Thrombose veineuse profonde induite par stase chez les souris surveillé par échographie de haute fréquence

Les objectifs globaux de cette procédure sont d’induire une thrombose veineuse profonde chez la souris en utilisant le modèle de stase de la veine cave inférieure, et de surveiller le thrombus à l’aide d’ultrasons à haute fréquence. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine de la thrombose veineuse sur la façon dont un agent pharmacologique, un gène ou un type de cellule d’intérêt peut influencer la formation ou la résolution des thrombus. Le principal avantage de cette technique est que la formation et la résolution des thrombus peuvent être quantifiées de manière non invasive chez la souris.

Nous avons eu l’idée de cette méthode pour la première fois lorsque nous étudiions comment dénamiquer et surveiller de manière non invasive la formation de thrombus dans la veine cave inférieure de souris. Pour commencer, utilisez une pince pour soulever la peau abdominale inférieure d’une souris C57 black six âgée de huit à 10 semaines. Et utilisez des ciseaux chirurgicaux pour faire une incision verticale parallèle de chaque côté de la linea alba à partir de la ligne médiane.

Faites une incision horizontale en haut de l’abdomen. Suivi d’incisions répétées à travers la couche musculaire abdominale. Pliez la peau et le muscle loin de l’incision pour exposer la cavité abdominale.

Et placez de la gaze humidifiée des deux côtés de la plaie. Appliquez une légère pression des deux côtés de l’abdomen pour extérioriser les intestins sur la gaze. Et placez une deuxième couche de gaze humidifiée sur le tissu extériorisé.

Sous un microscope à dissection, écartez toute graisse péritonéale pour exposer la veine cave intérieure, ou CVI, entre les veines rénale et iliaque. Et localisez les branches latérales IVC. À l’aide d’une pince, disséquez doucement autour de chaque branche latérale pour percer le fascia sans endommager les vaisseaux environnants.

Ensuite, saisissez soigneusement la graisse autour d’une branche pour soulever la veine. Et passez un morceau de suture en soie zéro à six traits sous le récipient. Ensuite, utilisez des pinces à suture et une technique chirurgicale standard de nouage pour faire une ligature chirurgicale avec au moins trois lancers autour de la branche latérale pour occlure complètement le vaisseau.

Vous pouvez également utiliser des Hemoclips. Pour séparer l’aorte de la VCI, disséquez autour et entre les deux vaisseaux immédiatement distal de la veine rénale gauche sans endommager l’un ou l’autre vaisseau. Lorsqu’une fenêtre claire a été créée entre les vaisseaux, passez une section de suture en soie six traits zéro sous la VCI et l’aorte abdominale.

Et utilisez des pinces pour tirer la suture à travers la fenêtre. À l’aide d’une pince à suture, ligaturez l’IVC avec trois lancers immédiatement distaux vers la veine rénale gauche pour une occlusion complète du vaisseau. Confirmez que l’aorte abdominale n’a pas été interrompue.

Et que toutes les branches latérales ont été ligaturées. La VCI apparaîtra dilatée distale par rapport au site de ligature. Et aucun flux sanguin ne sera visible.

Retournez la graisse péritonéale et les intestins dans la cavité abdominale. Et utilisez des pinces à suture et des sutures en soie six dash zero pour fermer séparément les couches musculaires et cutanées avec des points de suture. Ensuite, placez l’animal dans un incubateur à 34 degrés Celsius pendant au moins 30 minutes avec surveillance jusqu’à ce qu’il se rétablisse complètement.

Placez la bouteille de gel à ultrasons dans les serpentins d’un système de chauffage de l’eau pour chauffer le gel à 37 degrés Celsius. 24 heures après la ligature, placez l’animal sur la plateforme d’analyse. Et appliquez du gel d’électrode sur les quatre électrodes de la plate-forme.

Avec l’animal en position couchée, fixez les pattes aux électrodes. Et insérez un thermomètre lubrifié dans le rectum. Placez de la gaze sur le côté de l’animal pour récupérer tout excès de gel à ultrasons.

Appliquez ensuite le gel sur la peau exposée. Et imagez l’IVC selon les protocoles d’imagerie par ultrasons standard. À l’aide d’un système de micro-imagerie à haute fréquence, la VCI peut être identifiée dans la vue longitudinale avant la ligature.

Et la vitesse d’écoulement peut être déterminée par l’imagerie Doppler à ondes pulsées. Immédiatement après la ligature, une diminution du flux sanguin est apparente. 24 heures après la ligature, des thrombus denses peuvent être visualisés à l’intérieur de la VCI par échographie.

L’échographie permet également de quantifier la vitesse du flux sanguin dans les vaisseaux. Utilisation d’un Doppler coloré avant, immédiatement après et 24 heures après la ligature. Une fois maîtrisé, le thrombus peut être induit en 30 à 45 minutes selon la présence et le nombre de branches latérales si la technique est correctement réalisée.

Lorsque vous tentez cette procédure, il est important de se rappeler de prendre votre temps et d’être précis mais doux dans vos mouvements, car il est relativement facile de rompre les vaisseaux. À la suite de cette procédure, d’autres méthodes telles que l’immunofluorescence, l’histologie ou l’analyse cytométrique en flux peuvent être effectuées pour répondre à des questions supplémentaires sur le contenu cellulaire des thrombus ou pour quantifier des protéines d’intérêt spécifiques.