Name: FSL בונה: שיטה פשוטה שינוי Cell / Virion משטחים עם מגוון רחב של סמנים ביולוגיים מבלי להשפיע ליכולת הקיום שלהם (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-08-05T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 38 s
Description: למדו שיטת FSL לתיוג משטחי תאים חיים וויריונים במהירות ובבטיחות מבלי לפגוע בחיוניותם. השיטה מאפשרת שילוב יציב של סמנים ביולוגיים לניתוח בזרימה ומיקרוסקופיה.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים מודים דן ובס מ סיגמא אולדריץ להצגת וידאו. אנו מודים גם דון סניף, Evgenii צ&#39;רנישב, סקוט Chesla, אליזבת Hadac, אמנדה הריסון, דמיאן היתקוט, אניקה Hult, צ&#39;ואן צ&#39;ינג-Lan, סוזנה מקינטוש, Sarvani Komarraju, אלנה Korchagina, קרוליין אוליבר, מרטין אולסון, סטיבן פרקר, איגור Rodinov, אלכסנדר Tuzikov, ואלינור וויליאמס לתוצאות שלהם תרומות סינתזה העיצוב, של מבנים FSL וקביעת הפעילות הביולוגית.

<ol><li>Waehler, R., Russell, S. J., Curiel, D. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineering+targeted+viral+vectors+for+gene+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Genet%22%5BJournal%5D)">Engineering targeted viral vectors for gene therapy.</a> Nat. Rev. Genet. 8, 573-587 (2007).</li>
<li>Strable, E., Finn, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+modification+of+viruses+and+virus-like+particles%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Top.+Microbiol.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Chemical modification of viruses and virus-like particles.</a> Curr. Top. Microbiol. Immunol. 327, 1-21 (2009).</li>
<li>Henry, S., Bovin, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+development+of+synthetic+peptidolipids%2C+glycolipids+and+other+lipid-linked+structures+to+create+designer+red+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion%22%5BJournal%5D)">The development of synthetic peptidolipids, glycolipids and other lipid-linked structures to create designer red cells.</a> Transfusion. 48, Suppl 2S. 194A-194A (2008).</li>
<li>Frame, T., Carroll, T., Korchagina, E., Bovin, N., Henry, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthetic+glycolipid+modification+of+red+blood+cell+membranes%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion%22%5BJournal%5D)">Synthetic glycolipid modification of red blood cell membranes.</a> Transfusion. 47, 876-882 (2007).</li>
<li>Hult, A. K., Frame, T., Henry, S., Olsson, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow+cytometry+evaluation+of+red+blood+cells+transformed+with+variable+amounts+of+synthetic+A+and+B+glycolipids%5BTitle%5D)+AND+%22Vox+Sang%22%5BJournal%5D)">Flow cytometry evaluation of red blood cells transformed with variable amounts of synthetic A and B glycolipids.</a> Vox Sang. 95, Suppl 1. 180-180 (2008).</li>
<li>Henry, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modification+of+red+blood+cells+for+laboratory+quality+control+use%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Hematol%22%5BJournal%5D)">Modification of red blood cells for laboratory quality control use.</a> Curr. Opin. Hematol. 16, 467-472 (2009).</li>
<li>Oliver, C., Blake, D., Henry, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+neutralization+of+anti-A+and+successful+transfusion+of+A+antigen+incompatible+red+cells+in+an+animal+model%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion%22%5BJournal%5D)">In vivo neutralization of anti-A and successful transfusion of A antigen incompatible red cells in an animal model.</a> Transfusion. , Forthcoming (2011).</li>
<li>Oliver, C., Blake, D., Henry, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+transfusion+reactions+and+predicting+in+vivo+cell+survival+with+kodecytes%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion%22%5BJournal%5D)">Modeling transfusion reactions and predicting in vivo cell survival with kodecytes.</a> Transfusion. , Forthcoming (2011).</li>
<li>Heathcote, D., Carroll, T., Wang, J. J., Flower, R., Rodionov, I., Tuzikov, A., Bovin, N., Henry, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+antibody+screening+cells%2C+MUT%2BMur+kodecytes%2C+created+by+attaching+peptides+onto+erythrocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion%22%5BJournal%5D)">Novel antibody screening cells, MUT+Mur kodecytes, created by attaching peptides onto erythrocytes.</a> Transfusion. 50, 635-641 (2010).</li>
<li>Hadac, E. M., Federspiel, M. J., Chernyy, E., Tuzikovb, A., Korchagina, E., Bovin, N. V., Russell, S. J., Henry, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorescein+and+radiolabeled+Function-Spacer-Lipid+constructs+allow+for+simple+in+vitro+and+in+vivo+bioimaging+of+enveloped+virions%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol+Meth%22%5BJournal%5D)">Fluorescein and radiolabeled Function-Spacer-Lipid constructs allow for simple in vitro and in vivo bioimaging of enveloped virions.</a> J Virol Meth. 10, Forthcoming (2011).</li>
<li>Blake, D., Lan, A., Love, D., Bovin, N., Henry, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorophore-kodecytes+-+fluorescent+function-spacer-lipid+%28FSL%29+modified+cells+for+in+vitro+and+in+vivo+analyses%5BTitle%5D)+AND+%22FEBS+J.%22%5BJournal%5D)">Fluorophore-kodecytes - fluorescent function-spacer-lipid (FSL) modified cells for in vitro and in vivo analyses.</a> FEBS J.. 277, Suppl 1. 199-199 (2010).</li>
<li>Harrison, A. L., Olsson, M. L., Brad Jones, R., Ramkumar, S., Sakac, D., Binnington, B., Henry, S., Lingwood, C. A., Branch, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+synthetic+globotriaosylceramide+analogue+inhibits+HIV-1+infection+in+vitro+by+two+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Glycobiology%22%5BJournal%5D)">A synthetic globotriaosylceramide analogue inhibits HIV-1 infection in vitro by two mechanisms.</a> Glycobiology. 27, 515-524 (2010).</li>
<li>Barr, K., Diegel, O., Parker, S., Bovin, N., Henry, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Function-Spacer-Lipid+%28FSL%29+constructs+enable+inkjet+printing+of+blood+group+antigens%5BTitle%5D)+AND+%22FEBS+J%22%5BJournal%5D)">Function-Spacer-Lipid (FSL) constructs enable inkjet printing of blood group antigens.</a> FEBS J. 277, Suppl 1. 235-235 (2010).</li>
<li>Lan, C. -C. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Modeling+inflammatory+bowel+disease+%5B%5D%22">Modeling inflammatory bowel disease [dissertation]</a>. , University of Auckland. Auckland. (1988).</li>
</ol>

