Name: שיטות הצמד תיקון הקלטות קיבול מן Calyx (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-07-29T00:00:00.000+00:00
Duration: 14 min 58 s
Description: למדו שיטות הצמדה לתיקון קלטות קיבול בטרמינל הפרה-סינפטי Calyx of Held במוח העכבר. הפרוטוקול מדגים הכנת רקמת מוח, שימור בחמצן וטכניקות אלקטרופיזיולוגיות לחקר שחרור נוירוטרנסמיטרים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

הצמד תיקון התקנה: אופטיקה: אופטיקה חשובים מאוד למצוא תא טובה, כדי לקבוע את המיקום של זה. נסה להשיג תמונה ברורה של התאים: קצוות חדים, רך למראה תא. סרוק את שדה שלם כדי לחפש טוב התאים העיקריים MNTB עם גביע המצורפת. סיבוב צלחת לחפש calyces מזוויות שונות. בהתחלה זה בסדר להתאמן על מסוף, בלון בצורת. פיק התא על פני השטח של פרוסה או שכבה 2 nd התא. היעד השלישי ראשון 1 / 3 תאים עם פיפטה זיהוי Calyxes: חפש קרום כפול (ראה איור 1), לסובב את המנה פרוסה לראות אותו מזוויות שונות כדי לעזור לאשר כי מדובר גביע. <img src="/files/ftp_upload/old/244_2008_8_22_2/244_Figure-01.png" alt="איור 1" width="298" height="159" /> איור 1 עומק Calyx: Calyx צריך להיות על פני השטח או קרוב לפני השטח ככל האפשר. שטח זמין עבור תיקון: השתמש עדין להתמקד על כפתור מיקרוסקופ כדי לקבוע כיצד &quot;רחב / עמוק&quot; גביע הוא. לדוגמה, ~ 10% סיבוב מלא על המוקד את הקנס ייתן לך יותר שטח מספיק על גבי טלאי. איטום על גבי תא presynaptic: כדי להגיע אל תא מצורף, לחפש עיוות &quot;קטן&quot; על פני התא עקב הלחץ pos (~ 0.15psi) ב פיפטה, להשתמש מניפולטור פיפטה לרוץ למעלה, למטה ולרוחב, ואפילו את פני השטח של הטרמינל presyn לקבל דפורמציה טוב, ואז לשחרר לחץ להחיל יניקה, אם על פי הצורך. PULSE, תוכנית רכישת נתונים: צריך להגדיל את גודל המאגר לפני השימוש הראשון, נדרש בכל פעם על ידי יכולת דגימה. צריך לטעון מאקרו שונה בכל פעם. צומת נוזלי אפשריים: הקלטה פתרון Presyn הוא-11mV (11mV שלילי). Presyn: Cslow = ~ 15 pF Rs comp עבור presyn: 10 μsec, 65% (פיצויים יותר עשוי אפשרי W / החוצה תנודות) לפני קיבול הקלטה: הרפיה הבדיקה הנוכחית (10 mV, 10 msec לקפוץ) כדי לראות אם היא הרפיה monoexponential, כלומר, אם המונח presyn יכול להיות המודל של תא יחיד. מסננים: הגדר בבית kHz 30 ו - 10 kHz (בסל מסנן 1 ו -2 בהתאמה) במהלך המדידה רגיעה, כדי