Abstract
Печень имеет большой потенциал к регенерации. Гепатоциты, паренхиматозные клетки печени, могут регенерировать в одном из двух способов: или hepatocyte- желчных приводом регенерации печени. В гепатоцитов приводом регенерации печени, регенерирующие гепатоциты получены из уже существующих гепатоцитов, тогда как в желчных приводом регенерации, регенерирующие гепатоциты получены из желчных эпителиальных клеток (БЭК). Для гепатоцитов приводом регенерации печени, есть отличные модели на грызунах, которые внесли значительный вклад в современном понимании регенерации печени. Однако такой модели грызунов не существует для желчных приводом регенерации печени. Мы недавно сообщили о данио модели повреждения печени, в которой БЭК широко породить гепатоцитов По тяжелой потерей гепатоцитов. В этой модели, гепатоциты специально удалена с помощью фармакогенетических средств. Здесь мы представляем подробно методы абляции гепатоциты и проанализировать БЭК-приводом процесс регенерации печени.Это гепатоцитов конкретных абляция модель может быть дополнительно использованы, чтобы обнаружить основные молекулярные и клеточные механизмы желчных приводом регенерации печени. Кроме того, эти методы могут быть применены к химическим экранов, чтобы определить небольшие молекулы, которые увеличивают или подавляют регенерацию печени.
Introduction
Печень является высоко регенеративного органом. Во время регенерации печени, регенерации гепатоцитов, паренхиматозные клетки печени, получены из уже существующих гепатоцитов (гепатоцитов приводом регенерации печени) или (БЭК желчных приводом регенерации печени) 1,2. Травмы печени, как правило, вызывает пролиферацию уже существующих гепатоцитов; Однако, когда пролиферации гепатоцитов под угрозу, БЭК может способствовать гепатоцитов 2-4. Эти два способа регенерации печени являются клинически значимыми. По хирургического удаления части печени человека (например, из опухолей печени или живых доноров печени), гепатоциты в оставшейся печени размножаться, чтобы восстановить утраченную массу печени. В отличие от этого, у пациентов с тяжелыми заболеваниями печени, пролиферации гепатоцитов в значительной степени нарушена, так что БЭК или клетки-предшественники печени (LPCS) по всей видимости, способствуют регенерации гепатоцитов 5,6. Грызунов 2/3 частичная резекция печени модель, в которойгепатоциты размножаться, чтобы восстановить утраченную массу печени, внес значительный вклад в современное понимание гепатоцитов приводом регенерации печени 7,8. Тем не менее, нет никаких веских модель грызунов, в котором регенерирующие гепатоциты в основном из БЭК. Хотя несколько моделей грызунов печени токсинов привело к идентификации желчных приводом регенерации печени 2-4, недавние предшественники отслеживания исследования на мышах показывают, минимальный вклад БЭК к регенерации гепатоцитов в этих моделях 9,10. Некоторые из моделей травмы грызунов печени, в том числе частичной гепатэктомии 11-13 и ацетаминофен-индуцированного повреждения печени 14,15, были применены к данио и привело к идентификации новых генов или путей, вовлеченных в регенерации печени. Тем не менее, гепатоцитов приводом, но не БЭК-приводом, регенерация печени происходит в этих рыбок данио модели травмы печени. Таким образом, роман модель травмы печени, в которой БЭК широко способствовать regeneratIng гепатоциты необходим для лучшего понимания БЭК приводом регенерации печени.
Общие цели абляции модели гепатоцитов, описанные здесь, (1), чтобы создать модель травмы печени, в которой БЭК широко способствовать регенерации гепатоцитов, и (2) выяснение молекулярных и клеточных механизмов, лежащих в основе БЭК-приводом регенерации печени. Мы предположили, что тяжесть травмы определяет режим регенерации печени; Таким образом, мы прогнозировали, что желчевыводящих приводом регенерации печени будет инициировать на тяжелой травмы гепатоцитов. Чтобы проверить эту гипотезу, мы разработали модель данио печени травмы путем создания трансгенной линии, ТГ (fabp10a: CFP-НТР) s931, что высоко выражает бактериальной нитроредуктазы (NTR), слитый с голубой флуоресцентный белок (CFP) под гепатоцитов конкретных fabp10a промоутер. С НТР преобразует нетоксичные пролекарства, метронидазол (МТЗ), в цитотоксическим препаратом, он ablates только предназначены NTR-экспрессирующих клеток 16-18, в данном случае, гепатоциты. Манипулируя продолжительность лечения МТЗ, степень гепатоцитов абляции может контролироваться. Используя эту модель, мы недавно сообщили, что на тяжелой потерей гепатоцитов, БЭК широко привести к регенерации гепатоцитов 19, которые дополнительно подтверждается двумя другими независимыми исследованиями 20,21. Таким образом, по сравнению с вышеупомянутой грызунов и данио модели повреждения печени, наша гепатоцитов абляции модель является более выгодным для изучения БЭК приводом регенерации печени.
