Summary
Mange gnavermodeller af endometriose er begrænset af teknisk kompleksitet, reproducerbarhed og/eller behov for immunkompromitterede dyr eller specielle reportermus. Vi præsenterer et forenklet system af læsionsinduktion ved hjælp af enhver eksperimentel mus med et uafhængigt verificerbart, objektivt scoringssystem og uden krav om ovariektomi eller overlevelseskirurgi.
Abstract
Endometriose er en førende årsag til bækkensmerter og infertilitet. Det er defineret ved tilstedeværelsen af endometrievæv på ekstrauterin steder. Udviklingen af nye behandlingsformer og diagnostiske værktøjer til endometriose har været begrænset på grund af udfordringer i forbindelse med undersøgelsen af sygdommen. Uden for primater, få pattedyr menstruation, og ingen udvikler spontan endometriose. Gnavermodeller er populære, men kræver kunstig induktion af endometriose, hvor mange bruger enten immunkompromitterede mus eller kirurgisk induceret sygdom. For nylig er der blevet lagt mere vægt på modeller, der involverer intraperitoneal injektion. Vi præsenterer en murin model af endometriose, der integrerer flere funktioner i eksisterende endometriose modeller i et nyt, forenklet system, der er afhængig af mikroskopiske kvantificering i stedet for subjektive klassificering. I denne model udfører vi hormonel stimulation af donormus, intraperitoneal injektion, systematisk abdominal undersøgelse og vævshøst og histologiske kvantificering, der kan udføres og verificeres når som helst efter obduktion. Denne model kræver minimale ressourcer og uddannelse; ikke kræver ekspertise fra laboratorieteknikere i forbindelse med overlevelseskirurgi af murin eller identifikation af grove endometriotiske læsioner kan anvendes i immunkompromitterede, immunkompetente og/eller mutantmus og pålideligt skaber endometriotiske læsioner, der er histologisk i overensstemmelse med menneskets endometriotiske sygdom.
Introduction
Endometriose er en gådefuld sygdom i den kvindelige reproduktive tarmkanal med betydelige økonomiske og sundhedsmæssige byrder på kvinder1,2. Endometrioseens ætiologi er ikke helt forstået, og der er foreslået flere forklaringer, herunder coelomisk metaplasi, embryonale Müllerian hviler, rekruttering af knoglemarvsafledte stamceller og retrograd menstruation3. Mens flere aspekter af disse foreslåede mekanismer kan være involveret, og ingen enkelt forklaring kan tegne sig for alle former for sygdommen, den førende model for endometriose patogenese er retrograd menstruation. Retrograd menstruation er passagen af menstruationsspildevand gennem æggelederne og ind i peritonealhulen; det anslås, at 90% af menstruationskvinder regelmæssigt gennemgår retrograd menstruation4,5. I betragtning af dette almindelige fænomen med retrograd menstruation, hvorfor endometriose kun udvikler sig i en delmængde af kvinder er uklart5. For bedre at forstå ætiologien af denne sygdom er direkte humane undersøgelser ikke mulige, og dyreforsøg er berettigede.
Endometriose er en udfordring både at behandle og studere. Prævalensen af sygdommen kendes ikke, men skønnes at være 10%1. Mens nogle avancerede typer af endometriose kan identificeres nøjagtigt gennem ikke-invasiv billeddannelse, opnås en endelig diagnose kun gennem histopatologiske analyser af kirurgisk opnåede biopsiprøver; læsioner, der visuelt ser ud til at være syge, kan faktisk være fibrose eller ardannelse fra andre årsager6. Sværhedsgraden og omfanget af sygdommen korrelerer ikke med symptomatologi7.