דבורה א &#39;בלנק סטיבן מ&#39; הנרי העובדים ובעלי המניות של KODE ביוטק מוגבלת בעל פטנט של הטכנולוגיה KODE. דן ובס הוא עובד של סיגמא אולדריץ, אשר מימנה את הייצור של מאמר זה וידאו.

תאים שינוי ו virions עם בונה FSL היא טכניקה פשוטה מאוד חזקים 3-11. כדי לתאר ולהבחין FSL לבנות תאים שונה ו virions מתאי ללא שינוי, הם מכונים kodecytes ו kodevirions בהתאמה 6-10, אך רק כאשר הקבוצה הציגה תפקודית ניתן להראות להיות נוכח על הממברנה שלהם. כאשר kodecytes מיוצרים עם ריכוזים שונים של מבנים FSL, הם יכולים להיות מכונה על ידי ריכוז של הפתרון FSL לבנות השתמשו כדי ליצור אותם, למשל 15 מיקרוגרם / מ&quot;ל ​​kodecytes, או אם אחד או יותר FSL לאחר מכן נעשה שימוש במונח משולב, לדוגמא: A + ביוטין kodecytes 7,8. כאשר תאים שונים כדי להשוות, לרבות סוג תא בתיאור מומלץ, למשל אדום ביוטין תא kodecytes או kodecytes ביוטין רירית הרחם 7,8. למרות תהליך הכניסה היא מאוד חזקה הכניסה (אמנם עם תעריפים שונים) תתרחש על פני טווח טמפרטורה גדול 4-37 ° C ו בתוך דקות עד שעות, כדי להשיג שליטה הכניסה לשחזור קפדנית של זמן מגע, טמפרטורה, ריכוז FSL ( כולל ניסוח diluent), וכן ריכוז במידה פחותה תא נדרשים. עד היום, כל המבנים FSL ניתן להשתמש כדי לשנות את התאים על ידי טכניקה זהה 4-11, אולם צפוי כי בתנאים מסוימים יהיו נוחים יותר זרימת עבודה ו / או בדרישות הטיפול האופטימלי של התאים / virions להיות שונה . הריכוז המדויק FSL כדי להשיג את האפקט הרצוי צריך להיקבע על ידי המשתמש 4. FSL כתוצאה לבנות תאים שונה / virions בדרך כלל ניתן להשתמש באותו אופן כמו תא virion ללא שינוי / במערכות ביולוגיות או אנליטי 4-11. כמו בונה FSL יהיה לאט elute ממשטחי שונה כאשר במגע עם בתמיסות 7,8, או להיות נצרך על ידי תאים פעילים 11, נושאים אלה יש לקחת בחשבון ביחס לרמת האות או פעילות שהושגו על פני תקופות זמן. Kodecytes יכול להיות קבוע (למשל glutaraldehyde / פורמלין) לאחר הכניסה בתנאי מקבע אינו מכיל שומנים משחררי ממיסים את הקבוצה פונקציונלי תואם מקבע. תאים קבוע לחילופין יכול להיות שונה עם בונה FSL. בנוסף לשינוי של משטחי תאים virion בונה FSL יכול גם להיות חדורים ישירות למחזור הדם של חיות מעבדה גרימת שינוי vivo של תאים במחזור 7 ו לעכב 12 וירוסים, רעלים, 12 ונוגדנים 7. בונה FLS יש גם שימש לקשט ליפוזומים והוא יכול להיות מודפס על גבי משטחי נייר 13, שם הם לשתק, ולאחר מכן יכול לשמש מבחני אבחון. היכולת לשנות בקלות תאים חיים עם מגוון הולך וגדל של בונה FSL צריך להוכיח להיות מחקר שימושי כלי פיתוח לחקר הביולוגיה פני התא.

<img src="/files/ftp_upload/3289/3289table1.jpg" alt="טבלה 1"> טבלה 1. זמין מסחרית בונה FSL המתואר במאמר זה.

fsl בונה: שיטה פשוטה שינוי cell / virion משטחים עם מגוון רחב של סמנים ביולוגיים מבלי להשפיע ליכולת הקיום שלהם

FSL Constructs: A Simple Method for Modifying Cell/Virion Surfaces with a Range of Biological Markers Without Affecting their Viability

