הערכת הפנמה של חלבוני פני השטח של המטרה באמצעות נגזרת ביוטין

טפל באסטרוציטים בקליפת המוח של העכבר עם נגזרת ביוטין ניתנת לניתוק.

דגירה בטמפרטורה נמוכה כדי למנוע הפנמת חלבון ולהקל על היצמדות ביוטין לחלבוני פני המטרה.

שוטפים ומוסיפים מדיום חם, ואז דוגרים כדי לגרום להפנמה של החלבונים הביוטיניליים.

יש לשטוף ולטפל בחומר הפחתה אטום לממברנה כדי לבקע את הביוטין הלא מופנם.

הוסף מגיב מרווה כדי לעצור את התגובה ולשטוף.

קצרו את התאים והצנטריפוגה. הסר את ה-supernatant.

הוסף מאגר ליזה כדי ליז את התאים, ושחרר את החלבונים הביוטיניים הלא ביוטיניים והמופנמים.

צנטריפוגה כדי לזרוק את פסולת התא.

אספו את החלבונים המכילים סופרנטנט, הוסיפו חרוזי סטרפטווידין-אגרוז וערבבו כדי ללכוד את החלבונים הביוטיניים.

צנטריפוגה כדי לגלול את החרוזים ולהשליך את הסופרנטנט.

הוסף חיץ טעינה וחום כדי לפרק ולשחרר את החלבונים מהחרוזים.

העבירו את החלבון על ג'ל והעבירו אותו לקרום סופג.

זיהוי באמצעות נוגדנים ראשוניים ומשניים כדי לדמיין פס חלבון מובחן, המאשר הפנמה מוצלחת של חלבון.

ראשית, הסר את תרביות האסטרוציטים מהחממה ושאף את המדיום. לאחר מכן, שטפו את התאים שלוש פעמים עם 4 מיליליטר CM-PBS צונן והניחו את הכלים על קרח כתוש. שאפו את ה-CM-PBS ולאחר מכן פיפטה 3 מיליליטר של מאגר ביוטין לכל צלחת. הטו את הכלים קדימה ואחורה כמה פעמים כדי להבטיח שהחיץ מפוזר היטב, והשאירו אותם על קרח למשך 30 דקות.

לאחר