Endometrioselæsioner består af heterogene celletyper og populationer, der interagerer på komplekse måder inden for mikromiljøet, hvilket begrænser nytten af cellulære modeller8,9. In vivo-modeller findes, men disse har iboende udfordringer og begrænsninger10,11,12. Primatmodeller er ideelle , men er ofte ikke gennemførlige13,14,15. Få ikke-primat pattedyr menstruere og udvikle endometriose spontant16. Gnavermodeller af endometriose findes, men hver har begrænsninger17. Mange af disse modeller kræver overlevelse kirurgi for at sutur eller implantat endometrie væv i donor modtageren væg eller tarm, tilføjer teknisk kompleksitet, behov for anæstesi, og forvirrende immunfaktorer fra selve operationen18,19,20. Derudover kræver mange modeller ovariektomi og østrogentilskud; mens øge læsion udbytte, dette tilføjer tid, omkostninger, og yderligere overlevelse kirurgi. Intraperitoneal (IP) injektionsmodeller kræver ikke anæstesi eller overlevelseskirurgi, og disse modeller simulerer logisk retrograd menstruation bedre end at suturere modeller21,22,23. De fleste IP-modeller er imidlertid udsat for større variation i læsionsplaceringen på grund af den tilfældige spredning af endometriefragmenter efter injektionen og derfor mere bias i læsionsidentifikation og -måling.
Her præsenterer vi en murine model af endometriose, der integrerer flere funktioner i eksisterende endometriose modeller i en ny, forenklet og effektivt system, der er afhængig af mikroskopiske kvantificering i stedet for subjektive klassificering.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
BEMÆRK: Brugen af dyr i denne undersøgelse blev godkendt af Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) på Cleveland Clinic Lerner Research Institute. Alle offentligt tilgængelige standarder for dyrepleje og -anvendelse blev udført i retningslinjerne af National Institutes of Health. Denne procedure bruger aseptiske teknikker. Petriskålen er steril. Den anvendte PBS/saltvand er steril. De kirurgiske instrumenter til obduktion og vævsdissektion steriliseres via autoklave. Vi bruger 70% EtOH på instrumenterne mellem dyretilfælde (hvis mere end en pr. Session) for at reducere forureningen.
1. Forberedelse af donormus og recipientmus (se figur 1)
- Sørg for, at der er indført passende godkendelse til at arbejde med forsøgsdyr.
- Bestem belastningen af musen. I disse eksperimenter blev wildtype og mutant mus med C57BL/6J baggrund udnyttet, men efterforskere ved hjælp af lignende modeller rapporterer succes med andre musestammer som BALB / c mus10. Desuden kan donor- og/eller recipientmus anvende reportersystemer, f.eks.
- For timingen af endometrievævstransplantationen skal du sikre dig, at donormusene er mellem 22-24 dage gamle på tidspunktet for gonadotropinin injektion. Dette sikrer, at de er reproduktivt naive, f.eks. endnu ikke begyndt at anse cykling.
- Sørg for, at recipientmusene er reproduktivt intakte (ingen tidligere ovariektomi) mellem 2 og 4 måneder. Selvom det ikke er nødvendigt, anbefales det at placere urin-gennemblødt strøelse fra en mandlig mus bur periodisk i modtagerens bur for at lette igangværende estøs cykling og igen på 72 timer før endometrie væv transplantation.
BEMÆRK: Dette vil ikke sikre synkronisering af modtagernes estøse cyklus, da placeringen af urin-gennemblødt strøelse er meget afhængig af mængden af mandligt strøelse, der anvendes og har variable resultater. Hvis der ønskes synkronisering af østingscyklussen, vil tre på hinanden følgende subkutane injektioner på 100 ng/100 μL østradiol bringe alle dyr til den estøse fase. Mens vi fandt ingen forskel i læsion induktion baseret på fase af estøs cyklus, andre grupper har fundet cyklus fase at være vigtig10. - Injicer underkutant gravid Mare Serum Gonadotropin (PMSG, 2 IE fortyndet til 200 μL) i donormus subkutant ved hjælp af en fin nål (25-27 G anbefales). Giv ikke PMSG til recipientmus, da det vil udløse ægløsning og efterfølgende højt progesteronmiljø, som er mindre modtageligt for endometriosedannelse.