היכולת לשנות / לדמיין משטחים ביולוגיים, ולאחר מכן ללמוד את התא שונה / virion במגוון במבחנה בסביבות vivo חיונית להשגת תובנה נוספת לתוך הפונקציה של מולקולות ספציפיות או את הישות כולה. מחקרים של שינוי פני השטח ביולוגיים מוגבלים בדרך כלל הנדסה גנטית של האורגניזם או את הקובץ המצורף קוולנטיים של moieties כימית 1,2 שטח פני התא. אולם אלה טכניקות מסורתיות לחשוף את התא המגיבים כימיים, או שהם דורשים מניפולציה משמעותי כדי להשיג את התוצאה הרצויה, מה שהופך אותם מסורבל, והם עשויים גם להשפיע על הכדאיות בשוגג / הפונקציונליות של התא שונה. שיטה פשוטה מזיק לשנות את פני השטח של התאים נדרשת. לאחרונה טכנולוגיה חדשה, טכנולוגיה KODE הציגה מגוון של מבנים הרומן המורכב משלושה מרכיבים: קבוצה ראש פונקציונלי (F), spacer (S) וזנב השומנים (L) ידועים כמו פונקציה ליפידים-Spacer או FSL constructs3. Spacer (S) נבחרה לספק לבנות כלומר מסיסות במים, עדיין יהיה ספונטני ביציבות לשלב קרום. FSL לבנות moieties תפקודית (F) עד כה כוללים מגוון של saccharides כולל קבוצה הקשורות דם הגורמים, חומצות sialic, סוכרים hyaluronan, fluorophores, ביוטין, radiolabels, וכן מגוון של פפטידים 3-12. בונה FSL שימשו עוברים, זרע שינוי, דג הזברה, לתאי האפיתל / רירית הרחם, כדוריות דם אדומות, ו virions ליצור בקרות איכות מערכות ולוחות אבחון, לשנות הדבקה תא / אינטראקציה / הפרדה / immobilization, ועל במבחנה vivo הדמיה של תאים / virions 3-12. התהליך של שינוי תאים / virions הוא גנרי ופשוט ביותר. ההליך הנפוץ ביותר הוא הדגירה של תאים (בתקשורת חינם שומנים בדם) עם פתרון עבור FSL בונה במשך 1-2 שעות ב 37 ° C 40-10. במהלך הדגירה FSL המבנים באופן ספונטני לשלב הממברנה, והתהליך הושלם. כביסה היא אופציונלית. תאים שונה על ידי בונה FSL ידועים כמו kodecytes 6-9, בעוד virions הם kodevirions 10. FSL בונה כמו חליטות ישיר kodecytes / kodevirions נעשה שימוש במודלים של בעלי חיים ניסיוניים 7,8,10. כל kodecytes / kodevirions להופיע כדי לשמור על חיוניות הרגיל שלהם ואת הפונקציונליות תוך השגת את הפונקציה החדשה של מחצית F 7,8,10,11. השילוב של dispersibility בתקשורת ביולוגית, התאגדות ספונטנית לתוך קרום התא, וכן רעילות נמוכה נראית לעין, שעושה FSL בונה כלי מחקר חשוב למחקר של תאים virions.

פונקציה-Spacer-ליפידים (FSL) בונה לאפשר את תכונות פני השטח של תאים חיים virions להיות שונה ללא אובדן חיוניות. השיטה דורשת מגע פשוט רק פתרון לבנות FSL עם תא / virion ושילוב משטח יציב ספונטנית מתרחשת.

FSL בונה: שיטה פשוטה שינוי Cell / Virion משטחים עם מגוון רחב של סמנים ביולוגיים מבלי להשפיע ליכולת הקיום שלהם

היכולת לשנות/להדגים משטחים ביולוגיים, ולאחר מכן לחקור את התא/הוויריון המשונה במגוון סביבות in vitro ו-in vivo, היא חיונית...