Этот протокол описывает порядок проведения экспериментов регенерации печени с помощью данио модель гепатоцитов абляции. Эта модель будет уместно для определения механизмов, лежащих желчных приводом регенерации печени и химические экраны, чтобы определить небольшие молекулы, которые могут пресечению или усиливают регенерацию печени.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Данио рерио были подняты и вырос по стандартной методике; Эксперименты были одобрены Университета Питтсбурга Институциональные животных уходу и использованию комитета.
1. Подготовка эмбрионов / личинки
- Для проведения приурочен вязки, создать взрослый мужчина и женщина Tg (fabp10a: CFP-NTR) s931 гемизиготных или гомозиготные рыбы O / N и поместить делитель между ними. Удалить Этот делитель на следующее утро, когда спаривание лучшего. Сбор эмбрионов, напрягая воду, используя тонкую фильтр пластиковая сетка.
- Поверните фильтр вниз и промыть поверхность сетки с тонкой струйкой яичного воды, распределяемой из бутылки сжатия. Передача 100 эмбрионов в 100 мм чашки Петри с 25 мл яичного воды. Хранить не более 100 эмбрионов в чашку Петри и поднимать их при 28 ° С.
- Для подавления пигментации, добавить фенилтиомочевины (ПТУ) в чашках Петри до 10 ч после оплодотворения (ФВЧ), а также повысить еmbryos / личинки до 80 часов после оплодотворения. Конечная концентрация ПТУ 0,2 мм. ВНИМАНИЕ: ПТУ является токсичным. Использование в соответствии с соответствующими руководящими принципами обработки.
- Обезболить личинок добавлением 3-амино бензойной кислоты (Tricaine), в конечной концентрации 0,016%, в чашках Петри. Затем, используя микроскоп, эпифлуоресцентной рода СФП-положительных личинок. Использование личинок с аналогичным размером печени и отбросить те, с большей или меньшей печени.
Примечание: любой КФП-положительных личинки, независимо от интенсивности, могут быть использованы, потому что нет никакой разницы в степени гепатоцитов абляции между гемизиготных и гомозиготной личинок. ВНИМАНИЕ: Tricaine является токсичным. Использование в соответствии с соответствующими руководящими принципами обработки. - Удалить яйца водой, содержащей Tricaine и добавьте яичный воды с добавлением 0,2 мМ ПТУ. Держите эмбрионов / личинки при 28 ° C.
2. Лечение Mtz
- Подготовка свежий раствор 10 мМ МТЗ путем растворения 0,171 г порошка МТЗ в 100 мл воды яйцо с добавлением 0,2% ДМСО и 0,2 мМ ПТУ. Для полного растворения МТЗ, перемешать раствор при КТ с быстрым перемешиванием в течение 20-30 минут. Чтобы помочь растворить МТЗ и повышения МТЗ проникновение в личинок, добавить DMSO при подготовке МТЗ. ВНИМАНИЕ: Длительное воздействие или повышение концентрации МТЗ является токсичным. Использование в соответствии с соответствующими руководящими принципами обработки.
- Отдельные личинок в контрольных и опытных групп путем передачи требуемого количества личинок в двух разных 100 мм чашки Петри или нескольких луночного планшета. Для экспериментальной группы, держать личинки в 10 мМ раствора МТЗ; в контрольной группе, держать их в яичном воды, содержащей 0,2% ДМСО.
- Покрытие пластин или чашки Петри, содержащие раствор MTZ с алюминиевой фольгой, чтобы предотвратить фото-инактивации Mtz, и инкубируют при 28 ° С. Продолжительность лечения зависит от MTZ личиночной стадии и трансгенной линии.