BEMÆRK: Tidligere musemodeller har udnyttet enten PMSG eller østrogen til at stimulere endometrieproliferation hos donormusene inden endometriehøsten23. PMSG anbefales af følgende årsager: Halveringstiden for PMSG er 40 timer, mens halveringstiden på 17-beta-østradiol kun er 2 timer. Ved hjælp af en enkelt subkutan injektion af PMSG i donorerne 40 timer før udtagning af endometrievæv giver en vedvarende varighed af eksponering for gonadotropin stimulation, som virker til at stimulere endogene østrogen. Mange præparater af udefrakommende østrogen kræver flere injektioner til tilstrækkeligt prime endometrium. - Efter PMSG injektion, planlægge obduktion, indkøb, og transplantation til modtageren mellem 38-42 timer. Tid endometrie væv høst efter gonadotropin injektion for at sikre indsamling af væv før ægløsning, som forekommer ved 42 timer efter injektion. Ægløsning producerer et højt progesteron (P4) miljø, hvilket ville reducere læsion etablering.
2. Indkøb af donormus endometrievæv
- Efter aktiv dødshjælp af donormus (ved hjælp af CO2 kammer efterfulgt af livmoderhalskræft dislokation), spray maven med 70% ethanol opløsning; dette tjener til at reducere forureningen af det indkøbte væv fra hudfloraen og fra løsnede hår. Med dissekering saks, lave en lavvandet tværgående klip på midterlinjen gennem huden og subkutane væv. Derefter greb hver side af hudens snit, brug stump trækkraft til at åbne maven.
- Identificer livmoderen. Før du fjerner livmoderen, trim væk tilstødende bindevæv. Transect hver livmoder horn lige under deres respektive æggeleder og derefter transect livmoderhalsen for at fjerne hele livmoderen en bloc.
- Efter fjernelse fra bughulen skal livmoderen inspiceres omhyggeligt og fjern yderligere perifert fedt eller bindevæv. Placer livmoderen i en dråbe kold PBS på en petriskål. Bestem og dokumenter den kombinerede masse af hele livmoderen.
- Transect hvert horn fra livmoderen fundus, hvilket gør transsektion så tæt på fundus som muligt for at maksimere længden af hvert horn. Ved hjælp af et dissekerende mikroskop skal du placere et blad af dissekerende saks inde i lumen af det første horn og derefter skære langs rørets hovedakse. Åbn forsigtigt røret, idet du skal huske på, hvilken side der er serosa, og hvilken side der er epitelet.
- Sæt 500 cc saltvand eller PBS på en ny petriskål; væsken forbliver sammen på grund af overfladespænding.
- Udfør derefter fragmentering af livmoderen på en ensartet måde. Det er bedre at have færre større læsioner end mange mindre læsioner. Begynd med at adskille epitelet fra myometriumet ved at gribe endometrilaget og skrælle det væk.
- Alternativt skal du blot fragmentere vævet uden at adskille myometrium (så længe epitelsiden er fuldt eksponeret), men at bevare myometrium mindsker den fysiologiske relevans af denne model for menneskelig sygdom. Sørg for, at fragmenterne er så store som muligt, men små nok til at passere gennem en 18 G nål; (1 mm x 1 mm anbefales).
- Opsaml 10-12 af disse 1 mm x 1 mm fragmenter fra det første horn (hvilket stort set svarer til 40 mg væv i C57BL/6J mus). Placer opsamlede fragmenter i væskeopsamlingen.
- Udfør de samme trin for det andet livmoderhorn i alt ca. 24 fragmenter pr. Mus. Dokumenter det samlede antal fragmenter.
3. Peritoneal injektion af vævsfragmenter i modtagermus
- De ophængte 1 mm x 1 mm fragmenter aspireres ved hjælp af den stumpe ende af en 1 cc sprøjte. det samlede volumen skal være 1 mL.
