Name: שיטה מהירה ויעילה עבור טיהור של תאים האנדודרם המופקים מתאי גזע עובריים אנושיים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-03-03T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 34 s
Description: חקור שיטה יעילה לטיהור תאי אנדודרם ממיוחדים מתאי גזע עובריים אנושיים באמצעות מיון חרוזים מגנטיים. טכניקה זו מאפשרת קבלת אוכלוסייה טהורה לחקר ביולוגיה התפתחותית ויישומים תרפויטיים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

הסיוע הטכני המיומן של יסמין Kresse היא הודתה בהכרת תודה.

בידול 1. של האדם ESC כלפי האנדודרם המכריע <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טפחו את תאי גזע עובריים אנושיים (ESCs) באינקובטור ב 37 מעלות צלזיוס, 5% CO 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מעיל צלחת תרבות 6 היטב סלולרי חדש עם 1 מ&quot;ל של מטריצה ​​קרום במרתף דגירה כלי התרבות למשך 30 דקות לפחות ב RT. לפרטים ספציפיים בבקשה לפנות להוראות היצרן בהתאמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ודא ESCs האדם התרבותי יגיע ל -80% -90% confluency תחת מיקרוסקופ באמצעות בהגדלה נמוכה (למשל, 4X). לשאוב את המדיום מהנקבובי ידי מוצצת המדיום עם pipet פסטר זכוכית סטרילית. שוטפים את התאים פעם עם פתרון בופר פוספט (PBS). לשם כך, להוסיף 2 מ&quot;ל PBS היטב כל ברכות לנער את צלחת ולמצוץ את הפתרון כדי להסיר תאים מתים ופסולת התא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 1 מ&quot;ל של ריאגנט פתרון passaging ללא אנזים דיסוציאציה עדין של צבירי תאים. דגירת התאים לעבר 37 ° Cד 5% CO 2 עד התאים להראות סימנים ברורים של הפרעה בצבירים קטנים. הערה: זמן הדגירה תלוי המגיב בשימוש. לקבלת פתרון passaging ללא אנזים שהוזכר בסעיף החומרים, זמן דגירה הוא בערך 7 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 1 מ&quot;ל DMEM / בינוני F-12 ולשבש המצרפים תא הנותרים לתוך תאים בודדים ידי pipetting מעלה ומטה באמצעות קצה פיפטה 1 מ&quot;ל. השתמש באפשרות זו כדי לרוקן את התאים מפני השטח ולהעביר את תאי צינור צנטריפוגה. כדי לאחזר את כל התאים, לשטוף היטב עם כל 1 מ&quot;ל של DMEM / בינוני F-12 ולהוסיף המדיום אל הצינור צנטריפוגה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה התאים למשך 5 דקות ב 300 x גרם. לשאוב supernatant ו resuspend התאים במדיום תרבית תאים 5 מ&quot;ל ES המכיל מעכב 10 מיקרומטר Rho-קינאז (ROCK). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ספירת התאים תחת מיקרוסקופ באמצעות hemocytometer וזרעי 150,000 - 400,000 תאים לכל 6 באר או אחר צלחת פריסה, בהתאם לקו בתאי הגזע העוברי בשימוש. מבוי סתום שימוש<html> ture בינוני מעכב ROCK 10 מיקרומטר המכיל להימנע אפופטוזיס והתרבות התאים באינקובטור ב 37 מעלות צלזיוס, 5% CO 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כ -24 שעות לאחר זריעה לשאוב את המדיום עם pipet פסטר זכוכית סטרילית להוסיף 2 מ&quot;ל של מדיום אינדוקציה הראשונית. הערה: בינוני זה מכיל ריכוזים סופי של 1% גלוטמין, 0.2% FCS, 5 מיקרומטר CHIR-99,021 ו 50 ng / A Activin מ&quot;ל מתקדם RPMI-1640 בינוני. בדרך כלל, להשתמש 2 מ&quot;ל של מדיום לגידול 6 צלחות היטב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 48 שעות לאחר הזריעה, להחליף את המדיום כדי endoderm בינוני אינדוקציה. טפחו את התאים במדיום הזה במשך 48 אחר שעה עם שינוי בינוני יומי. הערה: בינוני זה מכיל 1% גלוטמין, 0.2% FCS ו -50 ng / ml Activin א &#39;מתקדם RPMI-1640 בינוני. תאים מחויבים כלפי האנדודרם הסופי להביע את סמן המשטח CXCR4. המכתים של CXCR4 יכול לשמש כדי לכמת את מספר התאים המחויבים DE. </li></ol>class = &quot;jove_title&quot;&gt; 2. צביעת תאי CXCR4 + Definitive endoderm עבור ניתוח cytometry הזרימה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במשך 24 שעות הסופיות אבל לפחות 1 שעה לפני קצירת התאים להוסיף 10 מיקרומטר ROCK מעכבים עד בינוני התרבות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מעיל התא-ware תרבות ישמש מחדש זריעה עם מטריצה ​​קרום במרתף, כלומר, 12-גם צלחות לניתוח qPCR או קאמרית שקופיות עבור מכתים immunofluorescence. דגירת הצלחות או שקופיות למשך 30 דקות לפחות ב RT. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשאוב את המדיום עם pipet פסטר זכוכית סטרילית מן הבארות של התאים הממוינים המשמשים מכתים ו / או מיון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 1 מ&quot;ל של ריאגנט פתרון passaging האנזים ללא עבור דיסוציאציה עדין של צבירי תאים. דגירת התאים ב 37 מעלות צלזיוס, 5% CO 2 עד להראות את תאי סימנים ברורים של הפרעה בצבירים קטנים. הערה: זמן הדגירה תלוי המגיב בשימוש. לקבלת הפתרון passaging האנזים ללא המוזכרים materiסעיף als, זמן הדגירה הוא בערך 7 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 1 מיליליטר DMEM / F-12 בינוניים ולשבש הנותרים אגרגטים תא לתוך תאים בודדים ידי pipetting מעלה ומטה בעזרת טיפ 1 מיליליטר. השתמש באפשרות זו כדי לרוקן את התאים מפני השטח ולהעביר את תאי צינור צנטריפוגה. כדי לאחזר את כל התאים, לשטוף היטב עם כל 1 מ&quot;ל של DMEM / F-12 