- Для наблюдения подобный серьезный гепатоцитов абляции в
3. Анализ желчных приводом печени Регенерация
- В конце периода абляции, удаления раствора MTZ из пластин. Вымойте МТЗ-обработанного личинок, добавив 25 мл яичного воды. Вихревой пластины 2-3 раза, чтобы промыть личинки, прежде чем выбросить яйцо воды. Повторите три раза, а затем погрузить личинки еще раз в яйце воды. Чтобы избежать сердечного отека и личинок смерть в MTZ-обработанной личинок, добавить низкую концентрацию Tricaine, в конечной концентрации 0,008%, для иммобилизации личинки.
- Для анализа печени, изучить размер печени в МТЗ-обработанной личинок под микроскопом эпифлуоресцентной с CFP фильтра. Оценка уровня абляции гепатоцитов, основанные на относительном размере печени: большая (не удалена; 0-10% личинок), средний (частично удалена; 10-20%), и очень мало (полностью удалена; 80-90%).
- Удалить личинки с не-абляции или частично удалена печени. Только держите личинок с крошечной печени, что свидетельствует о тяжелой гепатоцитов абляции. Для анализа печени при регенерации 0 раз ч точке (R0h), урожай личинки после МТЗ вымывания и CFP сортировки. В противном случае, держать отсортированный личинок в яичном воды не дополненную 0,2 мМ ПТУ до готовности к уборке урожая.
- Передача собранного личинок в 1,5 мл микроцентрифужных трубки и заменить яичный воду с фиксирующем растворе 3% формальдегида в PEM буфера. Инкубируйте пробирку на вращатель O / N при 4 ° С.
- Заменить фиксирующем растворе с 1 мл PBSDT и вращать трубки, содержащей личинки на ротатор в течение 5 мин.
- Перевести фиксированный личинок в 100 мм чашку Петри, содержащую PBSDT и с помощью щипцов, вручную удалить желток и грудные плавники при вскрытии микроскопом. Трансфер до TP 20 расчлененного личинок в 1,5 мл трубки. <Li> Заменить раствор PBSDT 1 мл блокирующего раствора и рок трубки на ротатор при комнатной температуре в течение 2 часов.
- Заменить блокирующего раствора с 100 мкл блокирующего раствора, содержащего первичные антитела. Медленно раскачивать трубки на ротатор O / N при 4 ° С.
- Удалить раствор первичного антитела и промыть PBSDT 5 раз в течение 10 мин каждый раз. Затем добавляют 100 мкл блокирующего раствора, содержащего вторичные антитела, и качать его на ротатор при комнатной температуре в течение 2ч.
- Вымойте 5 раз с PBSDT на 10 мин каждый раз при комнатной температуре в покачиваясь на ротатора.
- Ориентируйте личинок в боковом направлении на предметное стекло микроскопа и добавить каплю монтажных средств массовой информации. Тщательно покрыть их с крышкой стекла и запечатать крышку стекла с ногтей полировщик. Теперь она готова для конфокальной микроскопии.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Лечение Mtz в течение 36 ч (A36h, стоит абляции) от 3,5 до 5 денье резко уменьшенного размера печени (рис 1B). После вымывания МТЗ, рассматривается как начало регенерации печени (R), сильной fabp10a: CFP-NTR и fabp10a: выражение Dsred появился в 30 ч (рис 1B). Внутрипеченочного билиарного сети, как определено по экспрессии ALCAM, который присутствует в мембране БЭК 22, первоначально разрушилась, но была восстановлена в 54 ч после смыва (R54h) (рис 1c). Эти данные показывают, что регенерация и восстановление печени происходит быстро в нашей модели повреждения печени.
Рисунок 2 показывает, что регенерирующие гепатоциты являются производными от БЭК. ТГ (Tp1: H2B-mCherry) S939 линия выражает ядерного красный флуоресцентный белок под контролем элемента, содержащего 12 КПБ-Jĸ сайты связывания 23. Это Нотч Respoонительных элемент появляется возможность управлять экспрессией гена исключительно в БЭК в печени 24; Однако, вполне возможно, что он приводит в действие экспрессию гена в LPCS потому Notch сигнальной тесно связаны с LPCS 25. Таким образом, эта линия трансгенной позволяет легко определять БЭК, и, вероятно, LPC, ядра. Кроме того, расширенная стабильность разрешений слитый белок краткосрочной отслеживания клонов H2B-mCherry. Большинство H2B-mCherry + клетки в регенерирующей печени в R0h выразил Hnf4α (рис 2а), которая выражается в гепатоцитах, но не в БЭК, в контрольной печени. Гепатоциты, по оценке fabp10a: выражение CFP-NTR, в R48h еще сохраняется ТР1: выражение H2B-mCherry (рис 2B, стрелки). Эти данные показывают, BEC преобразование в гепатоцитах По тяжелой потерей гепатоцитов, который дополнительно подтверждается постоянным линия трассировки 19.