לוודא מרכיב מהיר לא פיספס. במהלך ההקלטות מיני, המשמש Xinsheng 10 קילוהרץ ו 5kHz. LGW שאל אותי להשתמש רק להגדיר מסנן 1 ב 30 קילוהרץ כדי לוודא שאנחנו יכולים למדוד עליית פעמי של מיני. שמות קבצים: 7 ספרות 000mmxx, כאשר mm הוא החודש (או חודש, שנה) ו xx הוא מספר התא. ניקוי קווי הפתרון: קווים לנקות בסוף הניסוי עם 20 מ&quot;ל של HCl 0.1 M ואחריו 200 מ&quot;ל ddH2O. פתרונות חיצוניים הם ממוחזרים, מהירות המשאבה הוא 20-30 סל&quot;ד. (פתרון החוזרים קאמרית אמבטיה זורם חזרה לתוך צילינדר המדורג). הגדרת 3 קווי היוצא על מנת להבטיח יניקה מספיק. פיפטה פתרון הקלטה Presynaptic: ~ 310 מילי Osmolar הפתרון צריך להיות Presyn ~ 310 mOsm למנוע R-גישה להגדיל במהלך הניסוי. פתרון Presyn פיפטה שונה postsyn פיפטה פתרון (Presyn יש ATP GTP &amp; עבור לשעבר.). TTX-TEA פתרון (לבודד Ca זרמים): <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נסו ליישם לאחר איטום, או אפילו תיקון, על התא, כמו תה בלוקים הפתרון K-ערוצים depolarizes התא. זה לא טוב עבור התא. מאותה סיבה, זה לא יהיה ניתן לעשות שימוש חוזר פרוסה אחרי TTX מוחל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השווה את התגובה הראשונה והאחרונה של התא, או פרוסה כדי לבדוק השפעה כלשהי של שלילת קוטביות ממושכת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> TTX משמש ב 1 מיקרומטר במקום 0.5 מיקרומטר ולכן ההשפעה היא מהירה יותר. צריך לחכות פחות זמן לאחר שינוי פתרונות. </li></ul> חיתוך Slices Vibratome הגדרות: <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 70Hz רעידות לרוחב </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Amplitude: 1.0 מ&quot;מ </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קדימה במהירות 0.01-0.02 מ&quot;מ / sec בזמן חיתוך פרוסות עם גביע, 0.1 אחרת עובי: 180 מיקרומטר (~ 150מיקרומטר בבעלי חיים מבוגרים) </li></ul> Slices לדגור על 37 º C למשך שעה 1 (כולל זמן חיתוך), כלומר, להשאיר באמבטיה 15-20 דקות לאחר חיתוך. Pipettes: Presyn: 3.5-4.5 MΩ בהתחלה, 3.0-3.5 MΩ כאשר מרגישים בטוחים יותר שימוש ידני חולץ להגדיר הגדרות. השתמש בתכונה עיכוב בגלל זכוכית עבה (עיכובים בעבודה 200 או 1) זכוכית סוג: בורוסיליקט, תקן הקיר, אין נימה קוטר חיצוני: 2.0 מ&quot;מ קוטר פנימי 1.16 מ&quot;מ אורך: 7.5 ס&quot;מ