- Fastgør en 18 G nål til hele sprøjten og læg væsken i nålen. Overvej en mock injektion tilbage i Petri parabol for at sikre, at alle væv vil passere gennem nålen.
- Tag modtagermusen. Enten før eller efter IP-injektionen fås en vaginal udtværing af modtagermusen til dokumentation for estøs cyklus (10 μL saltvand ved hjælp af pæresprøjten ved vaginalåbningen og belagt på glasrutsjebanen med coverlip).
- Udfør intraperitoneal injektion af fragmenterne med sprøjten i en 45 graders vinkel, idet du sørger for ikke at injicere subkutant.
- Hvis der er fragmenter tilbage efter injektionen, trækkes yderligere 200 μL af væsken ind i sprøjten til injektion for at sikre, at alle fragmenter injiceres intraperitonealt.
- Når du er sikker på ingen blødning eller komplikationer, skal du placere modtagermusene tilbage i deres bure og fodre en normal kost.
4. Høst af endometriotiske læsioner
- Aflive modtagermus på ca 21 dage efter fragment injektion efter transplantation.
BEMÆRK: Af erfaring og fra diskussion med samarbejdspartnere, der bruger lignende modeller, forekommer den maksimale læsionsstørrelse og -nummer ca. 3 uger efter transplantationen; efter 3 uger begynder læsioner at falde tilbage i størrelse. Den IACUC-godkendte metode til aktiv dødshjælp anvendes. - Efter aktiv dødshjælp og livmoderhalskræft dislokation, spray dyrets underliv med 70% ethanol og telt huden til at skære overfladisk med dissekere saks. Incise huden og subkutane rum med en saks til stumpt åbne maven.
- Inden der foretages yderligere dissektion, udføres en fuldstændig undersøgelse for bruttolæsioner med en størrelse målt ved calipre og dokumenteret med hensyn til deres anatomiske region (se nedenfor).
- Udfør komplet samling af tre forskellige anatomiske regioner en bloc (uanset om læsioner kan værdsættes groft). Hvis læsioner ses i andre regioner (f.eks. tarme), bør disse ignoreres og ikke indsamles, medmindre læsionen krydser et af de tre områder nedenfor.
- A = mavevæg/peritoneum (kan enten flades ud i en kassette eller rulles op, så længe det er konsistent mellem prøverne).
- B = bugspytkirtel og mesenterisk fedt.
- C = parauterin bindevæv og fedt (hvidt glinsende væv, der omgiver livmoderen, men ikke involverer andre organer end blæren; pas på ikke at forveksle blæren med en læsion).
- Placer hvert dissekeret område i en kassette, passende mærket, og læg det i formalin og behandle som pr lab protokol for histologiske sektion.
- Sektion formalin blokke i to dias (D1 og D2) pr væv område på to ensartede dybder.
5. Scoring af endometriotiske læsioner
- Scan (ved 40x forstørrelse) og arkiver dias.
- Brug digital slide læsning software, definere den længste afstand (X) mellem kanterne af en endometriotisk læsion, om kanten består af kirtler eller stroma-og markere det. En kontinuerlig læsion er defineret af kirtler omgivet af stroma; linjen ikke nødvendigvis kun gennemkøres endometriotisk væv (som det er tilfældet med bestemmelse af endepunkter på et uregelmæssigt formet eller bølgende fokus for endometriose), men de to endepunkter skal forbindes med kontinuerlig stroma og/eller kirtler (se figur 4).
- Lav en anden linje (Y) 90 grader over den første linje, hvor længden af den anden linje bestemmes efter ovenstående regler.
- Hvis der opstår flere ikke-sammenhængende læsioner, skal du give hver deres egne X- og Y-målinger.
- Beregn den endelige score for hvert dias som summen af områder (X*Y) for hver læsion.
- Tag den største af resultaterne fra de to dias (D1 vs D2) som den endelige score for det pågældende område (A, B, C).