Рисунок 1. данио модель травмы печени. () Схема, иллюстрирующая периоды лечения МТЗ и регенерации печени. (Б) 36 ч лечение Mtz значительно снижается размер печени и fabp10a: СФП и fabp10a: Dsred флуоресценции при R0h; Однако, сильный СФП и флуоресценции Dsred появился на R30h. Стрелки указывают на печени (Li). (С) конфокальной проекционные вид на весь печени иммуноокрашиванию с анти-ALCAM антител, которые помечены БЭК. Внутрипеченочных желчных сеть рухнула на R0h, но быстро восстанавливается в R54h. Пунктирные регионы наметить печень. Масштабные бары:. 100 (B), 20 (С) мкм Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
_upload / 52785 / 52785fig2.jpg "/>
Рисунок 2. БЭК привести к гепатоцитов По тяжелой потерей гепатоцитов (A) Конфокальные просмотров проекции печени, показывающие Hnf4α (зеленый) и ТР1:. H2B-mCherry (красный) выражение в R0h. (Б) конфокальной раздел изображения одиночные-оптических показывающие fabp10a: CFP-NTR (серый) и Tp1: H2B-mCherry (красный) выражение в печени. Выражение mCherry было выявлено анти-mCherry иммунным. Обратите внимание на слабую выражение mCherry в ядрах гепатоцитов СФП + (стрелки). Сильный mCherry + клетки БЭК. Масштабные бары:. 20 мкм Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Тяжелая, но не мягкий, гепатоцитов абляция вызывает желчных приводом регенерации печени. Таким образом, после обработки MTZ и вымывание, важно рассмотреть размер печени в MTZ-обработанной личинок, которые могут быть оценены с помощью собственной флуоресценции CFP от fabp10a: CFP-NTR трансгена. Так небольшой процент от MTZ-обработанной личинок будет отображаться без абляции (0-5%) или частично удалена (10-20%) печень, очень важно, чтобы разобраться и анализировать только личинки с очень небольшим печени, который свидетельствует о тяжелой гепатоцитов абляции.
Хотя в нашем протоколе, мы относились данио личинок Mtz от 3,5 до 5 DPF (период обращения 36 ч), альтернативные этапы и продолжительность лечения МТЗ, также возможно. Например, личинки лечение от 5 до 6 денье (период обращения 24 ч) также выставлены тяжелой гепатоцитов абляции, похожего на указанный период лечения 36 ч. Два дополнительных групп независимо генерируетсяпохоже fabp10a: NTR трансгенных линий, а также сообщил о процессе желчных приводом регенерации печени следующем гепатоцитов конкретных абляции. В то время как одна группа лечить личинок с Mtz от 6 до 7 DPF 21, другой сделал так от 3,5 до 4,5 денье, достигнув подобные выводы 20. С каждой fabp10a: NTR трансгенных линия может проявлять различный уровень экспрессии NTR, продолжительность и дозировка лечения МТЗ должны быть определены отдельно для каждого из трансгенной линии используется. Это может оказаться полезным для генерации трансгенной линии с расширенной версией гена NTR, в котором введение трех точечных мутаций приводит к увеличению его ферментативной активности 26. Этот мутант NTR приведет к более быстрому случае абляции, чем дикого типа NTR 26. Это особенно выгодно, когда дикого типа NTR кинетика может ограничить возможность полного удаления клеток на определенной стадии.
С сотнями личинокмогут одновременно проходить гепатоцитов абляции, это данио модель печени травмы могут быть применены к химическим экранов, чтобы определить небольшие молекулы, которые могут подавлять или усиливают желчных приводом регенерации печени. Например, с помощью этой модели, Шин группа в Джорджии провели химический экран и нашел несколько агонистов Wnt и Notch антагонисты, которые способствовали регенерации печени 20. Мы также провели небольшой масштаб химический экран и определили несколько соединений, которые могут подавить регенерацию печени (SK, TYC, JS, и DS, в подготовке).