בינוני w / o FCS ולהוסיף המדיום אל הצינור צנטריפוגה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ספירת התאים תחת מיקרוסקופ באמצעות hemocytometer. תאים משלוש בארות של צלחת 6-גם אמורים לגרום 10-15 x 10 6 תאים לאחר שלושה ימים של בידול. צנטריפוגה התאים למשך 5 דקות ב 300 x גרם. הערה: המספר המדויק של התאים המתקבלים יהיה תלוי שורת תאים פלוריפוטנטיים המשמש את הבידול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשאוב supernatant ו resuspend התאים חיץ PEB המכילים מעכבי ROCK 10 מיקרומטר. השתמש 100 μl של חיץ זה לתקופה של עד 10 7 תאים. מוסיפים את מעכבי ROCK 10 מיקרומטר ביום staining. השתמש חיץ זה עבור כל היישומים במורד הזרם (המכונה חיץ PEB + RI). הערה: חיץ PEB מכיל 0.5% BSA ו -2 מ&quot;מ EDTA ב PBS. אם יותר תאים להיות מוכתמים, להתאים את עוצמת קול החיץ בהתאם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 10 μl של נוגדן CXCR4-APC לכל 10 7 תאים 100 μl, זה בערך מייצג דילול של 1:10. הערה: השימוש של נוגדן APC צמוד אינו חובה. במקום זה ניתן להחליף בהתאם microbeads בשימוש. אם יותר תאים הם להיצבע לכוונן את עוצמת קול הנוגדן בהתאם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מערבבים על ידי היפוך הצינור בעדינות עם האצבעות דגירה על 4 מעלות צלזיוס במקרר במשך 15 דקות. Resuspend התאים עם חיץ PEB מ&quot;ל 1-2. צנטריפוגה התאים למשך 5 דקות ב 300 x גרם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשאוב supernatant עם pipet פסטר זכוכית סטרילית resuspend התא גלולה ב PEB 80 μl לכל 10 7 תאים ולהוסיף 20 microbeads μl אנטי APC. הערה: </sטרונג&gt; אם יותר התאים להיות מוכתם, להתאים את עוצמת הקול מיקרו-חרוז בהתאם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מערבבים על ידי היפוך הצינור בעדינות עם האצבעות דגירה על 4 מעלות צלזיוס במקרר במשך 15 דקות. Resuspend התאים עם חיץ PEB מ&quot;ל 1-2 + RI. צנטריפוגה התאים למשך 5 דקות ב 300 x גרם. לשאוב את המאגר. Resuspend במאגר 500 μl PEB + RI. </li></ol> 3. הפרדה מגנטית של CXCR4 + תאים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניח טור מגנטי בגודל בינוני בתוך שדה מגנטי לפי הוראות ייצור. טרום לשטוף את העמודה עם 500 μl PEB חיץ + RI. החל את השעית התא כולו לעמודה. אסוף את הזרימה דרך תאים לא הכל כפי יהיה לאגד את העמודה. ודא שלא להפריע את העמודות לשליפה אופטימלית של תאי CXCR4 +. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף את העמודה שלוש פעמים עם חיץ 500 μl PEB + RI. אסוף את הזרם הראשון דרך ולשלב אותו עם תאים שנאספו שלב 3.1. הסר את העמודה המגנטית מהשדה המגנטי ומניח אותו בתוךצינור איסוף מתאים. הוסף 1 מ&quot;ל PEB חיץ + RI על הטור. כדי elute התאים היטב ומהדקים את הבוכנה לתוך הטור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אופציונלי: לאסוף את כל הזרימה דרך דגימות בנפרד ולהשתמש 20 μl כל לנתח את מספר CXCR4 + תאים באמצעות cytometry הזרימה. מספרם צריך לרדת עם כל צעד כביסה. הערה: לפחות 2 x 10 4 קיימא, תאים מגודרים צריכים לספור עבור תוצאות אמינות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על שלבים 3.1-3.3 עם הזרם-שנאסף באמצעות מדגם משלב 3.1 ואת הזרם הראשון באמצעות מדגם משלב 3.2 באמצעות טור חדש. אל תשתמש שוב בטור הקודם. באמצעות אוויר הבוכנה נלחץ לתוך הטור, אשר חוסם אותו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ספירת התאים תחת מיקרוסקופ באמצעות hemocytometer. בהתאם היעיל של עד הבידול עד 6 x 10 6 תאים ניתן למיין בתחילה ועוד 1 x 10 6 תאים באמצעות עמודה שנייה בעת שימוש 10 7 תאים עבור ההליך. </li&gt; <li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה התאים ב XG 300 במשך 5 דקות. לשאוב את supernatant עם pipet פסטר זכוכית סטרילית resuspend התאים במדיום אינדוקציה האנדודרם 1 מ&quot;ל משלב 1.9 עם מעכב ROCK 10 מיקרומטר נוסף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ספירת התאים תחת מיקרוסקופ באמצעות hemocytometer. זרעי התאים בצפיפות מתאימה, כלומר, ~ 4 x 10 5 תאים לכל גם צלחת 12-היטב (אפליקציה. 3.6 סנטימטר 2 משטח) או ~ 1.5 x 10 5 תאים לכל טוב של 8-היטב קאמרי שקופיות. </li></ol> 4. אופציונאלי: ניתוח אוכלוסין endoderm Definitive מטוהרים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור מכתים immunofluorescence לתקן את התאים מטוהרים משלב 3.7 בערך 24 שעות לאחר זריעה עם 4% paraformaldehyde ו כתם במשך האנדודרם סופי (DE) ו / או חלבונים סמן pluripotency. הערה: בשימוש נפוץ סמנים DE כוללים FOXA2 ו SOX17, סמנים pluripotency נפוצים כוללים OCT3 / 4, NANOG ו Sox2 6, 8. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> For ניתוח RT-qPCR, לקצור את התאים מטוהרים ישירות או 24 שעות לאחר זריעה, לחלץ סך-RNA הפוכה לתמלל cDNA מן מכלל הדגימות-RNA חילוץ. השתמש 10 cDNA ng כתבנית לכל תגובה RT-qPCR (triplicates) לנתח את הביטוי של DE וגנים סמן pluripotency 6, 8. הערה: גני סמן מקובלים הם שהוזכרו בשלב 4.1. תנאי מחזור 5 דקות ב 95 ° C ו 40 מחזורים של 15 שניות על 95 מעלות צלזיוס ו 1 דקות ב 60 מעלות צלזיוס, ואחריו נמס ניתוח עקום. </li></ol>