- I alt scorer fra hver region for at give den endelige mikroskopiske score for det pågældende dyr.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
For et indledende proof of concept-eksperiment blev donor endometrium fra RFP-mus injiceret i vilde recipientmus. H &E farvning afslørede histopatologisk bekræftelse af klassisk arkitektur af endometriose læsion (Figur 3A). Fluorescerende mikroskopi bekræftede, at den pågældende observerede læsion stammede fra donoren (figur 3B).
Det andet eksperiment blev udført ved hjælp af 10 wildtype C57BL/6J donorer og 10 modtagere. Yderligere 5 modtagere fik falsk behandling (injiceret med PBS og ikke endometriefragmenter) og tildelte et tilfældigt identifikationsnummer; anmeldere blev blændet før obduktion og histopatologisk gennemgang.
Alle modtagere modtog donor endometrievæv inden for 42 timer efter PSMG donor behandling. Der var ingen sammenhæng mellem dette tidsinterval og den endelige livmodervægt eller læsionsstørrelse. På tidspunktet for donorindkøb var den gennemsnitlige samlede livmodervægt 54 ± 9,5 mg. Det gennemsnitlige fragmenttal var 22,4 ± 5,2, hvilket resulterede i en gennemsnitlig fragmentvægt på 2,5 ± 0,5 mg. Endpoint kirurgi fandt sted på enten dag 20 eller dag 22 for alle modtagere.
Med et gennemsnitligt antal læsioner på 1,5 og en gennemsnitlig samlet bruttolæsionsdiameter på 3,7 mm svarer disse endepunkter til andre undersøgelser, der anvender musemodeller med en lignende vægt af injicerede endometriefragmenter (figur 2)10. Forekomsten af læsioner for alle mus var 80%. Mus uden læsioner havde betydeligt større endometriefraktion sammenlignet med mus med læsioner (henholdsvis 30,5 samlede fragmenter mod 20,3; de gennemsnitlige samlede fragmenter for alle mus var 22,4), hvilket resulterede i under gennemsnittet fragmentstørrelse på injektionstidspunktet (1,9 mg vs. 2,6 mg). Som forventet havde falske kontroller (injiceret med saltvand og ikke endometriefragmenter) ingen grov eller mikroskopisk sygdom. I en efterfølgende undersøgelse ved hjælp af et udvidet antal mus var den estøse fase af recipientmusen ikke forbundet med læsionsnummer eller mikroskopisk sygdomsscore.
Bruttolæsion nummer synes at være en dårlig surrogat markør for den samlede læsion byrde, da der var uoverensstemmelse mellem makroskopisk og mikroskopiske sygdom til stede i vævene. I 60% (n = 6) af tilfældene var der enighed mellem den makroskopiske og mikroskopiske scoring (aftale defineret som både at vise tilstedeværelse eller fravær og forskel i samlet størrelse var inden for 3 mm). I 40 % (n = 4) af tilfældene der var uenighed, idet 10% (n = 1) af tiden makroskopisk sygdom var fraværende, men mikroskopisk sygdom var til stede ved histologi, 10% (n = 1) makroskopisk sygdom blev set på trods af manglende endometriose på bekræftende histologi (Figur 5), og de resterende 20% (n = 2) var der enighed i nærværelse, men ikke omfanget af læsionsstørrelse. Makroskopisk undersøgelse for læsioner alene er således ikke tilstrækkelig til kvantificering af endometriosesygdomsbyrden.
