Utilisant la Technique de la manche dans un modèle murin de la greffe aortique - une vidéo d’instruction

Nous présentons un modèle d’aortique transplantation orthotopique utilisant la technique de la manche chez les souris. C’est une méthode très rapide d’anastomose, qui peut être utilisée dans les études des maladies vasculaires.

Dans cette procédure, l’aorte du donneur est placée en position orthopnéique et les morsures superficielles sont prises dans le récipient d’alimentation. Anesthésiez les souris avec un mélange de 1,5 % d’isoflurane en volume et de 100 % d’oxygène à l’aide d’un masque facial. Posez la souris sur une plate-forme en position couchée et collez toutes les jambes sur la table d’opération.

Placez une pommade ophtalmique sur les yeux pour prévenir la sécheresse pendant la procédure. Vérifiez les réflexes, en pinçant les pattes arrière pour vous assurer que la souris est suffisamment anesthésiée. Retirez tous les poils de l’abdomen.

Appliquez une crème dépilatoire ou utilisez un rasoir. Effectuez l’opération dans des conditions stériles. Désinfectez l’abdomen.

Pour enlever l’aorte du donneur, faites une incision abdominale médiane et rétractez l’intestin manuellement vers la droite. Réfléchissez doucement et manuellement les intestins sur le côté à l’aide de gants non poudrés. Placez les intestins sur un morceau de gaze imbibé de solution saline pour les garder humides.

Disséquez très soigneusement l’aorte abdominale des tissus environnants à l’aide d’une dissection contondante à l’aide d’une pince à épiler. Disséquez le segment de l’aorte entre l’artère rénale et la bifurcation de la veine cave avec la pince à épiler. Fixez toutes les petites branches de ce segment à l’aide d’une suture simple monofilament 11-0.

Avant de retirer l’aorte, injectez 0,5 millilitre de solution saline contenant 50 unités d’héparine dans la veine cave inférieure. Laissez l’animal donneur exsangner avant que le segment de l’aorte n’ait été enlevé. Rincez abondamment le greffon avec une solution saline et placez-le immédiatement dans un récipient de solution saline glacée.

Pour préparer le receveur, anesthésie l’animal à l’aide d’un masque facial, enlève les poils et désinfecte comme ci-dessus, et fais une incision médiane du xiphoïde au bassin avec un scalpel. Rétractez les parois abdominales à l’aide d’écarteurs. Enveloppez les intestins dans de la gaze imbibée d’une solution saline et déplacez-les très doucement vers la droite de l’animal.

Disséquez l’aorte infrarénale libre entre les artères rénales proximale et la bifurcation distale avec la pince à épiler. Fixez toutes les petites branches de ce segment à l’aide d’une suture simple monofilament 11-0. Clampez les parties proximale et distale de l’aorte à l’aide d’une suture simple en soie 6-0.

Divisez l’aorte au milieu entre les pinces et irriguez les extrémités coupées avec une solution saline héparinée pour ouvrir la lumière. Placez le greffon en position orthopnéique. Effectuez l’anastomose à l’aide de la technique du manchon avec des sutures à l’aide de monofilament 11-0.

Avec cette méthode, l’extrémité du récipient d’alimentation est placée dans le récipient récepteur. Placez l’extrémité de l’aorte receveuse infrarénale à l’intérieur de l’extrémité proximale de l’aorte du donneur. Effectuez l’anastomose distale de la même manière.

Placez l’extrémité distale de l’aorte du donneur à l’intérieur de l’extrémité distale de l’aorte receveuse. Prenez soin d’éviter toute torsion de l’aorte en assurant l’alignement parfait de l’aorte donneuse et receveuse. Le moment de la libération de la pince est une étape très importante de la procédure et doit être effectué avec beaucoup de soin.

Après avoir vérifié que l’anastomose est en ordre, relâchez les pinces. Relâchez d’abord doucement la pince distale, puis la pince proximale. De cette façon, il y a une faible pression pour maintenir les parois ensemble avant que le côté haute pression ne soit relâché.

Le greffon est perfusé immédiatement et un pouls est visible. Retirez délicatement les restes de soie. Remettez le contenu abdominal dans la cavité abdominale et fermez la plaie à l’aide d’une suture à l’acide polyglycolique 3-0.

Administrez de la buprénorphine 0,05 milligramme par kilogramme à la souris avant de mettre fin à l’anesthésie. Nous présentons les exemples des images de nécropsie du greffon six semaines après la transplantation et sa vue échographique tridimensionnelle et en mode B. Les photos montrent la perméabilité de la greffe.

Il n’y a pas de changements dans les dimensions de la lumière montrés par la greffe. De plus, nous n’avons trouvé aucune sténose ou formation anévrismale. Nous n’avons pas observé de lésions significatives dans les aortes transplantées par coloration histologique et immunohistochimique.

Les noyaux ont été contre-colorés par DAPI. En conclusion, cette méthode d’anastomose très rapide pourrait être utilisée pour étudier les maladies vasculaires chez les souris génétiquement modifiées.