<ol><li>Sharma, A., Li, G., Rajarajan, K., Hamaguchi, R., Burridge, P. W., Wu, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Derivation+of+Highly+Purified+Cardiomyocytes+from+Human+Induced+Pluripotent+Stem+Cells+Using+Small+Molecule-modulated+Differentiation+and+Subsequent+Glucose+Starvation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Derivation of Highly Purified Cardiomyocytes from Human Induced Pluripotent Stem Cells Using Small Molecule-modulated Differentiation and Subsequent Glucose Starvation.</a> J Vis Exp. (97), (2015).</li>
<li>Sgodda, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+hepatic+differentiation+strategies+for+human+induced+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Improved hepatic differentiation strategies for human induced pluripotent stem cells.</a> Curr Mol Med. 13 (5), 842-855 (2013).</li>
<li>Naujok, O., Burns, C., Jones, P. M., Lenzen, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insulin-producing+surrogate+beta-cells+from+embryonic+stem+cells%3A+are+we+there+yet%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">Insulin-producing surrogate beta-cells from embryonic stem cells: are we there yet.</a> Mol Ther. 19 (10), 1759-1768 (2011).</li>
<li>Katsirntaki, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bronchoalveolar+sublineage+specification+of+pluripotent+stem+cells%3A+effect+of+dexamethasone+plus+cAMP-elevating+agents+and+keratinocyte+growth+factor%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng+Part+A%22%5BJournal%5D)">Bronchoalveolar sublineage specification of pluripotent stem cells: effect of dexamethasone plus cAMP-elevating agents and keratinocyte growth factor.</a> Tissue Eng Part A. 21 (3-4), 669-682 (2015).</li>
<li>Abranches, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+differentiation+of+embryonic+stem+cells+in+vitro%3A+a+road+map+to+neurogenesis+in+the+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Neural differentiation of embryonic stem cells in vitro: a road map to neurogenesis in the embryo.</a> PLoS One. 4 (7), e6286(2009).</li>
<li>Naujok, O., Diekmann, U., Lenzen, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+generation+of+definitive+endoderm+from+human+embryonic+stem+cells+is+initially+independent+from+activin+A+but+requires+canonical+Wnt-signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Rev%22%5BJournal%5D)">The generation of definitive endoderm from human embryonic stem cells is initially independent from activin A but requires canonical Wnt-signaling.</a> Stem Cell Rev. 10 (4), 480-493 (2014).</li>
<li>D'Amour, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+of+pancreatic+hormone-expressing+endocrine+cells+from+human+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Production of pancreatic hormone-expressing endocrine cells from human embryonic stem cells.</a> Nat Biotechnol. 24 (11), 1392-1401 (2006).</li>
<li>Diekmann, U., Lenzen, S., Naujok, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+reliable+and+efficient+protocol+for+human+pluripotent+stem+cell+differentiation+into+the+definitive+endoderm+based+on+dispersed+single+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Dev%22%5BJournal%5D)">A reliable and efficient protocol for human pluripotent stem cell differentiation into the definitive endoderm based on dispersed single cells.</a> Stem Cells Dev. 24 (2), 190-204 (2015).</li>
<li>Kim, P. T., Ong, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differentiation+of+definitive+endoderm+from+mouse+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Results+Probl+Cell+Differ%22%5BJournal%5D)">Differentiation of definitive endoderm from mouse embryonic stem cells.</a> Results Probl Cell Differ. 55, 303-319 (2012).</li>
<li>Katoh, M., Katoh, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrative+genomic+analyses+of+CXCR4%3A+transcriptional+regulation+of+CXCR4+based+on+TGFbeta%2C+Nodal%2C+Activin+signaling+and+POU5F1%2C+FOXA2%2C+FOXC2%2C+FOXH1%2C+SOX17%2C+and+GFI1+transcription+factors%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Oncol%22%5BJournal%5D)">Integrative genomic analyses of CXCR4: transcriptional regulation of CXCR4 based on TGFbeta, Nodal, Activin signaling and POU5F1, FOXA2, FOXC2, FOXH1, SOX17, and GFI1 transcription factors.</a> Int J Oncol. 36 (2), 415-420 (2010).</li>
<li>Nostro, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stage-specific+signaling+through+TGFbeta+family+members+and+WNT+regulates+patterning+and+pancreatic+specification+of+human+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Stage-specific signaling through TGFbeta family members and WNT regulates patterning and pancreatic specification of human pluripotent stem cells.</a> Development. 138 (5), 861-871 (2011).</li>
<li>Rezania, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maturation+of+human+embryonic+stem+cell-derived+pancreatic+progenitors+into+functional+islets+capable+of+treating+pre-existing+diabetes+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Maturation of human embryonic stem cell-derived pancreatic progenitors into functional islets capable of treating pre-existing diabetes in mice.</a> Diabetes. 61 (8), 2016-2029 (2012).</li>
<li>Bruin, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maturation+and+function+of+human+embryonic+stem+cell-derived+pancreatic+progenitors+in+macroencapsulation+devices+following+transplant+into+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetologia%22%5BJournal%5D)">Maturation and function of human embryonic stem cell-derived pancreatic progenitors in macroencapsulation devices following transplant into mice.</a> Diabetologia. 56 (9), 1987-1998 (2013).</li>
<li>Fu, W., Wang, S. J., Zhou, G. D., Liu, W., Cao, Y., Zhang, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Residual+undifferentiated+cells+during+differentiation+of+induced+pluripotent+stem+cells+in+vitro+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Dev%22%5BJournal%5D)">Residual undifferentiated cells during differentiation of induced pluripotent stem cells in vitro and in vivo.</a> Stem Cells Dev. 21 (4), 521-529 (2012).</li>
<li>Hentze, H., Soong, P. L., Wang, S. T., Phillips, B. W., Putti, T. C., Dunn, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Teratoma+formation+by+human+embryonic+stem+cells%3A+evaluation+of+essential+parameters+for+future+safety+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Teratoma formation by human embryonic stem cells: evaluation of essential parameters for future safety studies.</a> Stem Cell Res. 2 (3), 198-210 (2009).</li>
<li>Herberts, C. A., Kwa, M. S., Hermsen, H. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Risk+factors+in+the+development+of+stem+cell+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Risk factors in the development of stem cell therapy.</a> J Transl Med. 9, 29(2011).</li>
<li>Naujok, O., Kaldrack, J., Taivankhuu, T., Jörns, A., Lenzen, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+removal+of+undifferentiated+embryonic+stem+cells+from+differentiation+cultures+through+HSV1+thymidine+kinase+and+ganciclovir+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Rev%22%5BJournal%5D)">Selective removal of undifferentiated embryonic stem cells from differentiation cultures through HSV1 thymidine kinase and ganciclovir treatment.</a> Stem Cell Rev. 6 (3), 450-461 (2010).</li>
<li>Pan, Y., Ouyang, Z., Wong, W. H., Baker, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+FACS+approach+isolates+hESC+derived+endoderm+using+transcription+factors%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">A new FACS approach isolates hESC derived endoderm using transcription factors.</a> PLoS One. 6 (3), 17536(2011).</li>
</ol>