שיטות הצמד תיקון הקלטות קיבול מן calyx

Methods for Patch Clamp Capacitance Recordings from the Calyx

אנו מדגימים את הטכניקות הבסיסיות הקלטה תיקון presynaptic מהדק את גביע של הלד, מסוף יונקים העצבים המרכזית מערכת העצבים. הקלטות חשמל ממסוף presynaptic לאפשר מדידה של פוטנציאל פעולה, ערוץ זרמי סידן, איחוי שלפוחית ​​(exocytosis) ספיגת הקרום הבאים (אנדוציטוזה). שילוב של שלפוחית ​​המכילה הנוירוטרנסמיטר גורם קרום שלפוחית ​​שיתווספו קרום התא של גביע. גידול זה בהיקף של קרום התא הוא, כפי שהיא נמדדת עלייה קיבול. הירידה עוקבת קיבול מציין אנדוציטוזה, תהליך של ספיגת קרום או הסרה של קרום גביע. אנדוציטוזה, נחוצה כדי לשמור על המבנה של גביע והוא נחוץ גם כדי ליצור שלפוחית ​​כי יתמלאו הנוירוטרנסמיטר לאירועים exocytosis בעתיד. הקלטות קיבול על גביע של הלד אפשרו ישירות ובמהירות למדוד לשחרר שלפוחי ו אנדוציטוזה מאוחרות מסוף יונקים עצב במערכת העצבים המרכזית. בנוסף, הפעילות postsynaptic המקביל ניתן למדוד בו זמנית באמצעות הקלטות לזווג. לכן תמונה מלאה של הפעילות החשמלית presynaptic ו postsynaptic בסינפסה מערכת העצבים המרכזית הוא בר השגה באמצעות הכנה. כאן, שיטות להכנת פרוסה, תכונות מורפולוגיות לזיהוי calyces, בטכניקות נערך תיקון בסיסי clamping, ודוגמאות של הקלטות קיבול למדוד exocytosis ו אנדוציטוזה מוצגים.