Figur 1: Oversigt over modellen. Klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 2: Undersøgte regioner til kvantificering af læsion. Mens tarmen og andre intraperitoneale steder kan havnen læsioner, er det mere udfordrende at skelne disse groft og en udtømmende undersøgelse af maven ville være mere tidskrævende med faldende afkast. Derfor udføres en konsekvent, systematisk tilgang til høst af det komplette væv (uanset om der er grov sygdom til stede) i de tre mest almindelige regioner for endometriosedannelse: mavevæggen / peritoneum (A), bugspytkirtlen og mesenterisk fedt (B) og parauterinfedtet (C). Mærket er repræsentative billeder af mikroskopiske fund af læsioner fra hver af de tre regioner. 40x forstørrelse. Klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 3: Induktion af endometriose ved hjælp af donormus endometrium, der udtrykker rødt fluorescerende protein. (A) H&E del af læsionen. (B) Fluorescerende mikroskopi med DAPI-farvning. 40x forstørrelse. Klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 4: Repræsentative billeder af den software, der anvendes til at måle læsionsdimensionernes dimensioner og kvantificere læsionsbyrden. Klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 5: Repræsentative prøver af grove "læsioner", som ikke er endometriose ved histopatologisk undersøgelse. Klik her for at se en større version af dette tal.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Vores undersøgelse viser, at endometriose kan fremkaldes pålideligt hos mus uden brug af ovariectomy og / eller overlevelse kirurgi, og at ektopiske endometrie læsioner kan identificeres og kvantificeres ved hjælp af en standardiseret undersøgelse af maven og histologiske analyse.
Mange murin undersøgelser af endometriose udnytte kirurgisk induceret endometriose, hvor donor endometrium er syet på plads til tarmen, bugvæggen, eller andre intraperitoneal placering12,20. Dette har den fordel, at størrelsen og placeringen af det transplanterede væv standardiseres. Men ud over ekstra logistiske udfordringer overlevelse kirurgi, dette kan indføre forvirrende variabler fra selve operationen, da endometriose er en inflammatorisk sygdom, og at der i en klinisk indstilling, endometriose typisk udvikler sig forud for enhver kirurgisk procedure. Intraperitoneal injektion, på den anden side, mere præcist modeller den retrograde menstruation, der menes at forårsage størstedelen af endometriose læsioner.
Ovariectomy udføres ofte i gnavermodeller for at reducere variationen indført ved den estøse cyklus; og da endometriose er en hormonafhængig sygdom, administreres suprafysiologiske doser af østradiol derefter i disse tilfælde. Denne praksis begrænser velsagtens anvendeligheden af en musemodel på menneskelig sygdom. Vores undersøgelse viser, at ovariectomy ikke er nødvendig for pålideligt at skabe endometrioselæsioner, og at fasen af estøs cyklus ikke påvirker evnen til at etablere læsioner.
En mangel på andre intraperitoneale injektionsmodeller er afhængigheden af subjektive målinger af læsionsstørrelse eller -byrde. Selv om anvendelsen af calipre eller andre instrumenter kan give objektive foranstaltninger, registreres disse målinger på læsionshøsten og kan derfor ikke verificeres senere og kan være genstand for variabilitet inden for observatøren. I vores model kan histologiske kvantificering udføres og verificeres længe efter obduktion, hvilket betyder, at de, der udfører obduktionen, ikke behøver at have ekspertise i identifikation af bruttolæsioner og lettere blændes med hensyn til den modtagne intervention. Som vores arbejde illustrerer, kan en del af sygdommen desuden gå glip af, når man kun er afhængig af grov sygdom. Desuden kan mange formodede læsioner faktisk være fysiologiske (f.eks. lymfoide væv) eller fibrose. Endelig reducerer det variationen at tage standardiserede dele af hele anatomiske områder i hver mus yderligere. Denne tilgang til at skaffe den samme mængde væv pr. mus forhindrer den uundgåelige understregning, der ville opstå med små prøver og overscoring af store prøver, især da mikroskopisk sygdom kan være til stede.
I sidste ende tjener disse forbedringer til både at standardisere og forenkle tilgangen, hvilket resulterer i en musemodel, der kan studere endometriose på en høj gennemløbsmode. Denne model er en målbar metode til at screene for veje og narkotika mål, og vores laboratorium er i øjeblikket bruger denne model for et lægemiddel validering undersøgelse. Denne model er især nyttig, når man forsøger at bestemme den relative betydning af afvigende genekspression (eller narkotikabehandling) i donor endometrium versus modtageren peritoneal miljø. Det kan også bruges med reporter mus (som vi har vist) og immunkompromitterede og knockout mus.