המחברים מצהירים שאין להם אינטרסים פיננסיים מתחרים.

נכון לעכשיו פרוטוקולי בידול לעתים נדירות לגרום תאים מובחנים 100%. מסיבות שעדיין יש לטפל תאים מסוימים להתנגד לתהליך הבידול. בהתאם את היעילות של פרוטוקול בידול המשמשים ואת הנטייה של ESC קו מספר מסוים של תאים פלוריפוטנטיים שיורית הם נצפו גם בכינויו לאחר בידול לתוך האנדודרם סופי. תאים שיורית אלו עלולים לפגוע differentiations במורד הזרם או ניתוח נוסף כגון transcriptomics, פרוטאומיקה, וניתוח ביטוי מירנה. תאים פלוריפוטנטיים שיורים או שושלות רצויות אחרות עשויים גם להפגין תופעות paracrine ...

תאי גזע פלוריפוטנטיים כגון תאי גזע עובריים (ESCs) יש את היכולת להתמיין כמעט כל סוג תא בגוף האדם. לפיכך, פרוטוקולים בידול במבחנה יכול לשמש כדי ליצור סוגי תאים בוגרים רבים כגון cardiomyocytes 1, hepatocytes 2, תאי בטא 3, ריאות אפיתל 4 או 5 תאים עצביים. זה עושה ESCs כלי רב ערך לטיפול הפוטנציאל של מחלות ניווניות שונות 3. בידול במבחנה של ESCs כלפי רקמות בוגרות של ריאות, כבד ולבלב דורש פסאודו gastrulation לתאים מזכיר את האנדודרם סופי (DE) 6. מאז בידול במורד כלפי סוגי תאים סומטיים הנ&quot;ל הוא משמעותי פחות יעיל, בידול האנדודרם אופטימלי נחשב הגבלת קצב 7. תאים מחויבים כלפי שושלת endoderm לעבור צ&#39;השינויי racteristic בפרופיל ביטוי הגנים שלהם. מאסטר pluripotency גנים הרגולטור למטה מוסדרים, ואילו הביטוי של גורמי שעתוק אחרים כגון FOXA2, SOX17, HNF1B, בני משפחת Gata ואת לקולטן CXCR4 הוא שהוגברו מאוד 6, 8, 9. CXCR4 ידוע להיות transactivated ידי SMAD2 / 3, במורד זרם של איתות קטרים ​​/ TGF-β ו SOX17 בשל אתרי קישור ספציפיים באזור האמרגן שלה 10. לכן הוא סמן מתאים מאוד בשימוש מספר הדיווחים 6, 8, 11-13. שינויי ביטוי אלה משקפים אירוע פסאודו gastrulation, שבו ESCs לרכוש הראשונה מאפיינים של אוכלוסיית תא פס דמוי פרימיטיבית ובהמשך להתחייב לתוך השכבה ניבטת endoderm 6. עם זאת, פרוטוקולי בידול הם לעתים רחוקות 100% יעילים כמו כמה תאים עשויים להתנגד לתהליך הבידול או להבדיל כלפי שושלות מכוונות אחרות 14. תאים אלה עשויים לרעה influeבידול נוסף NCE. יתר על כן, תאים שלא עברו התמיינות שיורית נמל סיכונים גדולים לניסויי השתלה מאוחר יותר עשוי להצמיח teratomas 15-17. כדי להסיר תאים לא רצויים אלה מוקדם על CXCR4 סמן המשטח יכול לשמש עבור טיהור של תאים מחויבים כלפי DE 18. כאן אנו מתארים שיטת הסלקציה החיובית של CXCR4 + תאים מתרבויות בידול DE. לשם כך, CXCR4 סמן המשטח מחויב נוגדן אשר בתורם נקשר microbeads המגנטי. בניגוד לתנאים הקשים במהלך מיון FACS, תאי DE הדמויים המתויגים מגנטי אז יכולים להיות מטוהרים בקלות בפורמט המעבדתיים באמצעות שיטת טיהור עדינה. פרוטוקול זה מספק שיטה פשוטה להסרת אוכלוסיות תאי המגן מפני תהליך התמיינות DE.