שיטות הצמד תיקון הקלטות קיבול מן Calyx

אנו מדגימים את הטכניקות הבסיסיות להקלטת patch clamp פרה-סינפטית ב-calyx of Held, קצה עצבי של מערכת העצבים המרכזית ביונקים. ...

שלום, שמי קן פראדיסו. אני עובד עבור לינג גנג וו בתוכנית הפנימית של המכון הלאומי להפרעות נוירולוגיות ושבץ, הממוקם בקמפוס בתסדה של ה-NIH. אני אציג בפניכם את הטכניקות להקלטה פרה-סינפטית של ה-calyx held באמצעות Patch clamping.כדי להכין את רקמת המוח, אנו מוציאים את המוח מהחולדה. אנו מניחים את המוח בתוך תמיסה זו, שהיא תמיסה קרה מאוד (בטמפרטורת קרח) עם ריכוז סידן נמוך, המבעבעת בקרבוגן (carbogen) כדי להבטיח אספקת חמצן רציפה למוח. כמו כן, התמיסה חייבת להיות קרה מאוד כדי למזער את מידת הנזק.כעת המוח נמצא בתמיסה זו. נוציא אותו ונחתוך אותו באופן מתאים כך שניתן יהיה להניח אותו על התושבת, ונקבע אותו לתושבת באמצעות Sano correlate או דבק מהיר. לאחר מכן, נמלא את התא בתמיסת סידן נמוך קרה מאוד, נהסמיח אותה (bubble), נניח אותה על הוibratome ונחתוך פרוסות בעובי של 180 עד 190 microns, בתדירות להב של 70 hertz ובמהירות התקדמות קדימה של 0.01 עד 0.02 millimeters per second. כלומר, 10 עד 20 microns per second.לאחר ביצוע כל חיתוך, אנו מעבירים את הפרוסות מהסליין הקר על קרח לתא זה, המכיל תמיסת סידן רגילה. זוהי אותה תמיסה שבה אנו מבצעים את ההקלטה, והיא נמצאת בטמפרטורה פיזיולוגית של 37 °C. לאחר מכן, אנו מניחים את הפרוסות כאן לצורך התאוששות.הוא נשאר כאן למשך חצי שעה עד שעה לפני ביצוע ניסויי הפיזיולוגיה. כעת, יש לי כאן את המוח ואני עומד להוציאו מהתמיסה. לצורכי הדגמה, זהו מוח גדול יותר.זהו נתח מחולול חולדה בגיל P 20. נהפוך אותו. גזע המוח הוא החלק שמעניין אותנו.אם כן, האזור הזה כאן למטה והגביע נשמרו בערך באזור הזה ממש. לכן, מה שנעשה הוא לחתוך את שאר המוח, לבודד את גזע המוח, ולאחר מכן להכין את גזע המוח עבור תא החיתוך. אוקיי, נחתוך את שאר המוח כדי לבודד רק את גזע המוח.אני הופך את הדגימה כדי להדגים היכן אנו נמצאים. בדרך כלל לא היינו פועלים בדרך זו, ושוב, ניתן פשוט להסיר את כל החלק הזה. לאחר ההחזרה למצב המקורי, בידלנו את גזע המוח ואנו מבצעים חתך נוסף בדיוק שם.בסדר, זהו זה. זהו גזע המוח. ה-Calyx of Held נמצא ממש שם ושם.זהו גזע המוח. שוב, נדחף אותו מעט לאחור. נגזור צד אחד של המוח הקטן (cerebellum), וזה יאפשר לגזע המוח לשבת הצידה באופן זה.השקענו כמות קטנה של דבק אקרילי מסוג Sano, ובזמן שהשארנו אותו במצב שכיבה, מילאנו במהירות קרח קר, תמיסת סידן בריכוז נמוך וקרה. הכניסו את קו החמצן פנימה במהירות האפשרית. כעת נרים אותו ונעבירו אותו אל הוויברטור.אנו מקדמים את המכשיר במהירות כדי להגיע לתחילת המוח, ולאחר מכן, ברגע שהגענו לתחילת המוח, אנו מורידים את המהירות ל-0.01 millimeters per second. כלומר, 10 micros per second. כך שהתנועה היא בקצב איטי ביותר.החלק הראשון של המוח הוא החלק שבו נמצא ה-mtb, שהוא ה-medial nucleus of the trapezoid body. וזהו החלק המכיל את, אוקיי, ברגע שזה נמצא בפיפטת ההעברה, אני מנסה להביא אותו קרוב ככל האפשר לקצה הפיפטה. והנה פרוסת המוח, ואני מעביר אותה במהירות לתא זה, המכיל תמיסת הקלטה סטנדרטית עם רמות סידן רגילות וגם בטמפרטורה גבוהה יותר.