Évaluation des toxicités associées aux lymphocytes T du récepteur de l’antigène chimérique à l’aide d’un modèle murin xénogreffé dérivé d’un patient atteint de leucémie lymphoblastique aiguë

Ce protocole utilise des cellules CAR-T et tumorales humaines et démontre avec précision les toxicités associées à l’administration de CART19. Par conséquent, récapitulatif de ce qui a été observé dans la clinique. Le principal avantage de l’utilisation de cette plate-forme est qu’elle fournit un modèle traduisible et cliniquement pertinent où les cellules T humaines et les cellules tumorales sont utilisées.

Ce modèle permet non seulement une évaluation efficace des toxicités associées à CART19, mais nous permet également de mieux comprendre comment nous pouvons surmonter ces toxicités grâce à des stratégies de traitement améliorées. Pour commencer, surveillez les souris administrées par CART19 deux fois par jour pour évaluer tout changement dans leur bien-être, tel que la faiblesse motrice, le corps voûté et la perte de poids corporel. Une fois que les souris développent une faiblesse motrice et une réduction de poids, prélevez leur sang périphérique pour analyser la charge tumorale.

Et effectuer l’isolement sérique des cytokines, comme décrit dans le manuscrit. Après l’isolement, conservez les tubes de microcentrifugation sérique à 80 degrés Celsius et utilisez le cera pour analyser les chimiokines et les cytokines à l’aide du test multiplex. Pour l’imagerie IRM, mélanger 120 microlitres de gadolinium avec 880 microlitres de solution saline et charger dans une seringue à insuline d’un millilitre.

Injectez 100 microlitres de la solution préparée par voie intrapéritonéale dans chaque souris. Anesthésiez la souris et placez-la sur la sonde de berceau compatible avec les rongeurs. Puis accrocher ses dents sur la barre de morsure.

Tirez la tête de la souris dans la bobine de volume de 25 millimètres et ajustez le cône nasal attaché au système d’anesthésie à l’isoflurane. Serrez le bouton de la barre de morsure pour maintenir la position pendant toute la durée de l’analyse. Pour l’évaluation de la respiration, fixez la sonde d’un dispositif de surveillance respiratoire près du diaphragme et fixez-la avec du ruban chirurgical.

Maintenez le taux de respiration entre 20 et 60 respirations par minute afin que l’état des souris reste stable. Insérez la sonde de l’animal dans le petit alésage du système d’IRM pour petits animaux à alésage vertical et ajustez la tête de l’animal au centre de la bobine. À l’aide de la serrure, fixez l’appareil en position verticale et connectez l’instrument à l’ordinateur.

Ensuite, ouvrez le logiciel ParaVision pour configurer les positions de numérisation et les types de numérisations. Déterminer les positions sagittales et axiales optimales tout en les maintenant cohérentes pour tous les groupes expérimentaux. Pour recueillir les données d’IRM pondérées T1, utilisez une séquence multi-tranches et multi-échos pondérée T1 avec un temps de répétition de 300 millisecondes, un temps d’écho de 9,5 millisecondes, un champ de vision de 4,00 X 2,00 X 2,00 centimètres et une matrice de 192 X 96 X 96.

Pour les images IRM pondérées en T2, utilisez une séquence multi-coupes et multi-échos avec des paramètres similaires. Une fois les scans terminés, retirez la sonde de l’alésage et extrayez doucement la souris en retirant les dents de la barre de morsure. Après avoir extrait les données du logiciel, utiliser un logiciel d’analyse pour la quantification et le rendu de volume 3D des régions d’hyperintensité Les populations de cellules tumorales CD19+ ont été comparées entre des souris traitées avec CART19 et des souris non traitées par cytométrie en flux.

Une réduction significative du poids a été observée chez les souris traitées avec des cellules CART19. La perte de poids est considérée comme un symptôme de l’apparition du SRC, qui est liée aux toxicités associées aux cellules CART. Un test multiplex a révélé l’expression de cytokines et de chimiokines dans le sérum de souris NSG avant et après l’administration de CART19.

Les images pondérées en T2 ont révélé des signes d’œdème et d’infiltrat inflammatoire possible au cours de la neuroinflammation chez les souris traitées par CART19. Alors que l’IRM pondérée en T1 a montré une amélioration du contraste dans le parenchyme cérébral, indiquant une augmentation de la perméabilité vasculaire. Des reconstructions tridimensionnelles du cerveau du rongeur ont été assemblées sur la base de régions d’hyperintensité T1 correspondant à la perméabilité vasculaire, ce qui rend le volume de fuite de gadolinium dans le cerveau.

Il est important de se rappeler que la surveillance physique quotidienne des souris après l’administration de CART19, ainsi que les saignements périphériques, seront le meilleur indicateur pour procéder à l’IRM afin d’évaluer pleinement tout changement dans le cerveau indiquant un SRC ou une neurotoxicité. Cette technologie est largement applicable à d’autres thérapies cellulaires CAR-T et permettra aux scientifiques de tester efficacement les toxicités potentielles découlant de nouvelles cellules CAR-T. Ce modèle proposé est un tremplin pour comprendre comment les toxicités associées aux cellules CAR-T peuvent être surveillées, traitées et utilisées pour valider de nouveaux modèles de cellules CAR-T.