<table><tbody><tr><td>Hues8 קו תאי גזע עובריים אנושיים</td><td>המחלקה לתאי גזע וביולוגיה רגנרטיבית של הרווארד</td><td>קו תאים מתאים לדור אנדודרם</td>קו תאי גזע עובריים אנושיים Hes3 ES Cell International קו תאים מתאים וחזק לדור האנדודרם mTeSR1 Stemcell Technologies 5850 מדיום תרבית ESC FCS Biowest <td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td>S1860</td><td></td></tr><tr><td>Advanced RPMI 1640</td><td>Life Technologies</td><td>12633012</td><td></td></tr><tr><td>CD184 (CXCR4)-APC,</td><td>אנושי Miltenyi Biotec</td><td>130-098-357</td><td></td></tr><tr><td>אנטי-APC MicroBeads</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-090-855&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>מפריד OctoMACS</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-109</td><td>שדה מגנטי</td></tr><tr><td>Y-27632</td><td>Selleck Chemicals</td><td>S1049</td><td>מעכב ROCK</td></tr><tr><td>CHIR-99021</td><td>Tocris Bioscience</td><td>4423</td><td></td></tr><tr><td>Activin A</td><td>Peprotech</td><td>120-14</td><td></td></tr><tr><td>מגיב דיסוציאציה עדין</td><td>של תאים טכנולוגיות תאי גזע</td><td>7174</td><td>ללא אנזימים פתרון מעבר, אלטרנטיבה: טריפסין/EDTA</td></tr><tr><td>Matrigel*</td><td>קורנינג</td><td>354277</td><td>מטריצת ממברנת הבסיס * לפתור ולאחסן במכסות ב-80 מעלות; C כמפורט במדריך הספקים. לאחר השימוש, יש להפשיר על קרח, לדלל ב-25 מ"ל נוקאאוט קר כקרח DMEM/F-12. להוסיף 1 מ"ל לכל באר של צלחת של 6 בארות ולדגור במשך 45 דקות בטמפרטורת החדר. יש להסיר את המטריגל ולהשתמש מיד. </td></tr><tr><td>MS Columns</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>30-042-201</td><td></td></tr><tr><td>מפריד MACS</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-302</td><td></td></tr><tr><td>Human FOXA2 FW gggagcggtgaagatgga</td><td>Life Technologies</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>Human FOXA2 REV tcatgttgctcacggaggagta</td><td>Life Technologies</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Human GSC FW gaggagaaaagtggaggtctctggtt</td><td>Life טכנולוגיות</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Human GSC REV ctctgatgaggaccgcttctg</td><td>Life Technologies</td><td></td><td></td></tr><tr><td>SOX17 TaqMan assay</td><td>Applied Biosystems</td><td>Hs00751752_s1</td><td></td></tr><tr><td>Human SOX7 FW gatgctgggaaagtcgtggaagg</td><td>Life Technologies</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Human SOX7 REV tgcgcggccggttgtag</td><td>Life Technologies</td><td></td><td></td></tr><tr><td>אדם POU5F1 FW cttgctgcagaagtgggtggggagg</td><td>טכנולוגיות חיים אנושי</td><td></td><td></td></tr><tr><td>POU5F1 REV ctgcagtgtgtgtgtttcgggca</td><td>טכנולוגיות חיים</td><td></td><td></td></tr><tr><td>נונג אנושי FW ccgagggcacatcatcc</td><td>טכנולוגיות</td><td></td><td></td>חיים</tr><tr><td>נונג אנושי REV ccatccactgccacatcttct</td><td>טכנולוגיות</td><td></td><td></td>חיים</tr><tr><td>אנושי TBP FW caa cag cct gcc acc tta cgc tc</td><td>Life Technologies</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Human TBP REV agg ctg tggt cag tcc agt</td><td>g Life Technologies</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Human TUBA1A FW ggc agt gtt tgt aga ctt gga acc c</td><td>Life Technologies</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Human TUBA1A REV tgt gat aag ttg ctc agg gtg ga g</td><td>Life Technologies</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Human G6PD FW agg ccg tca cca aga aca ttc a</td><td>Life Technologies</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Human G6PD REV CGA TGC TGC GGT TCC AGC CTA T </td><td>Life Technologies</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Anti-SOX2</td><td>Santa Cruz Biotechnology</td><td>sc-17320</td><td></td></tr><tr><td>Anti-FOXA2</td><td>MerckMillipore</td><td>07-633</td><td></td></tr><tr><td>Anti-SOX17</td><td>R& D מערכות</td><td>AF1924</td><td></td></tr></tbody></table>