וזה יאפשר לפרוסות להתאושש לאחר הליכי החיתוך, כך שיהיו מוכנות לניסויי פיזיולוגיה. אוקיי, מכאן והלאה, הפעולות יחזרו על עצמן שוב ושוב. הציוד הבא הוא מה שאשתמש בו כדי לבצע את ה-patch clamping.ברשותנו מיקרוסקופ זקוף עם שולחן קבוע. השולחן קבוע, כפי שציינתי, ולכן המיקרוסקופ נע תחתיו באמצעות מניפולטור. אנו משתמשים במיקרו-מניפולטור של Wigs and Newman כדי להחזיק את השולחן; עבור יחידת הראש של המגבר, אנו משתמשים במגבר patch clamp מדגם EPC 10 מבית HEKA.בנוסף, עליי לציין שאנו משתמשים ב-DIC עם אור אינפרא-אדום. לכן יש לנו כאן מצלמת IR, וכל מה שנראה יופיע על המסך בעודנו מחפשים CAEs. מגבר ה-patch clamp נשלט על ידי התוכנה הזו, הנקראת Pulse, שגם היא מבית Heca, והיא תשלוט במגבר ובכל ניסוי הפיזיולוגיה.התוצאות יופיעו על מסך זה. הגביע שנחזיק הוא טרמינל פרה-סינפטי גדול, ובשל גודלו, הוא מאפשר לנו לבצע patch פיזי על הטרמינל. לפיכך, אנו יכולים לבצע הקלטות פרה-סינפטיות, וזהו דבר ייחודי למדי, במיוחד במערכת העצבים המרכזית (CNS).בדרך זו אנו יכולים למדוד תעלות סידן המופעלות באופן פרה-סינפטי. בנוסף, אנו יכולים למדוד פעילות של פוטנציאל פעולה אם נרצה לגרות את העצב המוביל אל ה-calyx. במעבדה זו אנו מודדים תהליך הנקרא אקזוציטוזה, שהוא התאחות של שלפוחיות המכילות מוליכים עצביים עם הממברנה.כעת, כאשר שלפוחיות אלה מתמזגות עם הממברנה בתהליך הנקרא אקסוציטוזה, הן מוסיפות ממברנה לקצה הסינפטי, וניתן למדוד זאת כשינוי בקיבוליות (capacitance). נקבל עלייה בקיבוליות כתוצאה מהוספת ממברנה לקצה, לכן הניסויים שאציג היום הם מדידות קיבוליות, כאשר במצב פרה-סינפטי הממברנה מוסרת. שכן לא ניתן להמשיך להוסיף ממברנה ללא הפסקה, אלא יש להסיר חלק ממנה.תהליך זה נקרא אנדוציטוזה או ספיגה ממברנלית. אנו יכולים למדוד גם זאת, והמדד יהיה ירידה ברמת הקיבוליות, ונדגים דוגמאות לכך בהמשך. כעת, הדבר מאפשר לנו לנטר את הפעילות של תעלות סידן וכן לנטר וללמוד על חלק מהחלבונים המעורבים באקסוציטוזה ובאנדוציטוזה.ניתן להוסיף חומרים כגון פפטידים כדי לחסום חלבונים המעורבים באקסו- או אנדוציטוזיס. ניתן להשתמש גם ברעלנים הממלאים תפקיד דומה. כמו כן, ניתן לווסת את כמויות הסידן הנכנסות למסוף, ובכך לבחון לעומק את תהליך האקסוציטוזיס, שחרור הנוירוטרנסמיטור, וכן את ספיגת הממברנה העוקבת לאירוע זה.זוהי המבחנה המכילה את תמיסת ההקלטה התוך-תאית שלנו. אנו מכינים אותה מראש ולאחר מכן מקפיאים אותה, ובדרך כלל ניתן להשתמש בה למשך מספר שבועות עד חודש לפני שיהיה צורך להכין תמיסה חדשה. שוב, חשבנו על כך רגע לפני ביצוע ההקלטות, ותמיד תמצאו כמות מסוימת של חלקיקי אבק או סוגים אחרים של פסולת שייכנסו למבחנה שלכם.ניתן לפעול באחת משתי דרכים: ניתן להוציא את התמיסה ולסנן אותה, או לסובב אותה בצנטריפוגה למשך דקה או שתיים ולאחר מכן להוציא את התמיסה, ולהשאיר את החלק התחתון המכיל שרידים וחומרים אחרים. אני מעדיף לסובב אותה בצנטריפוגה, ואעשה זאת כעת.זוהי המבחנה המכילה את התמיסה התוך-תאית שלנו. היא הופשרה. אנו נסביב אותה במשך כשתי עד שלוש דקות בצנטריפוגה קטנה, וזה אמור להספיק כדי להוציא כל חלקיקי אבק גדולים מהתמיסה.