המטרה הכללית של פרוצדורה זו היא לסמן באופן בטוח ומהיר את פני השטח של תאים חיים או S באמצעות מבנים ביו-אקטיביים. דבר זה מושג תחילה על ידי הכנת תמיסת מקשר תפקודי, ליפיד או מבנה FSL. לאחר מכן, חלק שווה מתמיסת המבנה מעורבב עם חלק שווה של תמיסת התאים או ה-VIRs.כשלב שלישי, התערובת מדגירת למשך 60 דקות ב-37 degrees Celsius. השלב הסופי הוא שטיפת התאים או הציטים המעובדים, או ה-VIRs המעובדים, ושימוש בהם בניסויים כרגיל. לבסוף, ניתן להדגים תאים חיים שעברו שינוי פני שטח או S באמצעות כל טכניקות הניתוח הניסוייות השגרתיות, כולל פלואו Cytometry, מיקרוסקופיה ואגלוטינציה.היתרון המרכזי של טכניקה זו על פני שיטות קיימות, כגון סימון קוולנטי, הוא שהיא מהירה, חסונה, גמישה ואינה משפיעה על חיות התא או ה-Varian שעברו שינוי. כדי להכין תמיסת מומס של מבנה ה-FSL, ראשית, הוסף 1 mL של מדלל לבקבוק המוצר כדי להמיס מחדש את מוצר ה-FSL היבש, ובכך ליצור תמיסת מומס בריכוז של 1 mg/mL. בצע סוניקציה לבקבוק למשך 30 שניות, חלק את תמיסת המומס למכלים סטריליים של 100 µL, ואחסן את המכלים בטמפרטורה של 2°C עד 8°C למשך עד שבוע אחד.כדי להכין תמיסות עבודה של מבנה FSL להחדרה רגע לפני השימוש, בצעו סוניקציה שוב לתמיסה למשך 30 שניות כדי להומוגניזציה של תאים שאינם תקינים, ולאחר מכן דללו את מבנה ה-FSL ואת הבאפר לריכוז הנדרש. שמרו את תמיסת העבודה בטמפרטורה של 2 עד 8 °C למשך עד שבוע. לאחר השעיה (resuspension) במצע נטול ליפידים או ב-PBS, סבבו את התאים בצנטריפוגה עבור מודפיקציית FSL ללא ליפידים לא קשורים. לאחר מכן, ארזו את התאים ב-100 µL של מדלל; שטפו את התאים עבור הביקורות תחת אותם תנאים ל-100 µL של תאים לא מודפקים.במידת הצורך, הוסיפו 100 µL של דילול מתאים של תמיסת FSL. במקביל, צרו בקרים שליליים עם תמיסות FSL לא קשורות ו/או PBS. לאחר מכן, דגרו את כל תתי-אוכלוסיות התאים למשך שעה אחת בטמפרטורה של 37 °C לאחר הדגירה.שטפו את כל התאים פעמיים במצע ללא ליפידים או ב-PBS כדי להסיר מבני FSL חופשיים, והכינו תגובה מתאימה במצע ללא ליפידים. לאחר השלמת תהליך המודיפיקציה של ה-FSL, ניתן לאחסן את התאים בטמפרטורה של ארבע עד שמונה מעלות צלזיוס. מבני FSL מורכבים משלושה רכיבים עיקריים: הראש התפקודי או F, שיכול להיות מגוון של קבוצות בעלות תפקוד ביולוגי.הספייסר RS תוכנן כדי להוביל לריווח של הראש הפונקציונלי מהממברנה במטרה לשפר את הפיזור במים ולהיות לא ריאקטיבי עם סרום אנושי והליפיד DAL או L, מה שמאפשר למבנה להשתלב באופן ספונטני במשטחים ארבע. קבוצות FSL מייצגות מוצגות בחמש התמונות הבאות. עוברים של עכברים חיים סומנו ישירות באמצעות FSL fluorescein למשך שעותיים ב-37 °C בתוך מצע תרבית תאים ללא סרום, נשטפו ולאחר מכן נבחנו תחת מיקרוסקופ פלואורסצנציה.