שיטה מהירה ויעילה עבור טיהור של תאים האנדודרם המופקים מתאי גזע עובריים אנושיים

A Quick and Efficient Method for the Purification of Endoderm Cells Generated from Human Embryonic Stem Cells

יכולות ההתמיינות של תאי גזע פלוריפוטנטיים כגון תאי גזע עובריים (ESCs) לאפשר יישום טיפולי פוטנציאל טיפולי התחדשות תאים. סופני סוגי תאים מובחנים יכול לשמש לטיפול במחלות ניווניות שונות. חוץ גופית התמיינות של תאים אלה כלפי רקמות של ריאות, כבד ולבלב דורש כצעד ראשון הדור של תאים endodermal מוחלטות. שלב זה הוא הגבלת קצב לבידול נוסף לקראת סוגי תאים התבגר סופני כגון תאי ביתא מייצרי אינסולין, hepatocytes או סוגי תאים אחרים הנגזרות האנדודרם. תאים מחויבים כלפי השושלת endoderm מאוד להביע שפע של גורמי שעתוק כגון FOXA2, SOX17, HNF1B, בני משפחת גאטה, ואת לקולטן CXCR4. עם זאת, פרוטוקולי בידול הם לעתים רחוקות 100% יעילים. כאן אנו מתארים שיטה לטיהור של אוכלוסיית תא CXCR4 + לאחר התמיינותאל DE באמצעות microbeads מגנטי. טיהור זה גם מסיר תאים של שושלות רצויות. שיטת הטיהור העדינה היא מהירה ואמינה ועשויה לשמש כדי לשפר יישומי differentiations במורד זרם.

עם בידול ESCs לעבור שינויים דרסטיים גנים ביטוי חלבון. איור 1 מתאר גנים סמן טיפוסי שניתן להשתמש בהם כדי לאמת בידול האנדודרם מוצלח. מטרות הממשלה עבור ניתוח ביטוי גנים הם GSC, FOXA2, ו SOX17. בניתוח ביטוי גנים ביחס במיוחד FOXA2 ו SOX17 הם עלו ב&gt; 2,000 לקפל בהשוואה ESCs מובחן. GSC כבר מתבטא מאוד מוקדם בתוך 24 שעות במהלך היווצרות פס פרימיטיבי אבל זה בכל זאת מושר...

כאן אנו מתארים שיטה לטיהור של תאי גזע עובריים אנושיים הבדילו כי מחויב כלפי האנדודרם הסופי לשיפור יישומים במורד בידול נוסף.

The differentiation capabilities of pluripotent stem cells such as embryonic stem cells (ESCs) allow a potential therapeutic application for cell ...