Маркер анализирует люди предположили, что БЭК может способствовать регенерированных гепатоцитов в больной печени 5,6. Группа доктора Wanless 'недавно сообщил, что большой процент паренхимы в регресс цирроза, кажется, быть получены из LPCS / БЭК в людях 27, подразумевая важность БЭК-приводом регенерации печени при циррозе регрессии. Учитывая тот факт, что БЭК в основномвнести свой вклад в регенерирующих гепатоцитов в данио модели повреждения печени, описанной здесь, эта модель будет бесценным инструментом для определения клеточные и молекулярные механизмы, лежащие в основе БЭК-приводом регенерации печени. Понимание этих механизмов обеспечит значительные понимание того, как увеличить врожденное регенерации печени у пациентов с тяжелыми заболеваниями печени. Кроме того, в сочетании с химическими экранов, это данио модель может быть полезным в идентификации потенциального препарата, который может способствовать врожденную регенерацию печени у пациентов-людей.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих финансовых интересов.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 3-amino benzoic acid ethyl ester (Tricaine) powder | Sigma-Aldrich | A5040 | Make 0.4% (15 mM) tricaine stock : Bring 0.4 g tricaine to 100 mL with egg water. Adjust to pH 7. |
| Dimethyl sulfoxide (DMSO) | Sigma-Aldrich | D8418 | |
| Metronidazole | Sigma-Aldrich | M1547 | |
| Triton X-100 | Sigma-Aldrich | T8532 | |
| Formaldehyde | Sigma-Aldrich | 252549 | |
| Calcium sulfate dihydrate | Sigma-Aldrich | C3771 | |
| N-Phenylthiourea (PTU) | Sigma-Aldrich | P7629 | |
| Mounting media (Vectashield) | Vector Laboratories | H-1000 | |
| 100 x 15 mm petri dish | Denville Scientific Inc. | M5300 | |
| clear nail polish | Fisher Scientific | 50949071 | |
| fine forceps | Fine Science Tools | 11251-20 | Dumont #5 |
| glass slide | Fisher Scientific | 12-544-1 | |
| glass coverslip | Fisher Scientific | 12-540-A and 12-542-A | 18 x 18 mm |
| zn-5 (mouse anti-Alcam) | ZIRC | zn-5 | 1:10 dilution |
| goat anti-Hnf4a | Santa Cruz | sc-6556 (C-19) | 1:50 dilution |
| rat anti-RFP | Allele Biotechnology | ACT-CM-MRRFP10 | 1:300 dilution |
| AlexaFluor 647 AffiniPure Donkey Anti-goat IgG (H+L) | Jackson laboratories | 705-605-147 | 1:500 dilution |
| AlexaFluor 647 AffiniPure Goat Anti-mouse IgG (H+L) | Invitrogen | A21240 | 1:500 dilution |
| Cy3 donkey anti-rat IgG | Jackson laboratories | 712-165-150 | 1:500 dilution |
| dissecting microscope | Leica Microsystems | S6F | |
| epifluorescence microscope | Leica Microsystems | M205FA | |
| confocal microscope | Carl Zeiss | LSM700 | |
| egg water | 0.3 g/L of sea salts ‘Instant Ocean’ and 0.5 mM CaSO4 in distilled water. |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 10X PBS | 25.6 g Na2HPO4·7H2O, 80 g NaCl, 2 g KCl, 2 g KH2PO4. Bring to 1 L with distilled water. Adjust pH 7. Autoclave for 20 min at 121°C. | ||
| 1X PBSDT | 0.2% Triton X-100 and 0.2% DMSO in 1 X PBS. | ||
| PEM buffer | 30.2 g PIPES, 761 mg EGTA, 1 mM MgSO4. Bring to 1 L with distilled water. Adjust pH 7. | ||
| Blocking solution | Mix 1 ml of heat-inactivated horse serum with 9 ml of 1X PBSDT. |
References
- Riehle, K. J., Dan, Y. Y., Campbell, J. S., Fausto, N.
- Fausto, N., Campbell, J. S. The role of hepatocytes and oval cells in liver regeneration and repopulation. Mechanisms of Development. 120, 117-130 (2003).
- Duncan, A. W., Dorrell, C., Grompe, M. Stem Cells and Liver Regeneration. Gastroenterology. 137, 466-481 (2009).
- Michalopoulos, G. K. Liver regeneration: Alternative epithelial pathways. Int J Biochem Cell B. 43, 173-179 (2011).
- Falkowski, O., et al. Regeneration of hepatocyte 'buds' in cirrhosis from intrabiliary stem cells. Journal of hepatology. 39, 357-364 (2003).