בתמונה ראשונה זו ניתן לראות עובר בשלב שני תאים עם שיקוף (mirroring), נטול zop palita. הצביעה העזה במרכז העובר מייצגת צביעה קלאסית של הגוף הקוטבי. בשתי התמונות הבאות מוצגים עוברי שיקוף בשלב ארבעה תאים ושמונה תאים, נטולי zop palita, המראים צביעה דהויה של התאים שנמצאים מחוץ למיקוד (focus) של המיקרוסקופ.תמונה שלוול פאליטה (zop palita) חופשי של עובר בשלב 16 תאים המראה שיקוף מוצגת בתמונה אחרונה זו של עוברים חיים עם שיקוף המסומנים ב-FSL fluorescein. עוברים שלמים בשלב הבלסטולה עם שיקוף בני ימים ארבעה עד חמישה, כאשר הן העובר והן ה-zop LUCITA מסומנים, מוצגים בסדרת התמונות הבאה. סימון FSL fluorescein של דגי זברה מוצג כאן. תמונה ראשונה זו היא של מיקרו-אנגיוגרפיה של לרבה של דג זברה 52 שעות לאחר ההפריה, לה הוזרק FSL fluorescein ישירות למחזור הדם.ניתן לצפות כאן בצביעה של מערכת כלי הדם של דג הזברה. תאי כליה של דג זברה (ZK cytes) או תאי רקמה הטרוגניים של כליה של דג זברה, שסומנו ב-FSL fluorescein, הוכנו exvivo והוזרקו באמצעות מיקרו-הזרקה למחזור הדם של דג זברה רקפן 52 שעות לאחר ההפריה. תצפיות in vivo של ה-ZK cytes בוצעו שעתיים לאחר ההזרקה באמצעות דימות של מערכת כלי הדם תחת פלואורסצנציה במיקרוסקופיה של צילום רצף (time-lapse). מוצג כאן פריים בודד מהסרטון, שבו תאים גדולים הנעים לאט או תאים ללא תנועה מסומנים בחצים כתומים, ותאים הנעים במהירות, שנראים מטושטשים עקב תנועתם, מסומנים בחצים ירוקים. בתמונה זו מוצג סימון ב-FSL fluorescein באמצעות ספיגה פומית של המבנה, שהושגה על ידי טבילת עיברי דג זברה במצע המכיל FSL fluorescein למשך עד חמישה ימים.מיקרוסקופיית שדה בהיר של דגי הזברה המטופלים ב-FSL fluorescein משמאל תואמת לתמונה הפלואורסצנטית הסמוכה מימין. הפלואורסצנציה התמקדה בעיקר בדרכי העיכול. לא נצפתה צביעה בעוברים של קבוצת הביקורת שלא טופלו המוצגים כאן.כאן מוצג נגיף הסטומטיס וסיקולרי (vesicular stomatitis virus) או VSV שסומן ישירות עם 10 µg/mL של פלואורסצאין FSL למשך שעתיים ב-37 °C, ולאחריו קיבוע ב-4% פאראפורמאלדהיד, ולאחר מכן ניתוח באמצעות סריקת FAST המראה כי לא נדרח טיהור של חלקיקי ה-VSV לאחר סימון ה-FSL. היסטוגרמה זו מראה תאי אשכים של חזיר שהודבקו בנגיפי שפעת אנושית H1N1 מזן Puerto Rico 8 19 34 שסומנו בפלואורסצאין FSL.תאים לא מזוהרים שאינם נגועים מיוצגים על ידי הקו השחור, בעוד שהיתוך של נגיף H1N1 עם תאי חזיר, שהביא לפלואורסצנציה, מסומן על ידי הקו האדום. בסדרה הבאה של תמונות, התאים סומנו תחילה ב-FSL biotin למשך שעה אחת ב-37 °C, לאחר מכן נשטפו והגיבו עם avadon המסומן ב-Fluor 4, ואז נשטפו ועברו הרכבה רטובה למיקרוסקופיה פלואורסצנטית. התמונה הראשונה מציגה תמונת קונפוקלית מורכבת של בלאסטוציסטה של עובר עכבר, ואיור זה מציג חתך קונפוקלי מרכזי של העובר מהתמונה הקודמת.