המטרה הכללית של שיטה זו היא לטהר תאי אנדודרמה שהופקו מתאי גזע עובריים אנושיים (ES cells). שיטה זו יכולה לסייע במתן מענה לשאלות מפתח בתחום תאי הגזע בנוגע לדיפרנציאציה אנדודרמלית. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שניתן להשיג אוכלוסייה טהורה של תאי אנדודרמה לאחר הסרת תאים שאינם מובחנים.לפני תחילת הפרוצדורה, יש לצפות שש פלטות תרבית תאים בעלת בארות ב-1 ml של basement membrane matrix לכל בארה, למשך 30 דקות לפחות בטמפרטורת החדר. לאחר מכן, כדי לקצור את תאי ה-ES האנושיים, יש לשאוב את המצע מתרבית תאי גזע עובריים אנושיים בהסמיכות (confluency) של 80% עד 90% באמצעות פיפטת פסטור מזכוכית סטרילית.שטפו את התאים עם 2 mL של PBS לכל באער. נערה את הפלטה ושאבו את התמימה המלוחית כדי להסיר תאים מתים ופסולת. לאחר מכן, פרקו בעדינות את מקבצי התאים באמצעות 1 mL של תמיסת מעבר (passaging solution) ללא אנזימים, בטמפרטורה של 37 °C וב-5% carbon dioxide, עד שהתאים מראים סימנים ברורים של פירוק למקבצים קטנים יותר.לאחר כמעט שבע דקות, הוסיפו מיליליטר אחד של מצע DMMF12 לבארות. בצעו פיפוט למעלה ולמטה מספר פעמים עם טיפ של פיפט של מיליליטר אחד כדי לשחרר את שארית תצבירי התאים לסuspended תלייה של תאים בודדים. באמצעות אותה פיפט, העבירו את התאים למבובת צנטריפוגה ושטפו את הבארות עם מיליליטר אחד של מצע DMMF12 טרי, תוך איסוף השטיפות לתוך המבובת.לאחר ספינטדאון של התאים, השעו מחדש את המשקע בחמישה מיליליטר של מצע גידול לתאי ES המועשר ב-ROCK inhibitor. ספרו את התאים והזריעו 1.5-4&times;10⁵ תאים לבאר על פלטות מצופות בבסיס ממבנה הממברנה (basement membrane matrix) במצע גידול המועשר ב-ROCK inhibitor למניעת אפוֹפּטוזיס. דגרו את התאים למשך כ-24 שעות.לאחר מכן, השתמשו בפיפט פסטור מזכוכית סטרילית כדי להחליף את המצע בכל באר ב-2 milliliters של מצע להשראת פס ראשוני (primitive streak induction medium). לאחר 24 שעות נוספות של תרבית, החליפו את המצע במצע להשראת אנדודרמה (endoderm induction medium) לדגירה של 48 שעות עם החלפות מצע יומיות. ביום האחרון של התרבית ולפחות שעה אחת לפני קצירת התאים, הוסיפו מעכב ROCK טרי למצע התרבית.לאחר מכן, השתמשו בפיפט פסטור מזכוכית סטרילית כדי לשאוב את המצע מכל אחת מהבארות, והפרידו את התאים באמצעות תמיסת מעבר ללא אנזימים כפי שהודגם זה עתה. כאשר הושגה סספנסיה של תאים בודדים, ספרו את התאים וסובבו אותם בצנטריפוגה. ודאו שמרגע זה ואילך, כל המצעים והבופרים מכילים ROCK inhibitor כדי למנוע את מות התאים.אחר כך, הם לא ייצמדו כראוי לאחר הנסיגה. השביו מחדש את המשקע ב-100 microliters של בופר PEB, בתוספת מעכב ROCK עבור 1 times 10 to the seventh תאים. לאחר מכן, הוסיפו לתאים נוגדן CXCR4 APC.נקישה עדינה של המבחנה כדי לערבב. לאחר 15 דקות ב-4 °C, שטפו את התאים ב-1 עד 2 מיליליטר של בופר PEB והשתמשו בפיפט פסטור זכוכית סטרילי כדי לשאוב את העילוי. השעו מחדש את המשקע ב-80 µl של בופר PEB לכל 1×10⁷ תאים והוסיפו לתאים 20 µl של חרוזי מיקרו anti-APC.ערבבו את הדגימה באמצעות נקישות עדינות. לאחר מכן, דגרו את התאים בטמפרטורה של 4 °C למשך 15 דקות. בסיום הדגירה, שטפו את התאים עם 1-2 mL של בופר PEB בתוספת מעכב ROCK.שחזר את המשקע ב-500 microliters של תמיפת PEB טרייה בתוספת מעכב. כדי לבודד תאי +CXCR4 באמצעות הפרדה של חרוזי מגנט, טען עמודת מגנט בגודל בינוני על מגנט מתאים ושטוף מראש את העמודה עם 500 microliters של תמיפת PEB בתוספת מעכב ROCK. לאחר שכל נוזל השטיפה התנקז מחלק העליון של העמודה, העבר את כל נפח התאים המסומנים בחרוזי מגנט אל העמודה, ואסוף את הנוזל העובר לפרועת קונוית.שטפו את העמודה בשלוש הפעלות של 500 µL של באפר PEB בתוספת מעכב ROCK. לאחר מכן, העבירו את העמודה מהמגנט לשפופרת איסוף מתאימה. העבירו 1 mL של באפר PEB בתוספת מעכב ROCK דרך העמודה כדי לאסוף את תאי ה-CXCR4+.באופן רב גוני, ניתן לאסוף את כל דגימות השטיפה (flow through) בנפרד, ולהשתמש במכסות (aliquots) של 20 microliter מכל דגימה כדי לקבוע את אחוז התאים CXCR4+ בכל מכסה באמצעות ציטומטריה של זרימה. ניתן לחזור על הליך זה עם השטיפה הראשונה כדי לאסוף תאים שלא נקשרו לעמודה. לאחר מכן, יש לאחד את כל דגימות ה-CXCR4+ שנלקחו ולסבב אותן בצנטריפוגה.לבסוף, השעו מחדש את המשקע במיליליטר אחד של מצע השראה לאנדודרם (endoderm) בתוספת מעכב ROCK, וזרעו את התאים בצפיפות המתאימה בכלי לתרבית תאים מצופה במטריצת ממбраנה בסיסית. טרם התמיינותם, תאי ES אנושיים מביעים רמות גבוהות של סמן הרב-פוטנציאליות SOX2, בעוד שהסמן של האנדודרם הסופי, FOXA2, אינו מזוהה.בעת הגבייה, תאי ה-ES עוברים שינויים דרסטיים בביטוי הגנים והחלבונים שלהם. ואכן, לאחר ארבעה ימים במצע גבייה, SOX17 ו-FOXA2 מבוטאים יחד באופן אחיד בגרעיני רבים מתאי ה-ES לשעבר, סימן היכר למחויבות לאנדודרמה דפיניטיבית. חלק מהתאים עמידים לתהליך הגבייה, ואינם מבטאים אף אחד משני חלבוני הסימון.ולמעשה, הם שומרים על ביטוי של SOX2, סמן הפלוריפוטנציות שלהם. בניסוי מייצג זה, ביום השלישי של הדפרנציאציה, כמעט 60% מתאי ה-ES שנאספו ביטאו CXCR4, אשר טהרתו הועשרה למעל 85% לאחר מיון של תאי פלוריפוטנציה ותאי שושלות אחרים בלתי רצויים באמצעות חרוזי מגנט. לאחר זריעת תאי CXCR4+ המופקדים, מזוהים רק מספר מצומצם של תאי SOX2+, כאשר רוב התאים שנזרעו מבטאים FOXA2.לאחר השליטה בטכניקה זו, ניתן להשלימה תוך שעתיים, במידה שהיא מבוצעת כראוי. בעקבות הליך זה, ניתן לבצע בדיקות דומות, כגון אימונוהיסטוכימיה או QPCR, כדי לענות על שאלות נוספות בנוגע לתהליך הדיפרנציאציה. לאחר צפייה בסרטון זה, תהיה לכם הבנה טובה של אופן טיהור תאי אנדודרם באמצעות מיון של חרוזי מגנט.

a-quick-efficient-method-for-purification-endoderm-cells-generated

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

ביולוגיה התפתחותית

היכולת של בתאי גזע עובריים אנושיים עצמית לחדש להתמיין לכל סוגי התאים בגוף עולה כי הם מחזיקים הבטחה גדולה עבור שניהם יישומים רפואיים ככלי מחקר להתמודדות עם שאלות יסוד בהתפתחות מחלות. כאן, אנו מספקים תמציתי, צעד אחר צעד פרוטוקול הגזירה של בתאי גזע עובריים אנושיים מעוברים על ידי בידוד immunosurgical של מסת התאים הפנימית.