כעת אני פשוט מושך את השכבה העליונה, התמיסה שסובבנו זה עתה, תוך הקפדה לא לערבב אותה, ומעביר אותה למבחנה נקייה, כאשר אני שואב כ-90% ממנה. אני מנסה שוב לא להגיע לכמות הקטנה שנותרה. לכן אעצור בערך בנקודה זו.אני מניח זאת על קרח באופן מיידי כדי שיישאר קר במהלך הניסוי. זהו שלב חשוב מאוד. זוהי אחת מהפיפטות שלנו.אנו משתמשים בזה להקלטות תוך-תאיות. מדובר בזכוכית סיליקה בעלת דפנות עבות, קוטר חיצוני של שני מילימטרים וקוטר פנימי של 1.16 מילימטרים. ראשית, אנו מבצעים מילוי אחורי של הפחית.לכן אנו מפעילים יניקה, מכניסים את הפ pipette לתוך תמיסת ההקלטה ומפעילים יניקה כדי לנסות למלא את קצה הפ pipette, שאינו יתמלא בשום דרך אחרת. לאחר שעשינו זאת, אנו לוקחים צינור קפילרי וממלאים את שאר האלקטרודה על ידי תפיסת החלק האחורי של הפ pipette. זוהי טכניקה פיזיולוגית סטנדרטית המבוצעת על ידי תנועת נקישה מהירה.קיים סיכון לשבירה של קצה הפיפטה, אך אם לא תעשו זאת, לרוב ייווצרו בועות אוויר. כעת נניח אותה על מעמד הפיפטה, המחובר לראש המגבר של ה-patch clamp. שם נמצא תיל של כסף כלוריד.חוט כסוף כלורי בא במגע עם התמיסה התו-תאית, דבר המאפשר לנו למדוד את הפעילות החשמלית בטרמינל הפרה-סינפטי. לפיכך, אנו מחפשים פרוסה המכילה מספר רב של CAEs; אנו שואפים לצפיפות גבוהה של CAEs.כעת אנו מחפשים את הגרעין המדיאלי של גוף הטרפז, המכונה MNTB, ושם נמצא הטרמינל המהווה את ה-calyx app, או שזהו ה-calyx app. לכן, מה שאנו עושים הוא להתחיל לסרוק את הפרוסה. לדוגמה, שם יש לנו calyx שנמצא מעט עמוק מהפני השטח ואין הרבה שניתן להיאחז בו, לכן אנו פשוט ממשיכים לסרוק לרוחבה.זהו הגביע שאליו אנו שואפים להגיע. סימנתי שני סימנים על המסך, שם תמוקם הפפיתה. ניתן לראות את חלק הגביע שבו אמוקם את הפפיתה כשתרד למטה.אפעיל לחץ חיובי כך שיידחף כלפי מעלה אל מול הגביע (calyx), ולאחר מכן אשחרר את הלחץ החיובי. הגביע ידחף אז כלפי מעלה אל מול הפיפטה, ובנקודה זו אפעיל שאיבה עדינה מאוד ואנסה לשאוב ולדחוף את הממברנה או לגרום לממברנה להיסגר על קצה הפיפטה. בסדר, שחררתי את הלחץ החיובי.וכעת אחיל שאיבה. כאן אנו מחילים פולס של 5 millivolt, או למעשה פולס של 4 millivolt. אוקיי, זהו זה. אוקיי.כעת אנו מורידים את פוטנציאל הממברנה למינוס 80, כדי לבטל את הזינוק העובר המהיר. כעת נעבור למצב תא שלם (whole cell). אחיל שאיבה עדינה ואנסה להגיע למצב תא שלם.טרנסיאנטים אלו של הטענה מעידים על כך שהפיפטה והתא הם כעת רציפים, ושהתקבלה הקלטה מלאה. זהו עוד צילום נהדר. הגוון האדום הבהיר יותר שם היה עקומת הקיבוליות, וניתן לראות שיש שם קפיצה פתאומית ולאחר מכן היא ירדה.ובכן, הרגשתי עבורכם כעת את הטכניקות הבסיסיות להשגת הקלטות מטרמינל פרה-סינפטי מסוג calyx. הראיתי לכם כיצד להכין את הפרוסות המכילות את הגרעין המדיאלי של גוף הטרפזואיד (medial nucleus of the trapezoid body). שם תוכלו למצוא את ה-calyxes.והראיתי לכם את הטכניקות לבחינת הפרוסות. אתם תעברו על כל אחת מהפרוסות, ותחפשו את הפרוסה שבה נמצא מספר הגדול ביותר של caly על פני השטח. לאחר מכן, תחפשו את ממבט ה-caly הגדול ביותר שתוכלו למצוא ותבצעו עליו רישום patch clamp.כמו כן, הדגמתי בפניכם את הטכניקות להקלטת patch clamp, ואלו הן טכניקות סטנדרטיות להקלטת patch clamp.