להלן תאי זרע אנושיים חיים וניידים. הטשטוש מופיע כתוצאה מתנועתם. תמונה נ Representative ברורה יותר של תאי זרע אנושיים שקיבוע ב-4% Paraformaldehyde לאחר ההחדרה ניתן לראות בדמות זו כאן.תאי דם אדומים של בני אדם המסומנים בביוטין FSL מוצגים עם קיבוע ב-4%paraform aldehyde; הקיבוע אינו משפיע על סימון ה-FSL כפי שמוצג בשתי הדמויות הבאות. כאן, ניתן להבחין בתאי קרצינומה של רירית הרחם אנושית מסוג RL 95 שקובעו ב-4%parmal. לעומת זאת, בתמונה זו, תאי הקרצינומה של רירית הרחם האנושית RL 95 אינם מקובעים. לא נצפו הבדלים ממשיים בסימון בין שתי התמונות, עם או בלי קיבוע.כאן מוצגים משמאל RBC cytes מסומני FSL biotin שנצפו בדגימת דם שנלקחה שעתיים לאחר עירוי תוך-ורידי של התאים; מימין, התאים נבחנו תחת מיקרוסקופיה של אור, ואותו שדה תאים נבחנו תחת פלואורסצנציה, כאשר ניתן לזהות את שני ה-cytes הנוכחים בצבע ירוק. חישוב היחס בין ה-cytes לתאים שאינם מסומנים יכול לשמש כאינדיקטור להישרדות. תמונת התא האחרונה עם סימון FSL biotin מראה biotin cytes חיים של אנדומטריום אנושי שחזותם הועגבה באמצעות קישור לחרוזי abated.סדרה זו של תמונות מציגה אינטראקציות של מבנה FSL עם סממנים של Gruppen דם. התמונה הראשונה מציגה תאי GLI אדומים של בני אדם המצופים בריכוז של 500 microgram per milliliter של FSLG שנבדקו מול דילולים של סרום אנושי. תאים אדומים אנושיים אינם מגיבים באופן טבעי לאנטיגן Xena GALI.כך, ניתן להשתמש ב-cytes כדי לכמת את רמות הנוגדנים בסרום. בדוגמה זו, נקבע כי למטופל יש תיתר נוגדנים (antigen titer) של 1 ל-32, זאת על ידי יצירת cytes עם רמות FSL יורדות. בדומה לקביעת תיתר נוגדנים, ניתן לקבוע את רמת האנטיגן האופטימלית לזיהוי נוגדנים, וניתן ליצור תאים שיתנו תוצאה חיובית רק כאשר רמת הנוגדנים עולה על תיתר ספציפי.רמת האנטיגן ב-FSL הנדרשת לקבלת תוצאה חיובית תלויה באיכות וברמה של הנוגדן המזוהה. בדרך כלל, עבור אנטיגנים פחמימתיים, תמיסת FSL בריכוז של 100 micrograms per milliliter תביא לתגובה חיובית חזקה. תאי דם אדומים אנושיים מקבוצת O שעברו שינוי כדי להגיע לרמה ספציפית של אנטיגן, או מה שמכונה תאים סטנדרטיים.Cytes משמשים לכימות מדויק וניתן לשחזור של antia בסרום אנושי. בדוגמה זו, ה-cytes הוכנו מתאי הדם האדומים של התורם, ורמת ה-antia בסרום של קבוצת דם O שנבדק נמצאה להיות אחת ל-32. מוצג כאן במבחנה השישית, שבה אנטיגנים של קבוצות דם A ו-B שהוכנסו בו-זמנית לדגימה אחת של תאי דם אדומים מקבוצת דם O, כדי ליצור cytes מסוג week A, week B.ניתן להשתמש בתאים אלו למטרות בקרת איכות של VO. ניתוח של תאי "שבוע A" ו"שבוע B" שנוסחו באופן ספציפי, שנבדקו מול ריאגנטים של anti-A ו-anti-B, מראה את התגובות החלשות המצופות כפי שמוצג בדמות זו, כאשר התגובות מתרחשות באזור התחתון המרכזי של המבחנות. ניתן לבצע טכניקה פשוטה זו תוך שעתיים אם היא מבוצעת כראוי.

