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DOI: 10.3791/58351-v
Jonathan G.T. Lam1,2,3, Chi Song4, Stephanie Seveau1,2,3
1Department of Microbial Infection and Immunity,The Ohio State University, 2Department of Microbiology,The Ohio State University, 3Infectious Diseases Institute,The Ohio State University, 4Division of Biostatistics, College of Public Health,The Ohio State University
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
This article describes a high-throughput fluorescence-based assay for measuring plasma membrane resealing efficiency in living cells. The assay is designed to screen drugs or target genes that influence this critical cellular process.
Nous décrivons ici un test haut débit fluorescence qui mesure la membrane plasmique rescellage d’efficacité grâce à des analyses fluorimétrique et imageries de cellules vivantes. Ce test peut être utilisé pour le dépistage des drogues ou des gènes de cible qui régulent la membrane plasmique réapposition de sceau sur des cellules mammaliennes.
Cet essai a été développé pour répondre aux questions clés dans le domaine de la biologie de membrane de plasma et pour établir comment les cellules efficacement endommagées peuvent réséaliser leur membrane plasmatique. Cette technique peut être utilisée pour mesurer l’efficacité de la membrane plasmatique resealing dans une capacité de haut débit et pour identifier les protéines spécifiques et les voies correspondantes qui médiation de la membrane plasmatique resealing. Commencez par ajouter 20 millilitres d’un 2,5 fois 10 à la cinquième cellules HeLa par millilitre de suspension moyenne de croissance dans un bassin stérile pipette et utiliser une pipette sérologique de 10 millilitres pour bien mélanger les cellules.
Ensuite, utilisez une micropipette multicanal pour ensemencer 100 microlitres de cellules par puits en triplicate dans une plaque traitée à fond plat et clair de 96 puits. Rappelez-vous qu’une distribution homogène de cellules est la clé d’une expérience réussie car les comparaisons entre toutes les conditions expérimentales nécessitent des nombres de cellules équivalents. Après 24 heures dans l’incubateur humidifié de culture cellulaire à 37 degrés Celsius et 5% de CO2, préchauffer le lecteur de plaque à 37 degrés Celsius et définir la configuration optique au monochromateur, le mode de lecture à la fluorescence, et le type de lecture à cinétique.
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