- Yoon, S. M., et al. Epithelial Cell Adhesion Molecule (EpCAM) Marks Hepatocytes Newly Derived from Stem/Progenitor Cells in Humans. Hepatology. 53, 964-973 (2011).
- Michalopoulos, G. K.
- Michalopoulos, G. K. Liver Regeneration after Partial Hepatectomy Critical Analysis of Mechanistic Dilemmas. Am J Pathol. 176, 2-13 (2010).
- Yanger, K., et al. Adult hepatocytes are generated by self-duplication rather than stem cell differentiation. Cell stem cell. 15, 340-349 (2014).
- Schaub, J. R., Malato, Y., Gormond, C., Willenbring, H. Evidence against a Stem Cell Origin of New Hepatocytes in a Common Mouse Model of Chronic Liver Injury. Cell reports. 8, 933-939 (2014).
- Dovey, M., et al. Topoisomerase II alpha is required for embryonic development and liver regeneration in zebrafish. Molecular and cellular biology. 29, 3746-3753 (2009).
- Goessling, W., et al. APC mutant zebrafish uncover a changing temporal requirement for wnt signaling in liver development. Developmental Biology. 320, 161-174 (2008).
- Sadler, K. C., Krahn, K. N., Gaur, N. A., Ukomadu, C. Liver growth in the embryo and during liver regeneration in zebrafish requires the cell cycle regulator, uhrf1. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 104, 1570-1575 (2007).
- Cox, A. G., et al. S-nitrosothiol signaling regulates liver development and improves outcome following toxic liver injury. Cell reports. 6, 56-69 (2014).
- North, T. E., et al. PGE2-regulated wnt signaling and N-acetylcysteine are synergistically hepatoprotective in zebrafish acetaminophen injury. Proc Natl Acad Sci U S A. 107, 17315-17320 (2010).
- Curado, S., et al. Conditional targeted cell ablation in zebrafish: A new tool for regeneration studies. Developmental Dynamics. 236, 1025-1035 (2007).
- Pisharath, H., Rhee, J. M., Swanson, M. A., Leach, S. D., Parsons, M. J. Targeted ablation of beta cells in the embryonic zebrafish pancreas using E. coli nitroreductase. Mech Dev. 124, 218-229 (2007).
- Curado, S., Stainier, D. Y. R., Anderson, R. M. Nitroreductase-mediated cell/tissue ablation in zebrafish: a spatially and temporally controlled ablation method with applications in developmental and regeneration studies. Nat Protoc. 3, 948-954 (2008).
- Choi, T. Y., Ninov, N., Stainier, D. Y., Shin, D. Extensive conversion of hepatic biliary epithelial cells to hepatocytes after near total loss of hepatocytes in zebrafish. Gastroenterology. 146, 776-788 (2014).
- Huang, M., et al. Antagonistic interaction between Wnt and Notch activity modulates the regenerative capacity of a zebrafish fibrotic liver model. Hepatology. , (2014).
- He, J., Lu, H., Zou, Q., Luo, L. Regeneration of liver after extreme hepatocyte loss occurs mainly via biliary transdifferentiation in zebrafish. Gastroenterology. 146, 789-800 (2014).
- Sakaguchi, T. F., Sadler, K. C., Crosnier, C., Stainier, D. Y. Endothelial signals modulate hepatocyte apicobasal polarization in zebrafish. Curr Biol. 18, 1565-1571 (2008).
- Ninov, N., Borius, M., Stainier, D. Y. R. Different levels of Notch signaling regulate quiescence, renewal and differentiation in pancreatic endocrine progenitors. Development. 139, 1557-1567 (2012).
- Lorent, K., Moore, J. C., Siekmann, A. F., Lawson, N., Pack, M. Reiterative use of the notch signal during zebrafish intrahepatic biliary development. Developmental dynamics : an official publication of the American Association of Anatomists. 239, 855-864 (2010).
- Itoh, T., Miyajima, A. Liver Regeneration by Stem/Progenitor Cells. Hepatology. 59, 1617-1626 (2014).
- Mathias, J. R., Zhang, Z., Saxena, M. T., Mumm, J. S. Enhanced cell-specific ablation in zebrafish using a triple mutant of Escherichia coli nitroreductase. Zebrafish. 11, 85-97 (2014).
- Stueck, A. E., Wanless, I. R. Regression of cirrhosis: The maturation sequence of buds arising from hepatocyte progenitor cells. Hepatology. 58, 235A (2013).