Sammenfattende leverer vi flere vigtige innovationer, der giver en murinmodel med høj pålidelighed, reproducerbarhed og objektivitet i at studere endometriose. Vores tilgang fremmer området ved ikke kun at levere en ligetil, strømlinet proces for læsionsinduktion, men også en standardiseret måde at måle og rapportere data på.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne har ingen interessekonflikter at afsløre.
Acknowledgments
Vi vil gerne takke medlemmerne af Reizes-laboratoriet for deres kritiske gennemgang og indsigt under forberedelsen af manuskriptet samt Imaging- og Histology-kernerne på Lerner Research Institute for deres hjælp til dataindsamling og dataanalyse. Dette arbejde blev støttet gennem en intern tilskud finansiering gennem Research Program Udvalg på Cleveland Clinic og af et eksternt tilskud gennem Society for Reproduktiv Undersøgelse og Bayer. Forskning i Reizes Laboratory er også finansieret gennem VeloSano Bike to Cure, Center of Research Excellence i gynækologisk kræft, og gennem Laura J. Fogarty Begavet Chair for Uterine Cancer Research. Cleveland Clinic ejer tilladelsen til ophavsret til figur 1 og figur 2.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Supplies for injecting PMSG into donor mouse | |||
| 1 mL Tuberculin syringe with 27G needle | Fisher Scientific | 14-826-87 | |
| Pregnant mare serum gonadotropin | Sigma-Aldrich | 9002-70-4 | |
| Supplies for necropsy of donor mouse and tissue processing | |||
| 6” serrated forceps, curved tip | Electron Microscopy Sciences | 72993-6C | |
| 70% ethanol solution | Pharmco | 33000HPLCCS4L | 70% solution dilute ethyl acetate 200 proof |
| Analytical balance | Mettler Toledo | ME54TE | |
| Carbon dioxide | TriGas Supplier | ||
| Dissecting tray | Fisher Scientific | S14000 | |
| No. 10 disposable scalpel | Fisher Scientific | NC9999403 | |
| Scissors, curved | Electron Microscopy Sciences | 72941 | |
| Scissors, straight | Electron Microscopy Sciences | 72940 | |
| Stereo microscope | Leica Microsystems | Leica SE 4 | For tissue dissection |
| Sterile phosphate buffered saline (PBS) | Institutional core facility supplies | ||
| Surgical instrument sterilization tray | Electron Microscopy Sciences | 66112-02 | |
| Tissue culture dishes | Fisher Scientific | 08-772E | |
| Weighing dishes | Fisher Scientific | 02-202-103 | |
| Supplies for injecting into recipient mouse | |||
| 1 cc syringe | BD Biosciences | 301025 | |
| 18 G needle | Fisher Scientific | 148265d | |
| 200 uL pipette tip | Fisher Scientific | 02-707-422 | |
| Double distilled water | Institutional core facility supplies | ||
| Latex bulb | Fisher Scientific | 03-448-21 | |
| Micro cover glass slip | VWR | 48366-067 | |
| Microscope slide | Fisher Scientific | 12-544-7 | |
| Standard light microscope | Leica Microsystems | DM IL | For evaluating vaginal cytology smears |
| Supplies for harvesting tissue from recipient mouse | |||
| 10% Buffered formalin | Fisher Scientific | SF100-4 | |
| Biopsy foam pads | Fisher Scientific | 22-038-222 | |
| Precision Digital Calipers | Electron Microscopy Sciences | 62065-40 | |
| Processing/embedding cassettes | Fisher Scientific | 22-272416 |
References
- Zondervan, K. T., Becker, C. M., Missmer, S. A.
- Schwartz, K., Llarena, N. C., Rehmer, J. M., Richards, E. G., Falcone, T. The role of pharmacotherapy in the treatment of endometriosis across the lifespan. Expert Opinion on Pharmacotherapy. 21 (8), 893-903 (2020).