methods-for-patch-clamp-capacitance-recordings-from-the-calyx

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

זה נועד כהקדמה תיקון הקלטה מהדק מ ביציות Xenopus laevis. היא משתרעת על הסרת vitelline קרום, היווצרות חותם gigaohm (gigaseal), ואת ההמרה אופציונלי של תיקון כדי טופולוגיה מחוץ הקצוב.

הצמד תיקון הקלטה של ​​תעלות יונים מתבטא ביציות Xenopus

יונית הנוכחי של BK ערוצי נרשם באמצעות מהדק טכניקות תיקון. ערוצי BK באים לידי...

הצמד תיקון וטכניקות זלוף עבור לימוד תעלות יונים מתבטא Xenopus ביציות

אנו מספקים פרוטוקול צעד אחר צעד עבור הקלטת כל תא תיקון מהדק של סידן סידן שחרור פעילה (CRAC) זרמים היקפי mononuclear תאים שמקורם בדם אנושי לימפוציטים-T.

Whole Cell-הקלטה של ​​סידן סידן שחרור פעילה (CRAC) זרמים האדם לימפוציטים-T

כאן אנו מתארים פרוטוקול להכנת אגר, מוטבע פרוסות רשתית המתאימים electrophysiology ו Ca2 + הדמיה. שיטה זו מאפשרת ללמוד סרט מסוג הסינפסות microcircuits הרשתית באמצעות תיקון ישיר, מהדק הקלטות של אחד מסופי העצב presynaptic.

Patch-clamp מדידות קיבול ו Ca 2 + הדמיה על מסופי עצב יחיד ב Slices רשתית

פרוטוקול זה מתאר טכניקה הנקראת אלקטרופיזיולוגיה של מהדק טלאי שלם, שהיא שיטה לחקר תכונות חשמליות של נוירוני מאוטנר ותאים רטיקולוספינליים אחרים בעוברים של דגי זברה.

אלקטרופיזיולוגיה של מהדק טלאי תאי שלם: שיטה לחקר תכונות חשמליות של נוירונים

פיתחנו הכנת מוח השדרה שלמה כבל כדי להקליט ולעקוב אחר פעילות חשמלית באמצעות הקלטת מהדק תיקון מתאי העצב ותאי מאוטנר reticulospinal אחרים בעוברי דג הזברה. לפיכך, אנו מסוגלים להקליט זרמים מעוררים ומעכבים הסינפטי, פעילות ערוץ מתח מגודרת ופוטנציאל פעולה מתא העצב מרכזי בעובר מתפתחת.

תיקון הקלטות קלאמפ מתאים עוברי דג הזברה מאוטנר

שתואר כאן הוא הליך לקבלת משתרע הקלטה הנוכחית ארוך מערוץ יון אחד עם טכניקת התיקון-clamp מצורף תא. שיטה זו מאפשרת להתבוננות, בזמן אמת, את הדפוס של תצורות ערוץ פתוחות קרובים העומדות בבסיס האות הביולוגית. נתונים אלה להודיע ​​על נכסי ערוץ בממברנות ביולוגיות באין מפריע.

הקלטת תיקון מהדק מצורף תא אחד ערוצים

לאחר אקסוציטוזיס, קרום הפלזמה המאוחה מאוחזר בתהליך המכונה אנדוציטוזיס. מנגנון זה מתקן שלפוחיות סינפטיות חדשות לסבב השחרור הבא. אירועים אנדוציטיים בודדים נלכדים ומנותחים באמצעות הקלטות הקיבול המחוברות לתאים בתאי כרומפין יותרת הכליה של העכבר.

שיטות למדידת קיבול מצורף סלולארי בתא עכבר הכליה Chromaffin

הפרוטוקול הנוכחי מתאר שיטה יעילה לרכישה דינמית בזמן אמת של זרמי תעלה אשלגן מגודר מתח (Kv) בקרדיומיוציטים H9c2 באמצעות טכניקת הידוק טלאי של תאים שלמים.

רישום זרם אשלגן תלוי מתח על קרדיומיוציטים H9C2 באמצעות טכניקת הידוק טלאי של תאים שלמים

זהו מדריך כדי לשנות את הצורה של micropipettes זכוכית. באופן ספציפי, באמצעות חום ולחץ אוויר להתחדד הוא התרחב מבלי להגדיל את פתיחת קצה, המוביל פיפטה התנגדות נמוכה יותר. זה קריטי כדי להשיג הקלטות רעש נמוך של תאים קטנים אך שימושית ביישומים רבים.

לחץ לליטוש pipettes עבור Patch-clamp הקלטה משופרים

למדו שיטות הצמדה לתיקון קלטות קיבול בטרמינל הפרה-סינפטי Calyx of Held במוח העכבר. הפרוטוקול מדגים הכנת רקמת מוח, שימור בחמצן וטכניקות אלקטרופיזיולוגיות לחקר שחרור נוירוטרנסמיטרים.

שיטות הצמד תיקון הקלטות קיבול מן Calyx

גלה סרטונים נוספים