fsl-constructs-simple-method-for-modifying-cellvirion-surfaces-with

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

שיטת מדידה של קינטיקס Fusion ויראלי ברמה חלקיק יחיד

חלקיקים adenovirus מתוכננים להכיל אנלוגי טבעי חומצת אמינו azidohomoalanine או סוכר...

שינוי Chemoselective של משטחים ויראלי באמצעות כימיה לחץ Bioorthogonal

פרוטוקול מהיר ומודולרי ליצירת וירוסי חיסון רקומביננטיים המבטאים חלבונים מתויגים פלואורסצנטיים בו זמנית בשיטת הבחירה הדומיננטית החולפת מתואר כאן.

מתודולוגיה לדור היעיל של חלבונים נגיפי חיסון מתויגים בפלורסנטיות

ההחזקה של virions על פני השטח היא דרישה להדמיית virion יחיד על ידי הדמיית פלואורסצנטיות ברזולוציה סופר או מיקרוסקופיה כוח אטומי (AFM). כאן אנו מדגימים שיטת הכנה לדוגמה להדבקה מבוקרת של virions למשטחי זכוכית המתאימים לשימוש AFM והדמיה פלואורסצנטית ברזולוציה סופר.

הכנה לדוגמה למיקרוסקופיה של כוח אטומי של Virion יחיד והדמיית פלואורסצנטיות ברזולוציה גבוהה במיוחד

עבודה עם וירוסי אבולה זיהומיות מוגבלת לרמת בטיחות הביולוגית 4 מעבדות. שכפול ושעתוק וירוס-מוסמך כמו חלקיקים המכיל minigenome Tetracistronic (trVLPs) מייצג מערכת דוגמנות מחזור חיים המאפשרת לנו לבנות מודל בבטחה מחזורי זיהומיות מרובים תחת רמת בטיחות ביולוגית 2 תנאים, להסתמך באופן בלעדי על רכיבי נגיף האבולה.