- Giudice, L. C.
- D'Hooghe, T. M., Debrock, S. Endometriosis, retrograde menstruation and peritoneal inflammation in women and in baboons. Human Reproduction Update. 8 (1), 84-88 (2002).
- Ahn, S. H., et al. Pathophysiology and immune dysfunction in endometriosis. BioMed Research International. 2015, (2015).
- Falcone, T., Flyckt, R.
- Vercellini, P., et al. Association between endometriosis stage, lesion type, patient characteristics and severity of pelvic pain symptoms: a multivariate analysis of over 1000 patients. Human Reproduction. 22 (1), 266-271 (2007).
- Bulun, S. E., et al.
- Brueggmann, D., et al. Novel three-dimensional in vitro models of ovarian endometriosis. Journal of Ovarian Research. 7, 17 (2014).
- Dodds, K. N., Beckett, E. A. H., Evans, S. F., Hutchinson, M. R. Lesion development is modulated by the natural estrous cycle and mouse strain in a minimally invasive model of endometriosis. Biology of Reproduction. 97 (6), 810-821 (2017).
- Martinez, J., Bisbal, V., Marin, N., Cano, A., Gómez, R. Noninvasive monitoring of lesion size in a heterologous mouse model of endometriosis. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (144), (2019).
- Pelch, K. E., Sharpe-Timms, K. L., Nagel, S. C. Mouse model of surgically-induced endometriosis by auto-transplantation of uterine tissue. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (59), e3396 (2012).
- Nishimoto-Kakiuchi, A., et al. Spontaneous endometriosis in cynomolgus monkeys as a clinically relevant experimental model. Human Reproduction. 33 (7), Oxford, England. 1228-1236 (2018).
- Nair, H. B., et al. An efficient model of human endometriosis by induced unopposed estrogenicity in baboons. Oncotarget. 7 (10), 10857-10869 (2016).
- Laganà, A. S., et al. Translational animal models for endometriosis research: a long and windy road. Annals of Translational Medicine. 6 (22), 431 (2018).
- Bellofiore, N., et al. First evidence of a menstruating rodent: the spiny mouse (Acomys cahirinus). Amercian Journal of Obstetrics and Gynecology. 216 (1), 1-11 (2017).
- Bruner-Tran, K. L., Mokshagundam, S., Herington, J. L., Ding, T., Osteen, K. G. Rodent models of experimental endometriosis: identifying mechanisms of disease and therapeutic targets. Current Women's Health Reviews. 14 (2), 173-188 (2018).
- Bilotas, M. A., et al. Interplay between endometriosis and pregnancy in a mouse model. PloS One. 10 (4), 0124900 (2015).
- Peterse, D., et al. Of mice and women: a laparoscopic mouse model for endometriosis. Journal of Minimally Invasive Gynecology. 25 (4), 578-579 (2018).
- Richards, E. G., et al. KLF11 is an epigenetic mediator of DRD2/dopaminergic signaling in endometriosis. Reproductive Sciences. 224 (8), Thousand Oaks, Calif. 1129-1138 (2017).
- Jones, R. L., Lang, S. A., Kendziorski, J. A., Greene, A. D., Burns, K. A. Use of a Mouse Model of Experimentally Induced Endometriosis to Evaluate and Compare the Effects of Bisphenol A and Bisphenol AF Exposure. Environmental Health Perspectives. 126 (12), 127004 (2018).
- Greaves, E., et al. A novel mouse model of endometriosis mimics human phenotype and reveals insights into the inflammatory contribution of shed endometrium. The American Journal of Pathology. 184 (7), 1930-1939 (2014).
- Nothnick, W. B., Graham, A., Holbert, J., Weiss, M. J. miR-451 deficiency is associated with altered endometrial fibrinogen alpha chain expression and reduced endometriotic implant establishment in an experimental mouse model. PloS One. 9 (6), 100336 (2014).
