qui peuvent être utilisés pour déterminer et modéliser l'influence des éléments de régulation du transgène, les paramètres de croissance et de développement des plantes, et des conditions d'incubation sur l'expression transitoire des anticorps monoclonaux et des protéines rapporteurs dans les plantes.

L’objectif global de l’expérience suivante est de générer des modèles prédictifs pour l’expression transitoire des protéines dans les feuilles des plantes. Ceci est réalisé en mettant en place un plan expérimental pour identifier les paramètres les plus importants pour l’expression transitoire et quantifier leur impact sur l’accumulation de protéines. Dans un deuxième temps, les gènes sont clonés et transférés dans des agrobactéries, qui sont ensuite injectées dans les feuilles, ce qui entraîne une expression transitoire des protéines.

Ensuite, des échantillons de feuilles sont analysés afin de déterminer les niveaux d’expression des protéines. On obtient des résultats qui montrent le modèle des niveaux d’expression transitoire des protéines dans des feuilles de différents âges et pour différentes conditions d’incubation, sur la base d’un modèle d’évaluation du plan d’expérience. Le principal avantage de cette technique par rapport aux méthodes existantes comme un facteur à la fois, est que les interactions entre différents paramètres comme l’âge de la feuille ou la position de la feuille peuvent être détectées et quantifiées.

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