גזירת בתאי גזע עובריים אנושיים על ידי Immunosurgery

מאמר זה יתמקד דור האנדודרם הכבד האנושי אנושי אוכלוסיות תאים גזע עובריים.

הדור יציבה של hepatocyte דמויי תאים של אדם אוכלוסיות תאים גזע עובריים

למרות מאמצים מתמשכים לתרבויות מעבר לתנאי מזין חינם, הגזירה והתרבות של תאי גזע עובריים אנושיים (hESC) יישארו תלוי במידה רבה בשיתוף עם תרבויות ניזונים עובריים של עכבר (MEFs). כאן, אנו מציגים שיטה חדשנית להסרת מתקני האכלה במהירות מתרבויות hESC לפני הניסויים.

הסרת פיברובלסטים מהירה מתרבויות צפיפות גבוהות אדם תאי גזע עובריות

אנו מתארים את השימוש בנוגדנים חד שבטיים TG30 (CD9) ו- GCTM-2 לגילוי משולב של אנטיגנים משטח התא באמצעות מיון תאים המופעל על ידי פלואורסצנטיות (FACS) לזיהוי והעשרה של תאי גזע עובריים אנושיים חיים (hESC) באמצעות בחירה חיובית וגם שימוש בבחירה שלילית כדי לטהר hESCs מאוכלוסיית תאים מעורבת.

העשרה וטיהור של תאי גזע עובריים אנושיים על ידי זיהוי אנטיגנים משטח התא באמצעות נוגדנים חד שבטיים TG30 ו GCTM-2

פרוטוקול זה מפנה ביעילות עכבר גזע עוברי תא נגזרות האנדודרם סופי להבשיל דרכי נשימה תא אפיתל. טכניקת בידול זה משתמשת 3 ממדי פיגומי ריאות decellularized לכוון מפרט שושלת ריאות, באווירת התרבות מוגדרת, סרום ללא.

דור של אפיתל דרכי נשימת עכבר נגזרות ESC תאי שימוש decellularized פיגומי ריאות

יש תאי גזע אנושיים pluripotent (hPSCs) את היכולת הפנימית להבדיל עצמי לארגן לתוך דפוסי רקמה ייחודיים; אם כי זה דורש ההצגה הדרגתית סביבה המרחבית. אנו מציגים סטנסיל micropatterning כשיטה פשוט חזקה כדי ליצור הדרגתי ביוכימיות מכאניות לשליטת דפוסי בידול hPSC.

סטנסיל micropatterning של תאי גזע האנושי pluripotent עבור גשוש הארגון המרחבי של גורל הבידול

מוצג כאן הוא פרוטוקול עבור הדור של התרבות תא יחיד של תאי גזע האדם העובריים והבידול שלהם לתוך תאים מחולל קדמון. הפרוטוקול הוא פשוט, חסון, מדרגי, ומתאים לסינון סמים וליישומים רפואת התחדשות.

בידול עצבי יעיל באמצעות התרבות תא יחיד של תאי גזע האדם העובריים

כתב יד זה מתאר פרוטוקול מפורט לבידול של תאי גזע עובריים אנושיים (hESCs) לתאים דמויי הפטוציטים תפקודיים (HLCs) על ידי השלמת Activin A ו- CHIR99021 באופן רציף במהלך בידול hESC לאנדודרם סופי (DE).

שיטה יעילה לאינדוקציה מכוונת של תאים דמויי הפטוציטים מתאי גזע עובריים אנושיים

כדי להימנע מהמגבלות הקשורות למעבר אנזימטי או מכני של תאי גזע עובריים אנושיים (hESCs) ותאי גזע פלוריפוטנטיים המושרים על ידי בני אדם (hiPSCs) בתרבית על תאי הזנה, ביססנו שיטה מהירה, יעילה, חסכונית ובעלת תפוקה גבוהה לקצירת מושבות hESC או hiPSC המתוחזקות על שכבת תאי הזנה של פיברובלסטים אנושיים של עורלה באמצעות דיס-הדבקה בתיווך EDTA.

העברה מהירה, חסכונית ונטולת אנזימים של תאי גזע פלוריפוטנטיים אנושיים על תאי הזנה על ידי דיס-היצמדות בתיווך חומצה אתילאנדיאנטית

הפרוטוקול הנוכחי מראה כיצד להבדיל בין תאי CD3−/CD45+CD56+ עם ציטוטוקסיות קלה מתאי גזע פוטנציאליים מורחבים אנושיים (hEPSCs) בתנאי תרבית תלת-ממדית ודו-ממדית. זה מאפשר אימות פנוטיפי שגרתי ללא הרס של microenvironment מורכב.

יצירת תאי הרג טבעיים מתאי גזע פוטנציאליים מורחבים אנושיים

פרוטוקול זה מתאר את היצירה של אורגנואידים אנדודרמליים בכבד (eHEPOs) מהירים וניתנים לשחזור. בעזרת פרוטוקול זה, ניתן לייצר eHEPOs תוך שבועיים ולהתרחב לטווח ארוך (יותר משנה) מבלי לאבד את הבידול והפונקציונליות שלהם.

יצירת אורגנואידים פונקציונאליים בכבד אנדודרמלי

חקור שיטה יעילה לטיהור תאי אנדודרם ממיוחדים מתאי גזע עובריים אנושיים באמצעות מיון חרוזים מגנטיים. טכניקה זו מאפשרת קבלת אוכלוסייה טהורה לחקר ביולוגיה התפתחותית ויישומים תרפויטיים.

שיטה מהירה ויעילה עבור טיהור של תאים האנדודרם המופקים מתאי גזע עובריים אנושיים

גלה סרטונים נוספים