דוגמנות מחזור החיים של נגיף האבולה תחת 2 תנאים ברמת בטיחות ביולוגיים עם חלקיקים כמו וירוס המכילים Tetracistronic Minigenomes

שיטה מתוארת כאן לקביעת אסוציאציה ותחרות בין-ממלכה (חיידקים ופטריות) על היצמדות לחד-שכבות של תאי HeLa נגועים בנגיף. ניתן להרחיב פרוטוקול זה למספר שילובים של פרוקריוטים, איקריוטים ווירוסים.

קביעת Biofilm ייזום על תאים נגועים בנגיף על ידי חיידקים ופטריות

וירוס Vaccinia (VV) כבר בשימוש נרחב במחקר ביו ושיפור בריאות האדם. מאמר זה מתאר שיטה פשוטה ויעילה, מאוד לערוך את הגנום VV באמצעות מערכת CRISPR-Cas9.

גישה פשוטה ויעילה לבנות וקטורי וירוס Vaccinia Mutant

פרוטוקול זה מתאר פונקציונליזציה של פני השטח הניתנת להתאמה אישית של מערכת הדסטיוביוטין, הסטרפטווידין וה-APTES על מנת לבודד סוגי תאים ספציפיים מעניינים. בנוסף, כתב יד זה מכסה את היישומים, האופטימיזציה והאימות של תהליך זה.

שיטה של ​​בידוד תא ממוקד באמצעות Functionalization משטח הזכוכית

תיאר מתודולוגיה quantitate את הביטוי של גנים 96, 18 פני שטח חלבונים על ידי תאים בודדים לשעבר vivo, המאפשרות הזיהוי באופן שונה באה לידי ביטוי גנים, חלבונים בתאים הנגועים בנגיף ביחס תאים נגוע. אנו מיישמים את הגישה ללימוד CD4 הנגועים סיב+ T תאים מבודד קופי מקוק רזוס.

תא בודד כימות של mRNA וביטוי חלבונים השטח ב- CD4 הנגועים בנגיף+ T תאים מבודדים מן קופי מקוק רזוס

כאן, אנו מציגים את הפרוטוקולים כדי לזהות immunomodulators 1) וירוס מקודד המקדמים arbovirus השכפול וגורמים מארח 2) האיקריוטים שמגבילות את שכפול arbovirus. שיטות אלה פלורסצנטיות הפריה חוץ גופית מבוססות מאפשרים להשיג במהירות את המפרט כמותית של שכפול arbovirus ב מבחני פשטני עם יחס אות לרעש נמוך.

זיהומים arbovirus כמו כלים ההקרנה לצורך זיהוי גורמים אנטי ויראלי Immunomodulators ומנחה

כאן, אנו מתארים בדיקה חיסונית פלואורסצנטית מרובת מרבבים שפותחה לאחרונה המשתמשת במערכת ציטומטרית זרימה דו-מדווחת כדי לזהות בו זמנית שני אפיטופים ייחודיים של חלבון ספייק על חלקיקים נגיפיים שלמים של תסמונת נשימה חריפה חמורה קורונה 2 (SARS-CoV-2) שנלכדו על ידי מיקרוספרות מגנטיות מצומדות אנזים 2-2 הממירות אנגיוטנסין.

יצירת פרופיל של אפיטופים של חלבון פני השטח על חלקיקים נגיפיים על ידי אסטרטגיית Multiplex Dual-Reporter

למדו שיטת FSL לתיוג משטחי תאים חיים וויריונים במהירות ובבטיחות מבלי לפגוע בחיוניותם. השיטה מאפשרת שילוב יציב של סמנים ביולוגיים לניתוח בזרימה ומיקרוסקופיה.

FSL בונה: שיטה פשוטה שינוי Cell / Virion משטחים עם מגוון רחב של סמנים ביולוגיים מבלי להשפיע ליכולת הקיום שלהם

גלה סרטונים נוספים